一、乳腺癌患者血清磷脂酶A_2活性变化的研究(论文文献综述)
祝婉婷,王艳秋[1](2021)在《磷脂酶A2受体与肿瘤相关性膜性肾病的研究现状》文中研究说明膜性肾病是成人肾病综合征的常见病因,常常导致终末期肾病,磷脂酶A2受体(phospholipase A2 receptors, PLA2R)相关检测可以辅助诊断特发性膜性肾病。近年来接连发现了PLA2R相关检测呈阳性的肿瘤相关性膜性肾病的病例,并且有研究表明PLA2R对于肿瘤有一定的调控作用,为了避免激素和免疫抑制剂导致肿瘤恶化,对于肿瘤相关性膜性肾病的正确诊断显得尤为重要,不可忽视PLA2R相关检测呈阳性的膜性肾病患者合并肿瘤的可能性,这对于患者的预后具有重大意义。
崔学磊[2](2021)在《乳腺癌扩增序列BCAS1调控人左脑认知网络计算》文中进行了进一步梳理本文构建了人左脑乳腺癌扩增序列(BCAS1)反馈/上/下游激活和抑制的分子及知识网络,其与认知密切相关。本文通过整合GRNInfer和DAVID,基于BCAS1反馈/上/下游激活和抑制不同分子的共同知识,提出BCAS1调控人左脑认知的新系统机制并完成的多重亚网验证如下:整合BCAS1上游激活、下游激活癌症通路,本文提出并验证BCAS1的癌症通路诱导人左脑认知,通过其上游激活内分泌和中枢神经系统|细胞外空间|鞘脂信号转导通路|细胞运动|粘着斑存在于ZFP36L2,DDIT4,LGALS3BP亚网;或下游激活β连环蛋白结合|成神经细胞增殖的负调节|间隙连接组装|轴突再生|细胞间粘附信号转导|肌动蛋白细胞骨架存在于HSPA2,AF016004亚网。(1)BCAS1正自反馈激活癌症通路通过内分泌和中枢神经系统|细胞外空间|鞘脂信号转导通路|细胞运动|粘着斑| β连环蛋白结合|成神经细胞增殖的负调节|间隙连接组装|轴突再生|细胞间粘附信号转导|肌动蛋白细胞骨架影响认知并正向验证。(2)BCAS1正自反馈抑制蛋白激酶活性;其反馈和下游抑制蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性;其反馈和下游抑制肽基丝氨酸磷酸化;其上游和下游抑制大脑发育;其上游和反馈抑制细胞周期以负向验证。(3)通过BCAS1不同游的负自反馈激活或抑制网络,提出BCAS1限速MAPK、血管内皮生长因子受体、FCε受体、小GTP酶介导的信号转导,凋亡过程的正负调节,血小板活化,DNA模板化转录的调节、蛋白激酶、未折叠的蛋白和ATP结合,结构分子活性,内吞作用,胞液以负向验证。综上,本文提出并验证了 BCAS1影响认知的新系统机制。而这个新系统分析为人左脑认知理论和应用研究增加了新的内容,为人左脑认知机制的研究提供了重要的理论基础并具备应用价值。
王燕[3](2021)在《基于代谢/蛋白组学及网络药理学研究补阴补阳剂的抗衰老作用》文中认为目的基于UPLC-QTOF/MS代谢组学和i TRAQ定量蛋白质组学技术,观察补阳剂金匮肾气丸与补阴剂六味地黄丸对自然衰老小鼠内源性代谢物和差异蛋白的影响,分析金匮肾气丸和六味地黄丸对自然衰老小鼠的调节作用。结合网络药理学及分子对接技术,通过多数据库挖掘,进一步构建补阴补阳方剂-衰老靶点多层次网络,多维度比较分析补阳剂金匮肾气丸与补阴剂六味地黄丸干预衰老的作用特点。方法基于课题组前期研究,选用3月龄小鼠为低龄组,20月龄自然衰老小鼠随机分为老龄组、六味地黄丸组和金匮肾气丸组,每组20只(雌、雄各10只)。六味地黄丸组给药量9.75 g/kg,金匮肾气丸组给药量10.53 g/kg,低龄组、老龄组灌胃同体积的生理盐水。连续灌胃30天后,制备血浆、脾、肾组织样本用于UPLC-Q-TOF/MS代谢组学分析,制备肝组织样本用于i TRAQ定量蛋白质组学分析。网络药理学研究选用TCMSP数据库获取金匮肾气丸和六味地黄丸药物相关化学成分对应的靶点,分别在Gene Cards、OMIM、Pharm GKB、Drug Bank数据库搜索衰老靶点,通过Cytoscape_v3.7.0构建补阴补阳方剂-衰老靶点多层次网络,探究补阴补阳方剂与衰老的关联性,选择两首补益方中与靶点联系较多的共同成分及共同靶蛋白,应用Auto Dock Vina软件进行分子对接。最后结合生物信息学功能分析探讨补阴剂六味地黄丸与补阳剂金匮肾气丸调节衰老的作用机制特点。结果1代谢组学研究发现,衰老进程中各组织样本中代谢物质及其富集的代谢通路均发生改变,且不同组织样本中衰老代谢标志物及通路存在差异。雌鼠血浆、脾和肾组织样本中分别鉴定筛选出24、14和20个代谢标志物;雄鼠血浆、脾和肾组织样本中分别鉴定筛选出22、26和34个代谢标志物。对于雌鼠,脾和肾组织中相同标志物有肌苷、9,10-环氧十八烯酸、鞘氨醇3个;血浆和脾组织中相同标志物是D-赤藓糖-4-磷酸;血浆和肾组织中相同标志物是L-二氢乳清酸。对于雄鼠,脾和肾组织中相同标志物有L-谷氨酸、泛酸、焦谷氨酸、左旋棕榈酰肉碱4个;血浆和脾组织中相同标志物是二十二碳六烯酸。雌鼠脾和肾组织中相同代谢通路有8个;血浆和脾组织中相同代谢通路有4个;血浆和肾组织中相同代谢通路有5个,血浆、脾和肾组织中共同代谢通路有3个。雄鼠脾和肾组织中相同代谢通路有19个;血浆和脾组织中相同代谢通路有7个;血浆和肾组织中相同代谢通路有7个,血浆、脾和肾组织中共同代谢通路有6个。2蛋白质组学研究发现,衰老进程中差异蛋白及其富集的通路均发生改变,雌鼠低龄组(3M)与老龄组(20M)对比的肝组织中上调的差异蛋白163个,下调的差异蛋白97个;雄鼠低龄组(3M)与老龄组(20M)对比的肝组织中上调的差异蛋白165个,下调的差异蛋白91个。比较不同性别小鼠的差异蛋白,发现随着衰老进程,雌、雄鼠肝组织样本中均有155个共同差异蛋白表达上调、均表达下调的蛋白有63个。3六味地黄丸和金匮肾气丸对不同组织样本中衰老相关代谢标志物均有调节作用。对于雌鼠,六味地黄丸对血浆样本中13个衰老标志物有回调,脾组织样本中11个标志物有回调,肾组织样本衰老相关的标志性代谢物质中,六味地黄丸方对17个有回调;对于雄鼠,六味地黄丸对血浆样本中17个衰老标志物有回调,对脾组织样本中27个标志物有回调;雄鼠肾组织样本中,六味地黄丸回调的标志物有18个。金匮肾气丸能回调雌鼠血浆样本中10个衰老标志物、脾组织样本中12个标志物、肾组织样本中的15个衰老标志物;对于雄鼠,金匮肾气丸对血浆样本中20个衰老标志物有回调、对脾组织样本中25个标志物有回调、肾组织样本中的32个标志物有回调。4六味地黄丸和金匮肾气丸对衰老相关差异蛋白均有调节作用。在雌鼠肝组织样本中,六味地黄丸回调117个衰老相关差异蛋白,雄鼠肝组织样本中六味地黄丸回调46个的衰老相关差异蛋白;金匮肾气丸对雌鼠的115个衰老相关差异蛋白有回调作用,对雄鼠的58个衰老相关差异蛋白有回调作用。对于雌鼠,六味地黄丸和金匮肾气丸共同上调的衰老相关蛋白有44个,共同下调的衰老相关蛋白有66个;对于雄鼠,六味地黄丸和金匮肾气丸共同上调的衰老相关蛋白有3个。六味地黄丸和金匮肾气丸调节自然衰老雌鼠的共同通路有14个,调节雄鼠的衰老相关蛋白富集共同通路有4个。5网络药理学研究发现,六味地黄丸中46个主要成分对应靶基因190个,其中有159个与衰老相关;金匮肾气丸中48个主要成分对应靶基因194个,其中有162个与衰老相关。六味地黄丸和金匮肾气丸抗衰老靶点均能通过参与细胞对缺氧的反应、对脂多糖的反应、凋亡过程的负调控、老化、血管生成的正调控、细胞衰老、血管内皮生长因子产生的正调控、蛋白质磷酸化、细胞对胰岛素刺激的反应等生物进程调节衰老进程。6分子对接研究发现,原癌基因c-Fos(FOS)与槲皮素(quercetin),α-丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT1)与薯蓣皂素(diosgenin)、山奈酚(kaempferol)、槲皮素(quercetin),丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)与槲皮素(quercetin)结合活性最强。结论1衰老进程中伴随代谢物质和蛋白的改变,且在不同组织不同性别存在差异。2补阴剂(六味地黄丸)和补阳剂(金匮肾气丸)对不同组织样本中衰老相关代谢标志物均有调节作用,两者调节作用有差异性。补阴剂(六味地黄丸)调节自然衰老雌鼠血浆、雄鼠脾组织、雌鼠肾组织样本中代谢标志物较补阳剂(金匮肾气丸)显着;补阳剂(金匮肾气丸)调节自然衰老雄鼠血浆、雌鼠脾组织和雄鼠肾组织样本中代谢标志物较补阴剂(六味地黄丸)显着。3补阴剂(六味地黄丸)和补阳剂(金匮肾气丸)对自然衰老小鼠肝组织样本中的衰老相关差异蛋白均有回调,均能通过干预老化、细胞黏附调节、蛋白质磷酸化、凋亡过程、心肌收缩、脂质代谢过程等生物进程调节衰老。代谢组学和蛋白质组学研究联合分析发现,六味地黄丸和金匮肾气丸共同调节的差异蛋白113个,与调节的共同代谢通路中72个代谢标志物存在生物信息学关联。4网络药理学研究发现,补阴剂六味地黄丸与补阳剂金匮肾气丸发挥抗衰老作用的主要靶点与细胞对缺氧的反应、凋亡过程的负调控、炎症反应、对脂多糖的反应、老化、细胞衰老、血管内皮生长因子产生的正调控等生物进程密切相关。分子对接结果提示两首方剂中的主要活性成分与FOS、TP53、MAPK1、AKT1、MYC、JUN、MTOR有较好的亲和力。蛋白质组学和网络药理学研究结果比较发现,抗衰老靶点/蛋白的共同富集通路有黏着斑、PI3K-Akt信号通路、HIF-1信号通路、甲状腺激素信号通路、阿尔茨海默病等9条通路。
吕昌明[4](2021)在《过氧化物还原酶6在机械通气相关肺损伤中的作用及机制研究》文中认为过氧化物还原酶6(peroxiredoxin 6,PRDX6)是一种多功能蛋白,具有多个活性位点,其最重要的功能包括过氧化物酶活性和磷脂酶A2(phospholipidase A2)活性,PRDX6是唯一的单半胱氨酸非硒依赖的PRDXs,其磷脂酶A2活性是非钙离子依赖性的。PRDX6在维持肺组织氧化还原平衡,修复由活性氧物质导致的过氧化膜损伤,以及在参与调节肺部炎症和损伤中均扮演重要角色。PRDX6主要通过以下两个方面发挥功能。一方面,PRDX6通过其GSH-Px酶功能清除肺内过多的ROS,维持肺稳态,具有积极的保护作用;而当多种肺部病理损伤诱导氧化应激时,会使PRDX6的i PLA2酶活性上调,这是PRDX6介导细胞毒性和组织损伤的重要原因。迄今为止,PRDX6是否参与机械通气相关肺损伤(Ventilation-induced lung injury,VILI)尚未见报道。本研究以野生型和PRDX6敲除大鼠为研究对象,通过长时间高容量通气构建机械通气相关肺损伤大鼠模型,旨在探索PRDX6在VILI中起到的作用及可能的分子机制,为VILI的预防寻找潜在的作用靶点。首先通过组织病理学染色、炎症因子的转录水平检测和氧化应激相关产物的检测,我们发现:与野生型(wild type,WT)大鼠相比,PRDX6基因敲除(knockout,KO)鼠在生理状态下可能发生轻微的自发性炎症反应。而在进行高容量通气后,PRDX6 KO鼠肺组织损伤程度较WT鼠更严重。这提示PRDX6在VILI中是以保护作用为主导,而这种保护性作用猜测是以发挥其过氧化物酶活性来实现。为进一步明确PRDX6两种酶活性在机械通气相干肺损伤中的作用,我们在通气前腹腔注射PLA2抑制剂-MJ33干预。结果显示MJ33干预明显降低病理学指标,减弱肺组织炎症反应,减少氧化应激产物。该结果提示,在使用MJ33后,PRDX6可通过其过氧化物酶活性对VILI起到更好的保护作用。同时,这一结果也提示PLA2可能作为预防机械通气肺损伤的潜在作用靶点之一。目的:1.观察PRDX6在机械通气相干肺损伤大鼠肺组织中的变化;2.探讨PRDX6在机械通气相关肺损伤中的具体作用和可能的分子机制;3.探索以PRDX6功能活性为作用靶点的机械通气相关肺损伤预防措施。方法:取野生型SD大鼠18只(雌雄各半),随机分为三组:sham组、model组和MJ33干预组;另取PRDX6基因敲除鼠12只随机分两组:sham组和model组。Sham组只进行气管切开,model组和MJ33干预组通过大潮气量通气3小时构建机械通气相关肺损伤模型,干预组在通气前腹腔注射磷脂酶A2抑制剂MJ33。使用聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)检测PRDX6基因敲除是否成功。苏木素-伊红染色法(Hematoxylin-Eosin,HE)染色,组织湿干重比,肺泡灌洗液中细胞(bronchoalveolar lavage fluids,BALF)计数评估各组肺损伤程度,通过使用免疫蛋白印迹技术(Western Blot,WB),免疫组织化学染色(Immunohistochemistry,IHC)观察PRDX6蛋白水平变化,IHC检测相关炎症因子水平,荧光定量q PCR检测炎症因子转录水平,酶还原法检测氧化应激相关产物H2O2水平。结果:1.高容量通气会造成大鼠肺组织损伤的同时上调PRDX6蛋白水平在高容量通气模型中,我们采用HE染色,肺组织湿干重比,肺泡灌洗液(BALF)细胞计数等多种检测方法,评估肺组织损伤程度,确定VILI模型构建成功。同时使用蛋白免疫印迹技术、IHC染色观察肺组织PRDX6蛋白表达情况。结果显示,与对照组相比,模型组肺组织损伤严重,湿干比增高,BALF中细胞计数增加,肺组织PRDX6蛋白表达增高。2.敲除PRDX6基因后,高容量通气所致肺损伤加重为探究PRDX6蛋白水平升高的意义,我们构建了PRDX6基因敲除(knockout,KO)大鼠。我们发现,与野生型大鼠比较,敲除PRDX6会引起肺组织发生轻微的自发性炎症,某些指标显示KO鼠模型组肺组织损伤较WT鼠更严重。提示敲除PRDX6后,肺组织更易收到高容量通气带来的机械性和氧化应激损伤。3.MJ33干预可改善高容量通气所致的肺损伤为进一步探究PRDX6在高容量通气性肺损伤中发挥作用的机制,我们使用PRDX6磷脂酶A2(PLA2)活性抑制剂MJ33干预。结果显示,腹腔注射MJ33后,模型组大鼠肺组织损伤减轻,氧化应激水平降低。该结果提示抑制PRDX6的磷脂酶A2活性后,PRDX6可以通过降低炎症和氧化应激反应更好的保护肺组织免受高容量通气所导致的机械性肺损伤。结论:1.在高容量通气引起的VILI中,肺组织内源性PRDX6蛋白水平升高;2.在VILI时,内源性PRDX6升高具有保护作用;3.PRDX6在VILI中的保护性作用通过其过氧化物酶活性实现。
刘慧[5](2021)在《壮药国虾薄(绞股蓝)的皂苷成分及其抑制透明肾细胞癌增殖的作用研究》文中提出肾细胞癌(Renal cell carcinoma,RCC),简称肾癌,是世界上最常见的十种癌症之一,占所有新发癌症病例的3.7%。其中约35%的肾癌患者在确诊时已发生区域淋巴结或远处转移,预后较差。因此,肾癌早期诊断及治疗极为重要。透明细胞肾细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)约占肾癌病例的80%,组织学外观表现出细胞内脂质小滴积聚,并与脂质异常代谢密切相关。脂质堆积目前被认为是肾癌侵袭性的重要标志,肥胖是RCC公认的独立危险因素。因此,以脂质代谢为靶点的基础研究为肾癌的治疗提供了新的思路。国虾薄(gocaetmbaw)属于传统中药和民族药,在我国西南少数民族地区应用广泛,是传统壮医的常用草药之一。又名绞股蓝Gynostemmapentaphyllum(Thunb.)Makino属于清热毒药,苦,寒。通调三道两路,清热解毒,调气道,补阴虚;临床上可用于治疗高脂血症、动脉硬化症、炎症(慢性气管炎,肾盂肾炎)和痈疮肿毒等疾病。在壮医解蛊毒剂“七叶化蛊散”和“蛊病止血汤”中均有绞股蓝,其在祛蛊毒中作用显着。另外,绞股蓝在通调水道方剂中可治疗水道疾病,水道主要排出汗液和尿液,水道的调节枢纽为肾与膀胱。绞股蓝皂苷是主要活性成分,其体内、外的抗癌活性已被广泛报道,例如前列腺癌、胃癌、肝细胞癌、肺癌、结肠癌和乳腺癌等。然而,绞股蓝中皂苷单体在RCC中的作用和机制尚不清楚。结合壮医药理论及目前研究进展推测:壮药绞股蓝及其皂苷单体可能具有抗肾癌作用。目的以壮医药理论为指导,从脂质代谢网络及其相关上下游通路的角度出发,在细胞水平和裸鼠异种移植瘤模型中,基于网络药理学、转录组学和脂质代谢组学等技术,明确绞股蓝总皂苷(gypenosides)在体内外水平对肾癌抑制增殖作用。明确绞股蓝中活性成分并进行分离制备。结合网络药理学和转录组测序进一步明确同分异构体Gypenoside L(Gyp L)和 Gypenoside LI(Gyp LI)调控 MAPK 通路介导的花生四烯酸代谢影响肾癌发生发展的作用。为壮药制剂开发和肾癌治疗提供科学依据。方法1.绞股蓝总皂苷抑制肾癌细胞增殖并诱导凋亡作用研究。通过CCK8法、平板克隆实验和Annexin V/Propidium iodide(PI)流式细胞术等细胞表型实验证明绞股蓝总皂苷抑制增殖并诱导凋亡作用。在体内水平检测绞股蓝皂苷抑制肾癌生长的作用。构建裸鼠人肾癌皮下移植瘤模型。分溶剂组及绞股蓝总皂苷处理组,肿瘤体积约为100mm3时,每日对裸鼠进行溶剂和药物灌胃处理。每3天称量裸鼠体重,测量移植瘤长径,计算肿瘤体积。对瘤体进行HE及免疫组化染色,检测凋亡相关蛋白及花生四烯酸通路相关酶的表达。提取组织中脂质,并利用UPLC/MS/MS进行分析。2.绞股蓝活性皂苷成分分离制备与抗肾癌活性成分筛选。进一步我们对绞股蓝总皂苷中活性成分Gyp L、Gyp LI、damulin A、damulin B进行分离制备并进行抗肾癌活性筛选。以“质谱信息比对”的方式,确定绞股蓝提取物中活性成分所在部位,综合利用大孔树脂HP20、硅胶、中压制备色谱和半制备色谱等分离手段,制备绞股蓝中活性成分。并通过CCK8实验进行抑制肾癌活性筛选。3.体外探究Gyp L和Gyp LI抑制肾癌增殖的作用机制。通过平板克隆、CCK8、Hoechst 和 Annexin V/PI 细胞流式等实验,检测 Gyp L、Gyp LI对肾癌细胞增殖、克隆形成能力和凋亡特性的影响。经Rnase/PI流式细胞术检测细胞经Gyp L、Gyp LI处理后对细胞周期的影响。Western Blot验证细胞凋亡、细胞周期相关蛋白及信号通路变化。通过Swiss Target Prediction数据库进行筛选Gyp L和Gyp LI两个化合物的靶标。结合OMIM、TTD和GeneCards数据库筛选与肾癌相关的靶标。应用String数据库和Cytoscape软件构建了蛋白互作网络以识别潜在的药物靶标和相关通路。利用DAVID数据库进行GO和KEGG富集分析。采用AutoDockTools 1.5.6进行分子对接,以评估化合物与靶标之间的潜在结合能力。通过RNA测序数据分析、通路富集分析等生物信息学方法,整合两株细胞的分析结果,并结合网络药理学结果,筛选出共同关键基因和代谢通路。经RT-qPCR、Western Blot和免疫荧光技术验证差异基因及相关通路中关键蛋白。利用UPLC/MS/MS分析技术检测花生四烯酸代谢物含量变化。结果1.绞股蓝总皂苷对肾癌细胞表现出较强的抑制活性,并通过克隆形成实验证明总皂苷可抑制克隆形成能力。Annexin V/PI双染色法明确了总皂苷诱导肾癌细胞凋亡作用。因此,通过细胞表型实验明确了绞股蓝皂苷可在体外水平显着抑制肾癌增殖。在体内水平,绞股蓝总皂苷gypenosides抑制裸鼠移植瘤的生长,降低组织内花生四烯酸含量进而抑制肿瘤生长,对裸鼠肝脏、体重等无影响。2.从绞股蓝药材中共分离制备4个皂苷单体,分别为gypenoside L、gyppenoside LI、damulin A、damulin B。通过 CCK8 法对四个成分进行抗肾癌活性筛选,结果发现gypenoside L、gypenoside LI抑制肾癌活性更强,因此在接下来的研究中会以这对同分异构体作为研究对象。3.利用CCK8、克隆形成实验、Hoechst 33258染色和Annexin V/PI流式细胞术发现在769-P和ACHN细胞中绞股蓝皂苷单体Gyp L和Gyp LI能显着抑制肾癌细胞增殖。Western Blot检测细胞凋亡相关蛋白Bc12、Bax等发现,GypL与GypLI是通过上调Bax和下调Bcl2诱导肾癌细胞凋亡。接下来利用流式细胞术检测细胞周期分布,并用Western Blot 检测周期相关蛋白 CDK1、Cyclin B1、CDK2 和 Cyclin A,结果显示GypL和GypLI处理后,分别将769-P和ACHN细胞阻滞在G2/M期和G1/S期。为进一步探索绞股蓝皂苷单体影响肾癌增殖的机制,我们利用网络药理学和RNA测序分析显着差异基因和通路,发现经Gyp L、Gyp LI干预后肾癌细胞系中与花生四烯酸代谢相关的酶如 PLA2G4、COX7A、ALOX12 和 CYP2E1 等的 mRNA 显着下调,而Gyp L、Gyp LI可明显上调MAPK通路中相关基因Fos、JUN和DUSP1等。并经RT-qPCR验证、Western Blot和免疫荧光实验结果表明Gyp L、Gyp LI下调cPLA2和P-P38的表达。上调JUN、ERK和JNK的表达。同时用UPLC/MS/MS检测细胞内花生四烯酸含量下降。结论1.绞股蓝总皂苷在体内外抑制肾癌增殖及生长。2.分离制备绞股蓝中活性成分Gyp L、Gyp LI、damulin A和damulin B,证明其具有抗肾癌活性,其中Gyp L、Gyp LI活性更强。3.Gyp L和Gyp LI体外水平显着抑制肾癌增殖。4.Gyp L和Gyp LI通过下调花生四烯酸代谢相关基因,影响MAPK通路相关基因而降低细胞中花生四烯酸含量,诱导肾癌细胞凋亡。
罗景华[6](2020)在《分泌型磷脂酶A2阻断剂通过减少肺表面活性剂降解对脂多糖致新生大鼠ARDS肺损伤的保护作用》文中研究指明背景:急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)是指由心源性以外的各种肺内外致病因素导致的急性、进行性呼吸衰竭。2017年国际上首次制定新生儿ARDS标准(蒙特勒标准)。由于新生儿生物学、病理生理学等特殊性,其发病机制仍不明。我们前期收集2014年1月1日~2017年7月30日925例呼吸窘迫早产儿临床资料,基于新生儿ARDS标准进行分组,发现与新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)相比,ARDS新生儿气管内滴入肺表面活性剂后氧合改善、临床症状好转,但很快病情反复,需要多次肺表面活性剂的使用。我们推测ARDS患儿体内存在使肺表面活性剂快速灭活的成份,阻断此活性成份,可有效改善ARDS患儿临床症状。研究表明分泌型磷脂酶A2(sPLA2)能够改变肺表面活性剂磷脂的组成、降低肺泡稳定性,且为多种炎性介质的限速酶。另外研究显示ARDS时炎症反应的失控与P38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号传导通路及核因子-κB(NF-κB)的激活密切相关。故本研究将通过体内外实验观察分泌型磷脂酶A2阻断剂(Varespladib)对ARDS新生大鼠肺表面活性剂中二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、肺表面活性蛋白A(SP-A)、p38MAPK/NF-κB信号通路关键因子等表达的影响,探讨Varespladib对新生大鼠ARDS肺的保护作用及可能机制。方法:采用腹腔注射LPS构建新生儿ARDS模型,随机分成3组:对照组(38 只)、LPS 组(41 只)、LPS+sPLA2 阻断剂组(Varespladib)(40 只)。HPLC检测肺组织中DPPC含量;电子天平称量肺组织湿重,称重后干燥48h,称量干重,计算肺组织湿/干重比例;HE染色观察病理变化及计算肺组织损伤评分:ELISA检测各组血清中SP-A、IL-1、IL-4、TNF-a、sPLA2及肺泡灌洗液中SP-A表达。RT-PCR、WB检测肺组织中sPLA2、p38 MAPK及NF-κB信号通路关键因子(p38 MAPK、p-p38 MAPK,NF-κB p65、p-NF-κB p65)表达;体外LPS干预肺Ⅱ上皮细胞(A549),随机分为5组:对照组、LPS组、LPS+Varespladib 组、LPS+Varespladib 组+p38 MAPK 激动剂(Anisomycin)组、LPS+Varespladib 组+NF-κB p65 激动剂(Betulinic acid)。通过 CCK8 检测各组细胞增殖情况,RT-PCR检测p38 MAPK、NF-κB p65mRNA的表达,WB检测p38 MAPK、p-p38MAPK(Thr180+Tyr182),NF-κB p65,p-NF-κB p65(Ser536)蛋白表达。结果:LPS可减少新生大鼠肺组织中DPPC、SP-A表达及促进IL-1、IL-4、TNF-a、sPLA2等炎性因子的表达导致肺损伤;Varespladib可上调DPPC、SP-A的表达,抑制IL-1、IL-4、TNF-a、sPLA2炎性因子的表达,减轻肺损伤、降低死亡率(P<0.05);LPS可显着上调新生大鼠肺组织中P38 MAPKmRNA、NF-κB P65mRNA表达和磷酸化蛋白/总蛋白比值(p-p38MAPK/p38MAPK、p-NF-κB p65/NF-κB p65)(P<0.05),促进其磷酸化(P<0.05)。Varespladib 可下调新生大鼠肺组织中P38 MAPK、NF-κB P65mRNA表达和磷酸化蛋白/总蛋白比值(P<0.05),抑制 P38 MAPK 及 NF-κB P65 磷酸化(P<0.05)。LPS 促进肺 Ⅱ型上皮细胞系(A549)的贴壁生长、促进细胞异常增殖;LPS促进A549细胞中P38 MAPKmRNA、NF-κB P65mRNA和磷酸化蛋白/总蛋白比值增加(P<0.05),促进其磷酸化(P<0.05);Varespladib抑制肺Ⅱ型上皮细胞(A549)异常增殖、下调A549细胞中P38 MAPKmRNA、NF-κB P65mRNA和磷酸化蛋白/总蛋白比值(P<0.05),抑制 P38 MAPK 及 NF-κB P65 磷酸化(P<0.05)。结论:sPLA2阻断剂通过减少肺表面活性物的降解,减少炎性因子的释放对ARDS新生大鼠肺起保护作用;sPLA2阻断剂可能通过阻断P38MAPK/NF-κB p65信号通路减少ARDS新生大鼠肺损伤。
刘云飞[7](2020)在《脂质体用于生物传感构建及其在疾病标志物检测中的应用》文中进行了进一步梳理生物传感技术因其操作简便、灵敏度好、选择性高以及价格低廉等优点,在生物医药分析检测领域受到了广泛关注,已经成为当今生命科学的研究前沿。纳米材料是由分子大小甚至是原子尺寸的结构单体组成,具有不同于传统材料和单个分子的独特性能,而被广泛应用于现代生物传感技术中。脂质体作为一种与细胞膜相似的磷脂囊泡,具有完美的生物相容性,其内部巨大空腔结构,可以封装高浓度的生物信号分子,作为疾病标志物的简单快速、准确灵敏检测中一种理想的信号放大工具而被广泛研究。我们设计了以脂质体纳米颗粒及其功能化修饰为基础的多功能脂质体纳米探针,用于疾病标志物检测的信号放大,实现了疾病标志物的灵敏、经济、精确及便携检测。本论文分别利用电化学检测和荧光检测两种手段,以磷脂酶A2、外泌体作为检测对象,构建基于脂质体纳米颗粒信号放大的生物传感检测技术平台,实现对疾病标志物的灵敏、经济、便携检测分析。主要内容包括:1、锆离子-磷酸根配位化学辅助脂质体信号放大用于磷脂酶A2电化学分析脂蛋白相关磷脂酶A2(Lipoprotein associated Phospholipase A2,PLA2)是机体生长发育过程中异常重要的一类代谢酶。现代医学研究表明,磷脂酶A2在许多代谢性疾病的发生过程中发挥着重要作用。磷脂酶A2与肥胖相关代谢综合征、糖尿病及新兴血管炎症性疾病的发生发展息息相关,在微血管功能障碍和氧化应激中起关键作用,对于代谢性疾病的早期检测具有重要的研究价值。但是,脂类分子其特殊的疏水结构和功能,使其在传统生物传感检测中没有一种很好的生物信号转化方式。脂质体作为一种与细胞膜相似的磷脂囊泡,具有完美的生物相容性,其内部巨大空腔结构,可以封装高浓度的生物信号分子,作为疾病标志物的简单快速、准确灵敏检测中一种理想的信号放大工具而被广泛研究。本论文将半胱氨酸作为连接层,利用锆离子和磷酸根特殊的配位化学相互作用,促使脂质体纳米颗粒与电化学传感平台上的半胱氨酸相结合,并通过交流阻抗法、循环伏安法和方波伏安技术对不同界面修饰电极的电化学行为进行了分析。在这个方案中,脂质体即为磷脂酶A2的底物,为磷脂酶检测提供了基础的膜脂环境。同时,脂质体其内部巨大空腔结构,可以封装高浓度的生物信号分子,可用于直接的信号放大,实现磷脂酶A2的高灵敏度检测。实验结果表明,该电化学分析传感平台对于磷脂酶A2的定量检测拥有较好的检测性能,检测范围为10-12000pmol ml-1,在信噪比为3时计算得检测限为2.3318 pmol ml-1。2、核酸适配体介导外泌体脂质体融合用于宫颈癌细胞外泌体的检测我们设计了一种快速、简便的宫颈癌细胞外泌体的检测新方法。宫颈癌是全球危害妇女健康最常见的恶性疾病之一。外泌体作为一种胞内来源的膜包被囊泡,其富含大量的分子内容物,包括脂质、蛋白质和核酸。研究表明,外泌体与免疫反应、心血管疾病、中枢神经相关疾病的进展息息相关。目前,在传统外泌体检测中,主要基于抗体-蛋白、适配体-蛋白的特异性结合。我们通过对脂质体纳米颗粒功能化设计,利用DNA适体链特异识别捕获宫颈癌细胞外泌体并加以脂质体内信号分子的级联放大,成功实现对宫颈癌细胞外泌体的灵敏检测。实验结果表明,这种核酸适配体介导外泌体脂质体融合的生物测定方法能够灵敏地检测宫颈癌细胞外泌体,最低检测限可达4.5×103 particle/μL。基于膜融合激活的级联信号放大宫颈癌细胞外泌体检测生物传感器,其制作成本低廉,操作简单。通过对脂质体表面功能化设计,我们的方案不仅可以用于宫颈癌细胞外泌体的检测,也有望用于其他疾病的检测分析,为现代医学检测分析提供了新的思路,具有广泛的应用前景。
王林林[8](2020)在《人血浆脂蛋白相关磷脂酶A2与冠心病的关系》文中研究说明目的:研究人血浆脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)与冠心病的关系及相关影响因素。方法:选取2018年11月至2019年11月期间在青岛大学附属医院心血管内科住院的首次疑诊冠状动脉粥样硬化性心脏病的患者,入院后均行经皮冠状动脉造影检查,记录所有患者的基础资料并完善血常规、肝肾功、血脂分析、血糖、甲功等常规实验室检查,采集上肢静脉血用于Lp-PLA2的测定,Lp-PLA2水平的测定方法为酶联免疫吸附试验。经筛选共有227例患者符合标准并纳入研究,以冠状动脉造影为金标准,冠状动脉狭窄≥50%诊断为冠状动脉粥样硬化性心脏病,研究对象被分为冠心病组(160例)与正常对照组(67例),冠心病组又分为单支病变组(49例),双支病变组(56例),三支病变组(55例)三个亚组。另外,采用Gensini评分将冠心病组患者分为低分组(≤20分,51例),中分组(20~≤40,36例),高分组(>40分,73例)。比较Lp-PLA2在不同病变组间的差异。统计学方法:应用SPSS22.0统计软件分析、处理数据,计量资料以均数±标准差(?x±s)表示,两组间差异比较采用t检验,经方差齐性检验,如方差不齐则采用秩和检验;多组间的比较采用ANOVA方差分析,多重比较采用LSD-t或Tamhane’s-T2检验,相关性分析采用线性相关和多元回归分析。计数资料用绝对数表示,采用?2检验,相关性分析采用Spearman秩相关分析。以P<0.05为差异有统计学意义。结果:(1)男性、吸烟、饮酒、血apoA水平降低、肌酐及Lp-PLA2水平升高与冠心病的发生有关,其中以男性及Lp-PLA2水平对冠心病的影响最为显着,相关系数分别为0.217、0.477,P<0.05;(2)不同病变支数分组间Lp-PLA2水平不同,(F=35.087,P<0.05);对照组与单支病变组、双支病变组及三支病变组相比,Lp-PLA2水平均有差异(t值分别为-3.609、-7.121、-10.780,P<0.05),单、双支病变组与三支病变组比较差异有统计学意义(P<0.05),但单支病变组与双支病变组间的差异无统计学意义(P>0.05);(3)不同Gensini评分分组间Lp-PLA2水平不同,中分组、高分组Lp-PLA2水平均较对照组高,差异有统计学意义;低分组、中分组及高分组两两比较Lp-PLA2水平均有差异,且P<0.05;但对照组与低分组Lp-PLA2水平未见显着差异(P>0.05);(4)不同病变支数组间Gensini评分不同,Gensini评分:三支病变组>双支病变组>单支病变组>对照组(P<0.05);(5)男性、吸烟、Lp-PLA2及Gensini评分是冠状动脉病变支数的影响因素;(6)Lp-PLA2的影响因素有吸烟、饮酒、胆固醇及LDL,相关系数分别为0.161、0.211、0.253、0.306,P<0.05;(7)多元回归分析显示:Lp-PLA2是冠心病的独立危险因素;男性和Lp-PLA2与冠状动脉病变支数及Gensini评分密切相关;饮酒、LDL是Lp-PLA2的重要相关因素。结论:1.男性及Lp-PLA2水平是冠心病的主要影响因素,多元回归分析显示Lp-PLA2是冠心病的独立危险因素。2.男性、吸烟、Lp-PLA2与冠状动脉病变支数相关,其中Lp-PLA2与病变支数的相关系数为0.565。3.多元回归分析显示饮酒和LDL是Lp-PLA2的重要相关因素。
苏培[9](2020)在《基于网络药理学探讨加味玉屏风口含片治疗过敏性鼻炎机制及制备工艺与质量分析研究》文中研究表明目的:根据网络药理学探讨加味玉屏风(YPF)口含片治疗过敏性鼻炎(AR)的机制,并对其有效成分黄芪甲苷,白术内酯和多糖的最佳提取工艺及质量分析方法进行研究。方法:1.采用网络药理学对加味YPF口含片治疗过敏性鼻炎(AR)的黄芪甲苷、白术内酯等有效成分靶点、信号通路进行预测,构建加味YPF口含片有效成分-靶点-通路生物作用网络图、GO富集分析图、KEGG通路分析图并对其主要相关靶点、通路进行分析。2.对中药材提取分别采用温浸法、超声法和煎煮法提取工艺对黄芪甲苷,白术内酯和总多糖提取效果进行比较,针对不同性质的化学成分确定有效的提取工艺。3.采用HPLC-ELSD测定加味YPF口含片中黄芪甲苷的含量,采用HPLC法测定白术内酯I、II和III的含量,采用苯酚-硫酸比色法在490nm下测定总多糖的含量;同时对采用的测定方法进行方法学考察。结果:1.在加味YPF口含片中筛选出27个有效成分,涉及与AR相关19个蛋白靶点,其中黄芪17个靶点、白术8个靶点、防风14个靶点、甘草10个靶点、薄荷6个靶点。黄芪甲苷及白术内酯与AR相关的靶点分别为17个和7个,是加味YPF口含片治疗AR作用靶点较多的有效成分。主要信号通路为雌激素信号通路、抗原加工和递呈通路、NOD样受体信号通路、花生四烯酸代谢通路。加味YPF口含片通过作用上述靶点及通路而发挥抗炎、免疫调节作用,同时还通过上调上游靶基因诱导mi RNA-21表达,改善AR的Th1/Th2比值平衡,抑制NF-κB信号通路的激活来抑制炎症反应,同时YPF总糖苷也具有减少炎症及免疫调节作用。2.提取有效成分黄芪甲苷的最佳工艺为:黄芪温浸法提取,温度75℃,乙醇浓度85%,温浸时间90min,提取有效成分白术内酯的工艺为:白术粗粉乙醇超声提取,水煎煮提取多糖成分。3.黄芪甲苷的含量测定中,黄芪甲苷色谱条件为色谱柱Diamonsil C18,流动相为乙腈-水(34∶66),体积流量1.0ml/min,柱温35℃,漂移管温度105℃,载气流量2.5 L/min,进样量10μl;黄芪甲苷在0.416~1.664μg间呈良好线性关系(r=0.9996),RSD为1.89%(n=6)。白术内酯的含量测定中,采用高效液相色谱法通过波长切换,检测波长:220nm(白术内酯Ⅰ、Ⅲ),276nm(白术内酯Ⅱ)同时测定样品中白术内酯I、II和III,建立白术内酯I、II和III峰面积与浓度的关系得回归方程分别为Y=44826X-5012.5,r=0.9999;Y=61447X-8565,r=0.9999;Y=30086X-4492.1,r=0.9999,线性关系良好;白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ平均回收率分别为100.48%,99.85%,100.05%。多糖的含量测定中,以葡萄糖为对照品建立的吸光度与浓度的关系得回归方程Y=18.675X-0.0502,r=0.9998,结果表明葡萄糖的浓度在0.01~0.05μg/ml线性关系良好。上述测定方法学结果符合药典要求。结论:本文利用网络药理学预测和探讨了加味YPF口含片治疗AR作用机制,从系统生物学角度为加味YPF口含片治疗AR的作用机制提供了科学依据。处方中各有效成分提取工艺合理,制成的加味YPF口含片符合药典片剂的各项规定,完成了含片的质量标准拟定,测定方法与实验数据均稳定可靠。
陈金斌[10](2019)在《2型糖尿病血浆脂蛋白磷脂酶A2(LP-PLA2)与代谢指标和血管硬化状况的相关性分析》文中提出目的:人血浆脂蛋白相关磷脂酶A2(Lipoprotein-associated-phospholipase A2,LP-PLA2)的水平是心血管疾病(Cardiovascular diseases,CVD)的简单但实用的标志物,目前已有大量的研究表明LP-PLA2为心血管疾病独立危险因素,许多报道已将LP-PLA2活性确立为一般人群中CHD的独立预测因子[1-11]。但其在糖尿病(Diabetes mellitus,DM)领域中的相关研究目前还比较少,其和糖尿病患者糖代谢指标的相关性尚不明确。因此本研究拟以横断面研究的形式分析血浆脂蛋白磷脂酶A2(LP-PLA2)水平与糖尿病患者病程长短、糖化血红蛋白水平(Hemoglobin A1C,HBA1C)、胰岛素抵抗指数(Homeostasis model assessment of insulin resistance,HOMA-IR)的相关性,并进一步探讨其在2型糖尿病中与患者动脉硬化指数臂踝脉搏波传播速度(Brachial-ankle Pulse wave velocity,Ba PWV)是否存在有相关性。方法:选取2017年11月~2018年11月在南京医科大学第一附属医院(江苏省人民医院)内分泌科收住入院的120例糖尿病患者,根据患者的病程,分为10年以下组以及10年以上组,同时依据患者糖化血红蛋白水平分为两组:糖化血红蛋白水平>8%组和糖化血红蛋白≤8%组,对所有患者进行相关体格检查和血浆LP-PLA2测定、生化指标、糖化血红蛋白、馒头餐刺激的胰岛功能测定以及Ba PWV检查。随后分析不同病程组中LP-PLA2水平与患者其他指标的关系,以及不同糖化血红蛋白组LP-PLA2的水平及与其他指标的相关性。结果:各组间的一般情况(年龄、性别、不良嗜好史)及既往慢性病史无明显差异,而相关检查中高密度脂蛋白、甘油三酯之间的差异无统计学意义(P>0.05),对于不同病程组之间的数据对比:10年以下病程组中LP-PLA2水平、HOMA-IR水平、HBA1C、Ba PWV水平显着低于10年以上病程组,两组间差异具有统计学意义(P<0.05),而空腹血糖因所选患者均为血糖控制欠佳患者,两组间虽然有差别,但差别不具有统计学意义(P>0.05);同样,对于以糖化血红蛋白来分组的患者中,HBA1C≤8%组与HBA1C>8%组相比较,两组间的LP-PLA2、HBA1C、HOMA-IR水平、Ba PWV水平存在显着差异,差异具有统计学意义(P<0.05),除去混杂因素,HOMA-IR与LP-PLA2水平独立正相关(P<0.001)。结论:1、在2型糖尿病患者中,血浆脂蛋白相关磷脂酶A2(LP-PLA2)水平与胰岛素抵抗水平具有密切的关系,可以作为胰岛素抵抗的独立性危险因素,LP-PLA2是否在胰岛素抵抗发病机制中发挥一定作用有待进一步深入研究。2、LP-PLA2与糖尿病患者的PWV水平呈正相关,对于预测糖尿病患者的动脉硬化、大血管病变具有临床应用价值。3、LP-PLA2与糖化血红蛋白呈正相关关系,可作为糖尿病控制好坏及并发症的筛查手段,但两者间的因果关系尚需进一步确认。4、LP-PLA2与糖尿病患者病程呈正相关,随着病程的进展而逐渐升高,提示可能是病程长的2型糖尿病患者心血管风险增加的重要原因。
二、乳腺癌患者血清磷脂酶A_2活性变化的研究(论文开题报告)
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、乳腺癌患者血清磷脂酶A_2活性变化的研究(论文提纲范文)
(1)磷脂酶A2受体与肿瘤相关性膜性肾病的研究现状(论文提纲范文)
一、PLA2R与膜性肾病 |
二、肿瘤相关性膜性肾病 |
1.肿瘤相关性膜性肾病的特点 |
2.肿瘤相关性膜性肾病诊断的参考依据 |
3.肿瘤相关性膜性肾病的治疗 |
三、PLA2R与肿瘤相关性膜性肾病 |
1.血清中抗PLA2R抗体阳性的病例总结 |
2.肾脏组织穿刺活检PLA2R抗原染色阳性的病例总结 |
3.血清和肾组织PLA2R检测同为阳性的病例总结 |
四、PLA2R与肿瘤之间的关联研究 |
五、研究前景与展望 |
(2)乳腺癌扩增序列BCAS1调控人左脑认知网络计算(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
第一章 绪论 |
1.1 选题背景及意义 |
1.2 BCAS1在人左脑认知中网络研究现状 |
1.3 材料和方法 |
1.4 本文结构安排 |
第二章 BCAS1知识网络 |
2.1 BCAS1上游激活知识网络 |
2.2 BCAS1反馈激活知识网络 |
2.3 BCAS1下游激活知识网络 |
2.4 BCAS1上游抑制知识网络 |
2.5 BCAS1反馈抑制知识网络 |
2.6 BCAS1下游抑制知识网络 |
2.7 本章小结 |
第三章 BCAS1分子网络构建 |
3.1 BCAS1上游激活分子网络 |
3.2 BCAS1反馈激活分子网络 |
3.3 BCAS1下游激活分子网络 |
3.4 BCAS1上游抑制分子网络 |
3.5 BCAS1反馈抑制分子网络 |
3.6 BCAS1下游抑制分子网络 |
3.7 本章小结 |
第四章 BCAS1网络系统分析 |
4.1 BCAS1的激活串机制分析 |
4.1.1 癌症通路 |
4.1.2 酶结合 |
4.1.3 聚(A) RNA结合 |
4.1.4 RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的正调节 |
4.2 BCAS1的激活和抑制共存串机制分析 |
4.2.1 MAPK信号传转导通路 |
4.2.2 血管内皮生长因子受体信号转导通路 |
4.2.3 Fcε受体信号转导通路 |
4.2.4 小GTP酶介导的信号转导 |
4.2.5 结构分子活性 |
4.2.6 蛋白激酶结合 |
4.2.7 ATP结合 |
4.2.8 未折叠的蛋白质结合 |
4.2.9 DNA模板化转录的调节 |
4.2.10 胞液 |
4.2.11 内吞作用 |
4.2.12 凋亡过程的负调节 |
4.2.13 血小板活化 |
4.2.14 凋亡过程的正调节 |
4.3 BCAS1的抑制串机制分析 |
4.3.1 大脑发育 |
4.3.2 细胞周期 |
4.3.3 肽基丝氨酸磷酸化 |
4.3.4 蛋白激酶活性 |
4.3.5 蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性 |
4.4 本章小结 |
第五章 总结与展望 |
5.1 总结 |
5.2 展望 |
参考文献 |
致谢 |
攻读硕士期间发表的学术论文 |
(3)基于代谢/蛋白组学及网络药理学研究补阴补阳剂的抗衰老作用(论文提纲范文)
缩略语表 |
中文摘要 |
ABSTRACT |
引言 |
第一部分 文献综述 |
一、代谢组学、蛋白质组学和网络药理学技术及应用 |
二、衰老的研究进展 |
三、六味地黄丸、金匮肾气丸调节衰老的研究进展 |
第二部分 基于UPLC-Q-TOF/MS技术的代谢组学研究 |
一、血浆代谢组学 |
1 实验方案 |
2 小鼠血浆代谢物质分析 |
3 补阴(六味地黄丸)、补阳(金匮肾气丸)方剂对衰老小鼠血浆代谢物的调节 |
二、脾组织代谢组学 |
1 实验方案 |
2 小鼠脾组织代谢物质分析 |
3 补阴、补阳方剂对衰老小鼠脾组织代谢物的调节 |
三、肾组织代谢组学 |
1 实验方案 |
2 小鼠肾组织代谢物质分析 |
3 补阴(六味地黄丸)、补阳(金匮肾气丸)剂对衰老小鼠肾组织代谢物的调节 |
第三部分 基于iTRAQ的定量蛋白质组学技术探究补阴补阳方剂对自然衰老小鼠的调节作用 |
一、实验方案 |
1 实验材料 |
2 实验方法 |
3 LC-MS/MS分析条件 |
4 蛋白定性和定量分析 |
二、实验结果 |
1 蛋白定量结果 |
2 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测结果 |
3 质谱分析结果 |
4 数据分析结果 |
5 六味地黄丸对衰老相关差异蛋白的调节分析 |
6 金匮肾气丸对衰老相关差异蛋白的调节分析 |
三、小结 |
第四部分 基于网络药理学方法结合分子对接技术探究补阴补阳方剂抗衰老的作用机制 |
第一节 六味地黄丸抗衰老作用机制的网络药理学研究 |
第二节 金匮肾气丸抗衰老作用机制的网络药理学研究 |
第三节 采用分子对接技术分析补阴、补阳方剂抗衰老作用机制 |
第五部分 讨论 |
一、衰老进程中代谢物质和蛋白变化 |
1 不同组织样本中衰老代谢标志物及通路的差异比较 |
2 不同性别衰老小鼠肝组织中蛋白的变化比较 |
二、比较六味地黄丸、金匮肾气丸对衰老相关代谢标志物和差异蛋白的调节 |
1 六味地黄丸、金匮肾气丸对衰老相关代谢标志物的调节 |
2 六味地黄丸、金匮肾气丸调节衰老相关蛋白及通路的比较分析 |
3 六味地黄丸、金匮肾气丸调节衰老相关代谢标志物及蛋白的联合分析 |
第六部分 结论 |
参考文献 |
创新点说明 |
致谢 |
博士在读期间发表的论文 |
个人简历 |
(4)过氧化物还原酶6在机械通气相关肺损伤中的作用及机制研究(论文提纲范文)
英文缩略词表(Abbreviation) |
中文摘要 |
英文摘要 |
1.前言 |
2.实验材料 |
2.1 实验动物 |
2.2 抗体和试剂盒 |
2.3 主要试剂 |
2.4 主要仪器和设备 |
2.5 主要试剂及溶液配制 |
2.6 引物合成表 |
3.实验方法 |
3.1 高容量通气性肺损伤模型建立 |
3.2 取材肺组织测湿干比及灌洗液细胞计数 |
3.3 肺组织损伤病理学评分标准 |
3.4 BCA 法测溶液中蛋白浓度 |
3.5 组织固定包埋切片 |
3.6 苏木素-伊红(HE)染色 |
3.7 免疫组织化学染色(IHC) |
3.8 免疫蛋白印迹技术(WesternBlot) |
3.8.1 组织蛋白提取 |
3.8.2 SDS-PAGE凝胶配制方法 |
3.8.3 凝胶电泳 |
3.8.4 转膜 |
3.8.5 IB检测 |
3.9 REAL TIME PCR |
3.9.1 TRIZOL法提取RNA |
3.9.2 定量反转 |
3.9.3 荧光定量PCR |
3.10 氧化应激相关产物测定 |
3.10.1 组织蛋白过氧化氢含量测定 |
3.10.2 组织蛋白丙二醛含量测定 |
3.11 多聚酶链式反应(PCR) |
4.实验结果 |
4.1 高容量通气在造成大鼠肺组织损伤的同时上调 PRDX6 蛋白水平 |
4.2 敲除PRDX6 基因后,高容量通气所致肺损伤加重 |
4.3 MJ33 干预可改善高容量通气所致肺损伤 |
5.讨论 |
6.结论 |
7.参考文献 |
附录 |
个人简历 |
在读期间的研究成果 |
致谢 |
综述 PRDX6 在细胞信号和疾病中的研究进展 |
参考文献 |
(5)壮药国虾薄(绞股蓝)的皂苷成分及其抑制透明肾细胞癌增殖的作用研究(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
中英文对照及英文缩写词表 |
前言 |
第一章 绞股蓝总皂苷体内外抑制肾癌的作用 |
第一节 明确绞股蓝总皂苷抑制肾癌细胞增殖的作用 |
1.1.1 实验仪器与材料 |
1.1.2 实验方法 |
1.1.3 实验结果 |
1.1.4 讨论与结论 |
第二节 绞股蓝总皂苷体内抑制肾癌生长的作用 |
1.2.1 实验仪器与材料 |
1.2.2 实验方法 |
1.2.3 实验结果 |
1.2.4 讨论与结论 |
第二章 绞股蓝皂苷成分分离制备及抗肾癌活性筛选 |
第一节 绞股蓝皂苷主要活性成分分离制备 |
2.1.1 实验仪器与材料 |
2.1.2 实验方法 |
2.1.3 实验结果 |
2.1.4 讨论与结论 |
第二节 Gyp L、Gyp LI和damulin A、damulin B对肾癌细胞活力的影响 |
2.2.1 实验仪器与材料 |
2.2.2 实验方法 |
2.2.3 实验结果 |
2.2.4 讨论与结论 |
第三章 GypL和Gyp LI调控MAPK通路介导的花生四烯酸代谢抑制肾癌增殖的作用研究 |
第一节 Gyp L和Gyp LI抑制肾癌细胞增殖并诱导细胞凋亡 |
3.1.1 实验仪器与材料 |
3.1.2 实验方法 |
3.1.3 实验结果 |
3.1.4 讨论与结论 |
第二节 网络药理学及分子对接预测Gyp L和Gyp LI抗肾癌作用靶标 |
3.2.1 实验仪器与材料 |
3.2.2 实验方法 |
3.2.3 实验结果 |
3.2.4 讨论与结论 |
第三节 转录组学预测Gyp L和Gyp LI抑制增殖的差异基因和通路 |
3.3.1 实验仪器与材料 |
3.3.2 实验方法 |
3.3.3 实验结果 |
3.3.4 讨论与结论 |
第四节 Gyp L和Gyp LI诱导肾癌细胞凋亡的机制研究 |
3.4.1 实验仪器与材料 |
3.4.2 实验方法 |
3.4.3 实验结果 |
3.4.4 讨论与结论 |
第五节 回补花生四烯酸逆转Gyp L和Gyp LI诱导细胞凋亡作用 |
3.5.1 实验仪器与材料 |
3.5.2 实验方法 |
3.5.3 实验结果 |
3.5.4 讨论与结论 |
第四章 总结与展望 |
4.1 总结 |
4.2 展望 |
综述 天然产物通过花生四烯酸代谢通路预防和治疗肿瘤 |
参考文献 |
致谢 |
攻读学位期间发表的学术论文目录 |
(6)分泌型磷脂酶A2阻断剂通过减少肺表面活性剂降解对脂多糖致新生大鼠ARDS肺损伤的保护作用(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
前言 |
第一部分: 外源性肺表面活性剂在新生儿ARDS中的疗效观察 |
1 材料 |
2 方法 |
3 结果 |
4 讨论 |
5 结论 |
第二部分: 分泌型磷脂酶A2阻断剂对新生大鼠ARDS肺损伤作用的体内实验研究 |
1 实验材料及方法 |
2 结果 |
3 讨论 |
4 结论 |
第三部分: 分泌型磷脂酶A2阻断剂在新生大鼠ARDS肺损伤中保护作用的体外实验 |
1 实验材料及方法 |
2 实验结果 |
3 讨论 |
4 小结 |
全文总结 |
参考文献 |
综述 分泌型磷脂酶A2及其在ARDS中的研究进展 |
参考文献 |
中英文缩写简要 |
攻读学位期间成果 |
致谢 |
(7)脂质体用于生物传感构建及其在疾病标志物检测中的应用(论文提纲范文)
中文摘要 |
ABSTRACT |
绪论 |
1 生物传感技术 |
1.1 电化学生物传感技术 |
1.2 比色生物传感技术 |
1.3 荧光生物传感技术 |
2 脂质体材料 |
2.1 脂质体材料的分类 |
2.1.1 无修饰脂质体 |
2.1.2 小分子修饰脂质体 |
2.1.3 抗体修饰脂质体 |
2.1.4 核酸修饰脂质体 |
2.2 脂质体材料在生物传感中的应用 |
2.2.1 脂质体材料在比色信号生物传感中的应用 |
2.2.2 脂质体材料在荧光信号生物传感中的应用 |
2.2.3 脂质体材料在电化学信号生物传感中的应用 |
2.2.4 脂质体材料在其他生物传感中的应用 |
2.3 脂质体材料构建诊断生物传感器的优点 |
3 疾病标志物 |
3.1 生物大分子 |
3.1.1 蛋白质 |
3.1.2 酶 |
3.1.3 核酸 |
3.2 循环肿瘤细胞 |
3.3 外泌体 |
3.3.1 外泌体的生物起源和结构 |
3.3.2 外泌体的生物功能 |
3.3.3 外泌体检测的研究现状 |
4 本论文的主要研究内容 |
5 参考文献 |
第一章 锆离子-磷酸根配位化学辅助脂质体信号放大用于磷脂酶A2 电化学分析 |
1.1 引言 |
1.2 实验部分 |
1.2.1 实验试剂 |
1.2.2 反应溶液 |
1.2.3 实验仪器 |
1.2.4 实验方法 |
1.2.4.1 脂质体的制备与表征 |
1.2.4.2 L-Cys修饰电极的制备 |
1.2.4.3 电极表面PLA2 活性检测 |
1.2.4.4 电化学检测 |
1.3 实验结果和讨论 |
1.3.1 实验原理 |
1.3.2 脂质体合成表征 |
1.3.3 电极修饰表征 |
1.3.3.1 裸金电极的循环伏安图 |
1.3.3.2 L-Cys修饰电极的循环伏安图 |
1.3.3.3 阻抗图谱变 |
1.3.4 实验条件优化 |
1.3.5 实验可行性与特异性验证 |
1.3.6 PLA2 活性检测 |
1.4 结论 |
1.5 参考文献 |
第二章 核酸适配体介导外泌体脂质体融合用于宫颈癌细胞外泌体的检测 |
2.1 引言 |
2.2 实验材料 |
2.2.1 实验试剂 |
2.2.2 反应溶液 |
2.2.3 实验仪器 |
2.2.4 实验方法 |
2.2.4.1 细胞培养与外泌体提取 |
2.2.4.2 宫颈癌细胞外泌体预处理 |
2.2.4.3 脂质体制备 |
2.2.4.4 脂质体纳米探针预处理 |
2.3 实验结果和讨论 |
2.3.1 实验原理 |
2.3.2 外泌体及脂质体表征 |
2.3.3 外泌体脂质体融合验证 |
2.3.3.1 荧光共定位 |
2.3.3.2 钙黄绿素荧光验证 |
2.3.4 实验条件优化 |
2.3.5 实验灵敏度与特异性验证 |
2.4 结论 |
2.5 参考文献 |
总结与展望 |
附录 |
致谢 |
(8)人血浆脂蛋白相关磷脂酶A2与冠心病的关系(论文提纲范文)
摘要 |
abstract |
引言 |
研究对象与方法 |
1.研究对象 |
1.1 研究对象及分组 |
1.2 排除标准 |
2.研究方法 |
2.1 资料采集 |
2.2 统计学方法 |
结果 |
1 各组基线资料比较 |
1.1 对照组与冠心病组的比较 |
1.2 不同病病变支数分组的比较 |
2.各亚组间Lp-PLA2水平的比较 |
3.冠心病、L-pPLA2与各变量间的关系 |
讨论 |
1 冠心病的危险因素 |
2 Lp-PLA2与冠心病的关系 |
3 Lp-PLA2的相关因素 |
结论 |
参考文献 |
综述 |
参考文献 |
攻读学位期间的研究成果 |
附录 |
缩略词表 |
致谢 |
(9)基于网络药理学探讨加味玉屏风口含片治疗过敏性鼻炎机制及制备工艺与质量分析研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
缩略语/符号说明 |
前言 |
研究现状、成果 |
研究目的、方法 |
一、AR相关的加味YPF口含片有效成分的网络药理学研究 |
1.1 实验材料 |
1.2 实验方法 |
1.3 实验结果 |
1.4 加味YPF口含片治疗AR潜在主要靶点通路分析 |
1.5 加味YPF口含片治疗AR潜在药理机制 |
1.6 小结 |
1.7 讨论 |
二、加味 YPF 口含片中有效成分提取工艺研究 |
2.1 材料与仪器 |
2.2 方法与结果 |
2.3 小结 |
2.4 讨论 |
三、加味 YPF 含片中有效成分的含量测定 |
3.1 材料与仪器 |
3.2 实验方法与结果 |
3.3 小结 |
3.4 讨论 |
结论 |
参考文献 |
综述 基于网络药理学中药复方制剂治疗各种疾病作用机制的研究进展 |
综述参考文献 |
致谢 |
个人简历 |
(10)2型糖尿病血浆脂蛋白磷脂酶A2(LP-PLA2)与代谢指标和血管硬化状况的相关性分析(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
前言 |
1、材料与方法 |
2、结果 |
3、结论 |
4、讨论及限制 |
参考文献 |
文献综述 LP-PLA2相关性分析 |
综述参考文献 |
附录 |
缩略词表 |
计算公式 |
攻读学位期间发表文章及参与课题情况 |
致谢 |
四、乳腺癌患者血清磷脂酶A_2活性变化的研究(论文参考文献)
- [1]磷脂酶A2受体与肿瘤相关性膜性肾病的研究现状[J]. 祝婉婷,王艳秋. 临床肾脏病杂志, 2021(07)
- [2]乳腺癌扩增序列BCAS1调控人左脑认知网络计算[D]. 崔学磊. 北京邮电大学, 2021(01)
- [3]基于代谢/蛋白组学及网络药理学研究补阴补阳剂的抗衰老作用[D]. 王燕. 黑龙江中医药大学, 2021(01)
- [4]过氧化物还原酶6在机械通气相关肺损伤中的作用及机制研究[D]. 吕昌明. 安徽医科大学, 2021(01)
- [5]壮药国虾薄(绞股蓝)的皂苷成分及其抑制透明肾细胞癌增殖的作用研究[D]. 刘慧. 中央民族大学, 2021(10)
- [6]分泌型磷脂酶A2阻断剂通过减少肺表面活性剂降解对脂多糖致新生大鼠ARDS肺损伤的保护作用[D]. 罗景华. 南方医科大学, 2020(06)
- [7]脂质体用于生物传感构建及其在疾病标志物检测中的应用[D]. 刘云飞. 南京大学, 2020(12)
- [8]人血浆脂蛋白相关磷脂酶A2与冠心病的关系[D]. 王林林. 青岛大学, 2020(01)
- [9]基于网络药理学探讨加味玉屏风口含片治疗过敏性鼻炎机制及制备工艺与质量分析研究[D]. 苏培. 天津医科大学, 2020(06)
- [10]2型糖尿病血浆脂蛋白磷脂酶A2(LP-PLA2)与代谢指标和血管硬化状况的相关性分析[D]. 陈金斌. 南京医科大学, 2019(04)
标签:成分分析论文; 肺损伤论文; 血清蛋白论文; 金匮肾气丸的作用论文; 血浆蛋白论文;