一、“鸭传染性肿头症”病毒对雏鸭致病性和卵黄抗体研究（论文文献综述）
于杰,柳林,李英英[1]（2013）在《新型鸭瘟的诊断和防治》文中进行了进一步梳理新型鸭瘟（newduck plague）是一种由新型疱疹病毒引起的传染病。该病同鸭瘟的临床症状和病理变化都极为相似,使用已有的鸭瘟疫苗、高免血清、高免卵黄抗体及药物均不能有效防治该病,给我国养鸭业造成了严重的经济损失。对山东省某养鸭场发病症状比较明显的病鸭采取临床剖检、病理组织学观察、病毒的分离鉴定以及血清学检查等诊断措施,确诊该鸭场病鸭感染的疾病是新型鸭瘟。详细介绍了该次新型鸭瘟的诊断过程,旨在为生产中新型鸭瘟的诊断提供参考。
李木子,蒋文灿,刘雪梅,李晓艳,倪粒琼[2]（2011）在《鸭肿头败血症的研究进展》文中提出鸭肿头败血症是一种以发病急、传播快、死亡率高为特点的新型、烈性鸭病毒性传染病。从这一新型病毒性传染病的病原学、流行病学、临床特征、病理学特征、诊断方法和预防等方面进行了综述,为进一步了解和深入研究该病提供参考。
蒋文灿,盛敏[3]（2010）在《鸭肿头败血症病毒的生物学特性》文中进行了进一步梳理为了进一步明确近年来在四川广汉、华阳等养鸭地区流行的鸭肿头败血症（Duck swollen head septicemia）的病原特征,对分离的鸭肿头败血症病毒（Duck swollen head septicemia virus,DSHSV）XD株、NF株进行培养特性、毒力、形态、理化性质、与鸭瘟病毒抗原相关性等方面的生物学特性研究。结果证明:该病毒能在鸭胚上繁殖并传代,不能在鸡胚、鸭胚成纤维细胞、鸡胚成纤维细胞上繁殖。鸭胚半数致死量为10-5.78/0.2 mL。病毒粒子呈球形,大小65～70 nm,无囊膜。核酸类型为ds RNA。基因组大于19 kb。病毒不能凝集鸡、鸭、鹅、兔、绵羊红细胞。对氯仿不敏感,对热有一定抵抗力,对酸碱有较强抵抗力。与鸭瘟病毒无抗原相关性。
张小飞[4]（2010）在《鸭病毒性肝炎弱毒疫苗（A66株）的研制》文中研究说明鸭病毒性肝炎（Duck Viral Hepatitis, DVH）是雏鸭的一种高度致死性急性传染病,以肝炎为其主要特征,病原是鸭肝炎病毒（Duck Hepatitis Virus, DHV）。我国流行的鸭肝炎以1型DHV （DHV1）为主。疫苗接种是预防本病最有效的措施,我国目前尚无商品化疫苗。本研究以1型DHV A66弱毒株第60代次（E60）鸡胚毒为始发毒,经鸡胚克隆化选育获得DHV A66株,在对A66株的安全性、免疫原性、纯净性和遗传稳定性检测的基础上,进一步开展鸭病毒性肝炎活疫苗（A66株）的安全性和效力试验、生产工艺等研究及中试生产工作,并在农业部行政审批许可后进行了疫苗临床试验,最终完成了鸭病毒性肝炎活疫苗（A66株）研制。1、DHV A66弱毒株的克隆筛选以1型DHV A66弱毒株第60代次（E60）鸡胚毒为始发毒,采用有限稀释法接种SPF鸡胚进行3次克隆化筛选、2次纯培养和1次扩大培养获得66代次（E66）种毒,通过毒价、毒力、免疫原性、特异性、纯净性等测定,表明克隆纯化的E66代种毒符合疫苗研制毒种要求,可作为鸭病毒性肝炎活疫苗研发的原始毒种,并命名为DHV A66株。2、DHV A66株种毒的安全性、免疫原性、遗传稳定性和纯净性研究以DHV A66株E66代次种毒,分别经皮下注射和口服途径大剂量接种1日龄敏感雏鸭各10只,接种雏鸭临床观察正常,剖检观察肝脏等内脏组织无肉眼可见病理变化,肝脏等组织切片检查无异常。再以该种毒经皮下注射途径大剂量接种1日龄敏感雏鸭20只,于接种后不同时间采集血液进行细胞计数、血沉测定、血红蛋白测定等血常规检查,同时取血样分离血清进行反映肝脏机能状态的谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、谷氨酰胺转移酶（GGT）、碱性磷酸酶（ALP）等血清酶和胆红素测定。结果显示：试验鸭的血常规及四种血清酶和总胆红素（TBIL）测定值与健康对照鸭均无明显差异,但强毒对照鸭于接毒后24-36h的测定值与健康鸭有显着（P<0.05）或极显着差异（P<0.01）。毒株遗传稳定性方面,以DHV A66株E66代次的种毒,每次用1～3日龄敏感雏鸭10只,连续传代回归10次进行毒力返强试验。结果各回归代次雏鸭肝组织能稳定分离到DHV,且组织含毒量相对稳定在103.5-4.8ELD50/ml范围；各代次回归试验鸭健康,剖检观察正常,病理组织学检查正常；各代次试验鸭的血液常规指标、四种主要血清酶和总胆红素（TBIL）值均正常。对DHV的A66-F10与F0全基因组序列比对和分析表明,全基因组核苷酸序列没有发生插入或缺失,两者仅有6个核苷酸差异,同源性达99.9%以上,ORF氨基酸序列未发生改变。充分证明DHV A66株具有良好的安全性和遗传稳定性。以DHV A66株种毒经9～10日龄SPF鸡胚连续传代至E80代,通过对不同代次种毒的病毒含量及对1日龄雏鸭的毒力和免疫力的测定,结果表明：不同代次种毒毒价在108.10-8.50ELD50/ml之间,皮下注射免疫的半数免疫量(IMD50在106.10-6.40IMD50/ml范围,表明A66株免疫原性稳定而良好。因此,确定E66为原始种子代次,基础种子代次为E67～72,种子继代培养不超过3代,即生产用抗原最高代次为E75。通过对A66株E66、E70和E75代次鸡胚混合毒的最小免疫量测定,并取A66株鸡胚传代较高代次E75以不同倍数最小免疫量进行免疫试验,确定A66株的最小免疫量为103.3ELD50；根据免疫试验结果及其它因素综合考虑,确定A66株的免疫剂量（即使用剂量）应≥104.3ELD50。按照现行《中华人民共和国兽药典》[16]规定方法,对DHV A66株种毒E66、E70代毒种进行无菌检验和外源病毒检验,结果细菌和支原体检验阴性,12种现行《中华人民共和国兽药典》[16]规定检测的外源病毒和鸡传染性贫血病毒（CIAV）也全部为阴性,表明DHV A66株毒种纯净。3、检验用鸭肝炎强毒株（W株）的系统鉴定通过对DHV W强毒株接种雏鸭复壮,进行病毒传代、毒力及其稳定性测定、血清学特异性及与DHV R85952强毒参考株进行毒力比较试验等,认定DHV W毒株可作为检验用强毒。对W毒株的攻毒剂量和保存期试验表明：W株的攻毒剂量1～7日龄选用103.0LD50/鸭,7～10日龄选用104.0LD50/鸭；W株的肝组织毒冻干后在-20℃和-70℃中保存期分别可达5年和8年。4、鸭病毒性肝炎活疫苗（A66株）的安全性、效力和保存期研究对5批实验室制备的DHV（A66株）活疫苗,分别通过皮下注射、口服途径对1日龄敏感雏鸭进行一次单剂量接种、单剂量重复接种和一次大剂量接种的安全性试验。临床观察试验雏鸭的精神、采食、饮水、生长、增重等均正常,肝功能检查、解剖观察肝脏等内脏组织器官及肝脏组织切片检查无异常。试验结果表明：A66活疫苗对雏鸭使用安全性好、无副作用。用A66株最高代次（E75代）生产用毒种制备的三批疫苗,每批疫苗分别经皮下注射、肌肉注射、饮水和口服途径免疫易感雏鸭各10只。试验结果表明：经皮下和肌肉注射途径免疫雏鸭,2-3天就能产生免疫保护力；经口服、滴鼻和饮水途径免疫雏鸭,5天能产生良好的保护效果。以该三批疫苗1/10使用剂量免疫1日龄易感雏鸭5天后（120h）用强毒株进行攻毒,免疫组雏鸭全部保护,表明用A66株最高代次毒种制备的疫苗仍具有良好的免疫效力。将疫苗按免疫剂量接种1日龄易感雏鸭,雏鸭的免疫期至少达60天以上,即一次免疫就能有效保护雏鸭安全度过易感期（6周龄以内雏鸭）。采用10倍免疫剂量的DHV（A66株）活疫苗,分别经皮下注射和口服途径接种1日龄易感雏鸭各20只,5日后随机取出其中10只与20只1日龄易感雏鸭进行第1代同居饲养5日,再取10只同居感染鸭与20只1日龄易感雏鸭进行第2代同居感染试验,如此连续进行5代次的同居感染试验。通过定时采集接种鸭及同居鸭肛拭子样品进行PCR检测,测定DHV A66株的感染和排毒情况；对接种或同居5日的试验鸭进行攻毒保护试验,测定同居感染的保护情况。结果表明：A66株活疫苗经皮下注射和口服途径接种雏鸭,均可以通过粪便向体外排泄病毒；同居易感雏鸭可经粪—口途径接触感染,感染雏鸭可获得鸭肝炎的免疫保护；同居感染现象随着同居代次的增加,同居感染的排毒时间逐渐延迟、感染率逐步下降,至同居5代时这种同居感染现象基本终止。选择经鸭肝炎疫苗免疫的种鸭所产种蛋孵化的雏鸭,采用鸡胚中和试验测定其鸭肝炎母源抗体水平；对不同母源抗体水平的雏鸭于1日龄时用1羽份疫苗进行免疫,分别于免疫后2天和5天用1型DHV W株强毒攻击,结果表明,母源抗体水平对鸭肝炎活疫苗免疫效果无明显影响。以制备的3批A66株活疫苗分别经过不同保存温度、不同保存期后,测定其鸡胚半数致死量（ELD50）的变化情况,判定疫苗的稳定性；通过对疫苗的免疫攻毒保护试验、物理性状观察、水分及真空度测定,以确定疫苗的保存期。试验结果表明DHV （A66株）活疫苗在-15℃条件下可保存2年以上,2-8℃条件下可保存1年以上；疫苗用生理盐水稀释后在室温（25）℃条件下存放8h毒价下降不明显。5、鸭病毒性肝炎活疫苗（A66株）的生产工艺研究和中试生产选择蔗糖、明胶、蛋白（氨基酸）等组份,与真空度、升温速度等因素,通过水平正交设计试验进行冻干保护剂筛选和冻干曲线的优化研究。根据试验结果确定A66株活疫苗生产工艺为：种毒以100～1000倍稀释、经尿囊腔途径接种9～11日龄SPF鸡胚,0.2ml/胚,收获接种后36～72h死亡鸡胚组织（胚体+胚膜+胚液）,用组织捣碎机匀浆3～5分钟后保存；优化的保护剂配方和冻干条件为：5%蔗糖、1.5%明胶、6%甘氨酸的保护剂,真空度0.02mbar,升温速度为1.5℃/min。抗原与保护剂1：1比例,在冻干曲线：-40℃3h;-25℃13h;-10℃4h;25℃4h时,疫苗冻干效果最佳。按照确定的保护剂和冻干条件验证3批产品,其物理性状、真空度、残余水分含量均符合《中华人民共和国兽药典》[16]规定,3批疫苗冻干前后毒价损失≤100.6滴度。按照本研究制定的《鸭病毒性肝炎活疫苗中间试制规程及质量标准》（草案）,在南京天邦生物科技有限公司进行中试生产了5批鸭肝炎活疫苗（A66株）,共计605万羽份。5批疫苗按照中间试制规程和质量标准进行检验,结果物理性状、无菌检验、支原体检验、病毒含量、安全检验、效力检验、剩余水分测定、真空度测定均符合标准。表明该疫苗生产工艺合理,产品质量稳定,适合规模化生产。6、鸭病毒性肝炎活疫苗（A66株）临床试验2008年12月27日获得农业部兽用生物制品临床试验批件（批件号：200844）后,自2009年2月至6月在安徽省5个鸭场（企业）应用5个批次的中间试制产品进行临床试验,试验共计免疫雏鸭5.9万羽。经临床观察、攻毒试验、抗体检测及生产性能的统计分析,结果表明：鸭病毒性肝炎活疫苗（A66株）对免疫雏鸭安全、有效、无不良反应。
李传峰[5]（2010）在《鸭病毒性肿头出血症病毒感染特性及其免疫检测技术的研究》文中进行了进一步梳理1998-2003年四川省、重庆市、贵州省和云南省等养鸭省份发生了一种以鸭头肿胀、眼结膜充血、出血,全身皮肤广泛性出血,肝肿胀呈土黄色,并伴有出血斑点,体温43℃以上,排草绿色稀粪等特征性的急性病毒性传染病。该病目前给养鸭业带来了巨大的经济损失。程安春等通过流行病学调查、临床症状和病理学变化观察、病理组织学检查、病原的分离鉴定、人工感染试验、电镜观察、防治试验,确诊为一种新的鸭病,并命名为“鸭病毒性肿头出血症（Duck viral swollen head hemorrhagic disease, DVSHD）”。国内其他学者也称之为“鸭传染性肿头症”或“鸭肿头败血症”。本病与鸭瘟在临床特征和尸检变化上有许多相似之处,鸭病毒性肿头出血症病毒（Duck swollen head hemorrhagic disease virus, DSHDV）是该病的病原。目前有关该病的研究资料报道较少,特别是有关DSHDV感染特性以及特异、敏感、快速的检测方法等更是缺乏深入研究。因此,本文对鸭病毒性肿头出血症病毒的对成年鸭和鸭胚感染特性以及相关的免疫检测技术进行了一系列的研究。本研究获得以下系列结果：1.鸭病毒性肿头出血症实验感染模型的建立：本实验用鸭病毒性肿头出血症病毒强毒（HY-99株）作为种毒,通过肌注、口服和滴鼻三种方式感染28日龄健康鸭,攻毒后每天观察临床症状和发病鸭及死亡鸭的剖检变化。结果显示,感染鸭出现以体温升高、头颈肿胀、眼结膜充血、出血、排灰白色或草绿色稀粪为主要特征的临床症状和肝脏肿大、出血呈土黄色、免疫器官和消化道严重充血、出血为主要特征剖检变化。结果表明,临床症状和剖检变化与自然感染鸭基本一致,本实验成功构建了鸭病毒性肿头出血症实验感染模型。2. DSHDV强毒人工感染鸭组织病理学发展规律研究：本研究对实验感染模型中感染鸭各个组织器官进行了动态组织病理学变化观察。结果表明,实验感染模型中三组鸭出现的组织病理学变化基本一致,但时间存在差异：肌注组鸭于感染后72h内、滴鼻组和口服组144h内组织病理学变化以充血、出血和炎性细胞浸润为主；肌注组鸭于感染72h后、滴鼻组和口服组144h后组织病理学变化以弥漫性出血、大小不等坏死灶或粘膜上皮细胞的坏死为主。免疫器官、消化腺、消化道、呼吸器官、心脏和肾脏等是主要的靶器官。这表明DSHDV是一种泛嗜性病毒,对全身各个组织器官具有严重破坏作用。3. DSHDV强毒在人工感染鸭宿主细胞内的形态发生学和超微病理学研究：电镜下,完整DSHDV粒子呈圆形或椭圆形,无囊膜,直径为70nm-85nm。病毒粒子仅出现在感染细胞的胞浆中。电镜下,可观察到病毒粒子于感染4h后吸附于法氏囊靶细胞表面,并通过细胞的内吞作用进入细胞后,在胞浆内脱去双层衣壳,随后在胞浆内复制并合成病毒相关蛋白。这些合成结构蛋白、非结构蛋白及成熟或不成熟的病毒粒子在胞浆内聚集成圆形、椭圆形或不规则形的包涵体结构。感染后24h-72h,病毒核酸在这些基质上组装和成熟形成完整的病毒粒子。感染144h后,成熟病毒通过细胞的崩解而释放到细胞间隙。DSHDV强毒人工感染成年鸭后能够引起宿主细胞明显的超微结构变化（坏死和凋亡）。该病毒的主要靶器官包括法氏囊、胸腺、脾脏、肝脏、消化道和肾脏等器官。病毒侵染靶细胞主要有：淋巴细胞、肝细胞、成纤维细胞、巨噬细胞、上皮性网状细胞、粘膜上皮细胞、肠腺细胞等。4. DSHDV强毒致人工感染鸭和鸭胚宿主细胞凋亡的研究：通过TEM法观察发现,DSHDV经尿囊腔感染10日龄鸭胚后尿囊膜上皮细胞、肝细胞、肠道上皮细胞和心肌细胞发生凋亡。凋亡细胞时间分布在感染后24h-96h,同时在部分宿主细胞的胞浆内发现少量病毒粒子。本研究利用HE染色法、TEM法和TUNEL法三种方法均观察到DSHDV感染诱导鸭宿主细胞的凋亡。发生凋亡的器官包括法氏囊、胸腺、脾脏、肾脏、肝脏、心脏、食管、腺胃和肠道。宿主细胞的凋亡指数从感染后2h到72h逐渐增加,72h达到最高值。感染72h后,濒死鸭和死亡鸭宿主细胞死亡以典型坏死为主。DSHDV感染诱导的细胞凋亡在DVSHD的致病机制中起到重要作用。5.免疫酶组织化学检测DSHDV抗原方法的建立和应用：本研究以兔抗DSHDVIgG作为一抗、HRP-羊抗兔IgG作为二抗建立并优化了在石蜡切片中检测DSHDV抗原的间接免疫酶SP法,研究证实本方法具有较高的特异性和敏感性。该方法的应用研究揭示,三组鸭感染DSHDV后,肌注组（4h）、滴鼻组（12h）和口服组（24h）依次首先从法氏囊组织中检测阳性信号,随后抗原在多个组织中检出,包括免疫器官、消化腺、消化道、肾脏、心脏、肺脏和气管等。DSHDV侵染的靶细胞主要包括淋巴细胞、巨噬细胞、网状细胞、粘膜上皮细胞、肝细胞、间质细胞、腺泡细胞、肠腺细胞、肾小管上皮细胞、心肌细胞和柱状上皮细胞等。6.间接ELISA检测鸭病毒性肿头出血症抗体方法的建立和应用：本研究以浓缩纯化的DSHDV作为包被抗原,建立了检测DSHDV抗体的间接酶联免疫吸附试验（ELISA）。试验最佳反应条件为：抗原最佳稀释度为1：40,高免血清为1：80稀释,最佳反应时间为60min；酶标抗体为1：2000稀释,最佳反应时间为60min；封闭液为1%BSA-PBST,封闭时间为60min；包被抗原最佳工作条件为37℃孵育1h后过夜；底物的最佳反应时间为37℃孵育15min。本实验建立的方法可成功应用于临床样品的检测和鸭免疫后抗体水平的评估。因此,本方法具有良好的特异性、稳定性、可重复性和较高的敏感性,可用于DVSHD抗体的检测。
蒋文灿,郑林英[6]（2010）在《检测鸭肿头败血症病毒的间接夹心ELISA的建立及应用》文中研究说明为了快速诊断和检测鸭肿头败血症病毒抗原,用分离自典型鸭肿头败血症的XD株病毒,制备鸭抗XD IgG、兔抗XD IgG,建立了检测鸭肿头败血症病毒（DSHSV）抗原的间接夹心ELISA法。试验的最佳条件为:抗体包被量为8μg/mL,封闭液为0.5%明胶,抗原孵育条件为37℃1.5 h,兔抗XD病毒IgG浓度5μg/mL,酶标羊抗兔抗抗体浓度为1∶2000,洗涤液为0.02 mol/LpH7.2 PBS。阴阳性结果判定的临界OD值为0.412。重复性试验显示变异系数小于10%。建立的间接夹心ELISA法不与鸭肿头败血症阴性抗原、鸭大肠杆菌抗原、鸭瘟抗原、鸭肝炎病毒抗原呈现交叉反应。敏感性比琼脂扩散实验高1280倍。包被的酶标板在4℃至少可以保存3周。用此方法对人工感染鸭组织脏器中鸭肿头败血症病毒检测结果显示,心、肝、肺、肾检出率最高,脑、脾、胰次之。
蒋文灿,盛敏,安婷,刘巍申,刘爽,徐巨[7]（2010）在《鸭肿头败血症（DSHS）流行病学调查及诊治》文中认为2000年以来,四川广汉、华阳等养鸭密集地区流行鸭肿头败血症（Duck Swollen Head Septice-mia,DSHS）。本研究对临床诊治的10余万鸭肿头败血症病鸭进行了流行病学、临床症状和病理变化分析,用4种防治方案对病鸭进行防治效果观察。结果显示,不同年龄、品种的鸭均可发病,无性别及季节性差异,发病急,发病率达90%100%,死亡率达40%80%。从典型病例分离的2株病毒（DSHS-XD株和DSHS-NF株）,与鸭瘟病毒无抗原相关性。用鸭瘟弱毒疫苗紧急预防,鸭瘟卵黄抗体紧急治疗,无明显效果。用鸭肿头败血症XD株蜂胶灭活苗紧急预防,或同时配伍搏抗素、干扰素、黄芪多糖等抗病毒药物,能有效控制疫情。
张丽[8]（2008）在《河北省鸭肝炎病毒BD-Ⅰ株的分离鉴定及弱毒株培育》文中研究指明鸭病毒性肝炎是由鸭肝炎病毒（DHV）引起雏鸭的一种传染病,具有发病急、传播迅速、病程短、病死率高等特点。本病在全国各地都有发生,是严重危害养鸭业的主要疾病之一,并常和其他病毒、细菌混合感染,严重影响了养鸭业,造成了巨大的经济损失。临床上主要表现为食欲减退、神经症状、突然死亡和肝脏肿大出血。病原有3种,其中Ⅰ型鸭肝炎病毒在世界范围内流行,Ⅱ型和Ⅲ型鸭肝炎病毒分别局限于英国和美国。不同血清型毒株具有不同的理化和生物学特性,且无免疫交叉反应。近年来国内外报道了Ⅰ型鸭肝炎病毒的变异株,且已完成了病毒基因组的测序工作,并随之出现RT-PCR诊断技术,对雏鸭病毒性肝炎的诊断和防控具有重要意义。本研究通过鸡胚尿囊腔接种,对河北省保定地区采集的死于疑似鸭病毒性肝炎的病鸭肝组织进行病原分离,获得1个病毒分离株,命名为BD-Ⅰ株。该分离株经病理学检查、理化特性实验、中和试验、动物回归试验等鉴定为血清Ⅰ型鸭肝炎病毒（DHV）。证实引起该鸭场雏鸭发病和死亡的主要原因为DVH所致。根据GenBank中已发表的Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒（DHV-Ⅰ）的基因序列,应用Primer Premier 5.0软件设计了1对引物,建立了检测DHV-Ⅰ的RT-PCR方法,该法能从DHV-Ⅰ中扩增到506bp的条带。经敏感性、特异性检测,证实为DHV-Ⅰ的特异性条带,而新城疫病毒（NDV）、传染性法氏囊病病毒（IBDV）、鸭瘟病毒（DPV）、番鸭细小病毒（MPV）、鸭病毒性肿头出血症病毒（DSHDV）、鹅细小病毒（GPV）均为阴性。最低检测浓度到128倍稀释的鸭肝毒(相当于500ELD50)。RT-PCR对河北保定地区的发病鸭群的13份鸭病毒性肝炎病料进行检测,其检出率为76.92%（10/13）。因此,所建立的RT-PCR检测技术具有特异、快速和敏感的特点,可用于鸭病毒性肝炎病毒的快速诊断。作者对实验室分离的鸭肝炎病毒经过鸡胚传代致弱后,收集鸡胚尿囊液毒不同含毒量对1日龄雏鸭进行免疫,并于14日龄时用新型鸭肝炎强毒进行攻毒保护试验,结果BD-Ⅰ-40株在500ELD50时,保护率达100%。采集免疫的雏鸭血清,中和试验测定血清的效价,雏鸭在免疫后可检测到中和抗体,第14天时抗体水平达到高峰,然后呈逐渐下降趋势。结果表明,BD-Ⅰ株经过鸡胚传代致弱后在毒力下降的同时仍保留免疫原性,可以作为疫苗的候选株。
闫虹光[9]（2008）在《鸭肠炎病毒的提纯和间接ELISA诊断方法的建立及应用》文中进行了进一步梳理鸭病毒性肠炎（Duck viral enteritis, DVE）又名鸭瘟（Duck plague, DP）,是由鸭肠炎病毒（Duck enteritis virus, DEV）引起的鸭、鹅、天鹅及其它雁形目禽类的一种急性、热性、接触性的传染病,其特征是流行广泛、传播迅速、发病率和死亡率高。当前迫切需要建立可靠的检测手段,以便能正确地了解鸭群的健康状态和免疫抗体水平。本试验将DEV鸡胚化弱毒AV1222株通过鸡胚成纤维细胞增殖,细胞毒经反复冻融、差速离心收集病毒沉淀。将其等量分成三份,分别用蔗糖不连续密度梯度离心法、酒石酸钾不连续密度梯度离心法、氯化铯不连续密度梯度离心法三种纯化方法提纯。通过对三种纯化方法提纯的病毒进行电镜观察、浓度测定及ELISA抗原性检测,确定蔗糖不连续密度梯度离心法提纯的病毒纯度和浓度都高、ELISA抗原性好,是DEV较为理想的纯化方法。蔗糖密度梯度离心后的30%-40%、40%-50%、50%-60%三层收集的病毒经SDS-PAGE电泳,三层病毒条带清晰,Western-Blot检测结果表明:30%-40%、40%-50%层收集的病毒能够与DVE阳性血清发生特异性结合,确定以这两层病毒作为ELISA的包被抗原。以经蔗糖梯度纯化的DEV包被酶联板,建立了鸭病毒性肠炎间接ELISA诊断方法。通过方阵试验确定了包被抗原的浓度为3.64μg/ mL,血清稀释度为1:100;通过检测190份阴性血清确定了ELISA的判定标准,S/P≥0.125判为阳性,S/P<0.100判为阴性。阻断试验表明,细胞毒能在49.32%的程度上阻断与阳性血清的反应,对阴性血清没有明显影响。交叉试验表明:包被抗原与鸭其它7种疾病的阳性血清不发生交叉反应。本诊断方法与血清中和试验相比较,符合率为100%;与本实验室已经建立的DEV UL19重组蛋白间接ELISA诊断方法相比较,符合率为95.35%。批内变异系数为2.20%-8.40%,批间变异系数为1.61%-8.26%,均小于10%。上述结果表明本诊断方法具有良好的特异性、敏感性和重复性。应用本诊断方法对免疫鸭的特异性抗体水平进行了监测,免疫后第7天就已经产生抗DEV特异性抗体,28天抗体达到峰值;对免疫攻毒鸭抗体监测结果显示,抗体在攻毒后第2周时达到峰值,攻毒后第13周仍维持较高的抗体水平。对哈尔滨、齐齐哈尔、大庆送检的507份血清样品进行了检测,阳性检出率为35.1%,显示出良好的应用前景。本研究以提纯的鸭肠炎病毒作为包被抗原建立了间接ELISA诊断方法,本诊断方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,为开发商品化试剂盒、免疫鸭的抗体监测和DVE流行病学调查提供了一种快速、简便的血清学诊断方法。
刘美丽[10]（2007）在《山东省鸭Ⅰ型病毒性肝炎的综合防制研究》文中研究表明鸭Ⅰ型病毒性肝炎（Duckviral hepatitis,DVH）是由Ⅰ型鸭肝炎病毒引起的雏鸭高度致死性、传播性的病毒性疾病,主要侵害6周龄以内雏鸭,以2日龄至3周龄的雏鸭最为易感,成年鸭有抵抗力。不同日龄的雏鸭发病后,死亡率有所不同,有的低于15%,有的高达95%。耐过鸭多成为僵鸭,生长和发育障碍。近年来,我国禽病工作者在鸭Ⅰ型病毒性肝炎的诊断和防制方面做了大量的卓有成效的工作,研制成功了鸭肝炎鸡胚化弱毒疫苗和灭活苗,并在全国范围内大面积推广,取得了明显的经济效益。但是,在实际生产中,鸭肝炎仍时有暴发,给养鸭业带来严重危害,并且暴发日龄有提前和加大的趋势。本研究通过对山东省不同地区60个养鸭场进行了鸭肝炎的流行病学调查,对不同地区的分离株进行了毒力比较,并制定出了综合防治鸭Ⅰ型肝炎的有效措施。本研究共分四个部分:第一部分:山东省发病鸭中鸭Ⅰ型肝炎的流行病学调查对临床上有鸭肝炎典型症状的388只病死鸭进行了Ⅰ型鸭肝炎病毒与鸭瘟病毒（Duckplague virus,DPV）、鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer,RA）、大肠杆菌（Escherichia colibacterer,E.coli）共感染的检测,结果感染鸭肝炎的有344只,占总数的88.6%,其中单一感染鸭Ⅰ型肝炎病毒的有163只,占总检测数量的42%,另外,鸭肝炎与DPV、RA、E.coli的双重感染和多重感染的现象也普遍存在。第二部分:不同地区分离株的毒力比较对不同地区采集的病料进行了病毒的分离鉴定,成功分离了6株鸭Ⅰ型肝炎病毒,通过鸭胚中和试验和雏鸭被动保护试验鉴定为Ⅰ型DHV,并通过鸭胚半数致死量、鸭胚最小致死量的平均死亡时间、1日龄雏鸭脑内致死指数的测定比较了不同毒株毒力的强弱,证明DHV-LQ(DELD50,1044.68;MDT,72h;ICPI,1.52)毒力最强,DHV-BX(DELD50,103.32;MDT,72.9h;ICPI,0.68)毒力最弱。第三部分:鸭Ⅰ型肝炎高免卵黄抗体的制备利用从不同地区分离的各株Ⅰ型DHV分别制备了卵黄抗体。通过比较卵黄抗体效价、雏鸭免疫保护试验,证明毒力较强的DHV-LQ、DHVoXT毒株所制备的卵黄抗体优于其他毒株所制备的卵黄抗体,并且当抗体的中和效价高于29时,能够有效的预防和治疗鸭Ⅰ型病毒性肝炎。第四部分:综合防制措施的制定根据鸭Ⅰ型肝炎的流行病学调查,分析了鸭Ⅰ型肝炎大规模暴发与流行的原因,提出了鸭Ⅰ型肝炎的综合防制措施并取得了明显的防制效果和可观的经济效益。
二、“鸭传染性肿头症”病毒对雏鸭致病性和卵黄抗体研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、“鸭传染性肿头症”病毒对雏鸭致病性和卵黄抗体研究（论文提纲范文）
（1）新型鸭瘟的诊断和防治（论文提纲范文）
| 1 病原 |
| 2 临床症状 |
| 3 病理变化 |
| 4 诊断 |
| 4.1 临床诊断 |
| 4.2 病理观察 |
| 4.2.1 剖检观察: |
| 4.2.2 病理组织学观察 |
| 4.3 鉴别诊断 |
| 4.3.1 与雏鸭病毒性肝炎的区别[16]: |
| 4.3.2 与鸭瘟的区别[17]: |
| 4.3.3 与鸭霍乱的区别: |
| 4.3.4 与鸭球虫病的区别: |
| 4.3.5 与种鸭坏死性肠炎的区别: |
| 4.4 实验室诊断 |
| 4.4.1 病毒的分离纯化: |
| 4.4.2 血清学鉴定: |
| 4.4.3 动物回归试验: |
（2）鸭肿头败血症的研究进展（论文提纲范文）
| 1 病原学 |
| 1.1 病毒形态与理化特性 |
| 1.2 病毒培养与分离提纯 |
| 1.2.1 禽胚培养 |
| 1.2.2 细胞培养 |
| 1.2.3 病毒的分离与提纯 |
| 1.3 与其他病毒的抗原相关性 |
| 1.4 病毒分类 |
| 2 流行病学 |
| 3 临床症状及病理变化 |
| 3.1 临床症状 |
| 3.2 病理变化 |
| 3.2.1 组织器官病理变化 |
| 3.2.2 病理组织学变化 |
| 3.2.3 致病机理初步探究 |
| 4 诊断 |
| 4.1 临床诊断及实验室诊断 |
| 4.2 鉴别诊断 |
| 4.2.1 与鸭瘟的鉴别诊断 |
| 4.2.2 与鸭流感的鉴别诊断 |
| 4.2.3 与鸭病毒性肝炎的鉴别诊断 |
| 5 免疫防制 |
| 6 展望 |
（3）鸭肿头败血症病毒的生物学特性（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 2 试验结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 病毒对鸭胚具有适应过程 |
| 3.2 病原致病性确定 |
| 3.3 病毒纯化效果分析 |
| 3.4 病毒理化特性的确定 |
| 3.4.1 病毒核酸类型 |
| 3.4.2 病毒血凝性 |
| 3.4.3 病毒抵抗力 |
| 3.5 DSHSV与鸭瘟病毒抗原相关性 |
| 3.6 病毒分类地位 |
（4）鸭病毒性肝炎弱毒疫苗（A66株）的研制（论文提纲范文）
| 目录 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 鸭肝炎及鸭肝炎病毒的研究进展 |
| 1 鸭肝炎概述 |
| 2 病原学研究进展 |
| 2.1 病原学特性 |
| 2.2 形态学特征 |
| 2.3 分类地位 |
| 2.4 生物学特性 |
| 2.5 病毒的变异性 |
| 3 鸭肝炎病毒的分子生物学研究进展 |
| 3.1 病毒的全基因组破译 |
| 3.2 病毒基因组基本结构 |
| 3.3 1型DHV基因组的遗传进化 |
| 4 病毒的增殖与培养 |
| 4.1 胚胎培养 |
| 4.2 细胞培养 |
| 5 临床特点和致病机理 |
| 5.1 流行病学特点 |
| 5.2 临床症状 |
| 5.3 病理变化 |
| 5.4 致病机理 |
| 6 鸭肝炎的诊断和检测技术研究进展 |
| 6.1 病原学检测 |
| 6.2 血清学诊断和检测 |
| 6.3 分子生物学诊断技术 |
| 7 鸭肝炎疫苗的研究进展 |
| 7.1 灭活苗 |
| 7.2 弱毒疫苗 |
| 7.3 联苗 |
| 7.4 新型DHV疫苗 |
| 8 预防和控制 |
| 8.1 管理措施 |
| 8.2 免疫接种 |
| 8.3 治疗 |
| 9 展望 |
| 参考文献 |
| 第二篇 试验研究 |
| 第二章 鸭肝炎病毒A66弱毒株的克隆纯化 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 A66弱毒株的克隆筛选 |
| 2.2 克隆株的增殖培养 |
| 2.3 克隆株(A66株)的毒价测定 |
| 2.4 A66株的免疫原性测定 |
| 2.5 A66株的无菌检验 |
| 2.6 A66株的特异性检验 |
| 2.7 A66株的外源病毒检测 |
| 3 讨论和小结 |
| 第三章 鸭肝炎病毒A66株的安全性及遗传稳定性研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 临床和病理组织学观察 |
| 2.2 血常规和血清生化指标的测定 |
| 2.3 毒力返强试验结果 |
| 2.4 全基因组序列测定与比较 |
| 3 讨论和小结 |
| 第四章 鸭肝炎病毒A66株免疫原性研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 病毒传代 |
| 2.2 A66株种毒毒力和毒价测定 |
| 2.3 A66株不同代次的安全性测定 |
| 2.4 A66株不同代次的免疫保护力测定 |
| 2.5 最小免疫量的测定 |
| 2.6 A66株高代次鸡胚毒的免疫试验 |
| 3 讨论和小结 |
| 第五章 鸭肝炎病毒A66株纯净性研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 无菌检验 |
| 2.2 支原体检验 |
| 2.3 种毒特异性检验 |
| 2.4 鸡胚检查法 |
| 2.5 鸡检查法 |
| 2.6 细胞检查法 |
| 2.7 PCR检测结果 |
| 3 讨论和小结 |
| 第六章 检验用鸭肝炎病毒强毒株的来源和系统鉴定研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 毒株复壮 |
| 2.2 雏鸭传代 |
| 2.3 病毒毒力测定 |
| 2.4 无菌检验 |
| 2.5 支原体检验 |
| 2.6 特异性试验 |
| 2.7 攻毒剂量的测定 |
| 2.8 种毒保存试验 |
| 3 讨论和小结 |
| 第七章 鸭病毒性肝炎弱毒活疫苗(A66株)生产工艺的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 病毒最佳接种剂量的选择 |
| 2.2 不同时间死亡鸡胚含毒量的测定 |
| 2.3 接种鸡胚日龄的选择 |
| 2.4 含毒鸡胚组织处理方法筛选 |
| 2.5 保护剂配方和冻干条件优化结果 |
| 2.6 保护剂配方和冻干验证结果 |
| 3 讨论和小结 |
| 第八章 鸭病毒性肝炎弱毒活疫苗(A66株)安全性研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 一次单剂量接种试验结果 |
| 2.2 单剂量重复接种试验结果 |
| 2.3 大剂量接种试验结果 |
| 3 讨论和小结 |
| 第九章 鸭病毒性肝炎弱毒活疫苗(A66株)免疫效力研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 不同途径的免疫产生期试验结果 |
| 2.2 免疫攻毒试验 |
| 2.3 免疫期试验研究结果 |
| 2.4 同居感染试验研究结果 |
| 2.5 母源抗体对免疫影响研究 |
| 3 讨论与小结 |
| 第十章 鸭肝炎病毒A66株毒种及疫苗的保存期试验 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 含50%甘油毒在-15℃保存情况 |
| 2.2 冻干病毒在-15℃和-70℃保存情况 |
| 2.3 疫苗稳定性的测定 |
| 2.4 疫苗的免疫保护试验 |
| 2.5 疫苗其它性能测定 |
| 3 讨论和小结 |
| 第十一章 鸭病毒性肝炎弱毒活疫苗(A66株)中试生产和检验 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 中试生产的批次与数量 |
| 2.2 中试产品的安全检验 |
| 2.3 中试产品的效力检验 |
| 2.4 中试产品的各项检验结果 |
| 3 讨论和小结 |
| 第十二章 鸭病毒性肝炎弱毒活疫苗(A66株)临床试验研究 |
| 1 试验地点 |
| 2 试验时间 |
| 3 临床试验基本信息 |
| 4 材料与方法 |
| 4.1 材料 |
| 4.2 试验方法 |
| 5 结果 |
| 5.1 临床观察情况 |
| 5.2 攻毒试验结果 |
| 5.3 免疫抗体测定 |
| 5.4 生产性能统计 |
| 5.5 临床病例实验室诊断 |
| 6 讨论和小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表与本研究相关学术论文 |
（5）鸭病毒性肿头出血症病毒感染特性及其免疫检测技术的研究（论文提纲范文）
| 本论文的创新性工作 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 常用缩略词表 |
| 第一部分 文献综述 |
| 第一章 鸭主要病毒性传染病病原的感染特性 |
| 1 概况 |
| 2 鸭病毒性传染病流行特点 |
| 3 鸭主要病毒性传染病病原的感染特性 |
| 3.1 鸭病毒性肠炎病原的感染特性 |
| 3.2 鸭病毒性肝炎病原的感染特性 |
| 3.3 鸭流感病原的感染特性 |
| 3.4 鸭病毒性肿头出血症病原的感染特性 |
| 4 存在的问题和研究方向 |
| 第二章 免疫酶技术在病毒病研究中的应用 |
| 1 免疫酶技术基本原理 |
| 2 免疫酶技术发展简史 |
| 3 酶标技术的研究进展 |
| 3.1 标记酶的特点 |
| 3.2 标记酶的种类 |
| 3.3 标记酶底物的种类 |
| 3.4 酶标记技术的种类 |
| 4 免疫酶技术的研究就进展 |
| 4.1 免疫酶组化技术研究进展 |
| 4.2 免疫酶测定法的研究进展 |
| 5 免疫酶组化在病毒病研究中的应用 |
| 5.1 免疫酶组化技术在家畜病毒病研究中的应用 |
| 5.2 免疫酶组化技术在家禽病毒病研究中的应用 |
| 6 酶联免疫吸附测定法在病毒病研究中的应用 |
| 6.1 ELISA在家畜病毒病研究中的应用 |
| 6.2 ELISA在家禽病毒病研究中的应用 |
| 第二部分 实验研究 |
| 第三章 DSHDV强毒人工感染鸭实验模型构建及组织病理学发展规律研究 |
| 摘要 |
| 1 材料 |
| 1.1 毒株 |
| 1.2 实验动物 |
| 1.3 主要试剂及配制 |
| 1.4 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 实验鸭分组及人工感染 |
| 2.2 临床症状及病理剖检 |
| 2.3 病理切片的制备和观察 |
| 3 结果 |
| 3.1 临床症状 |
| 3.2 剖检变化 |
| 3.3 组织病理学变化 |
| 4 讨论 |
| 4.1 DVSHD病理学模型构建及其特征 |
| 4.2 DVSHD与鸭常见传染病的临床症状及剖检变化的异同 |
| 4.3 DVSHD与鸭常见传染病的组织学变化的异同 |
| 4.4 病理学变化的特征及意义 |
| 5 小结 |
| Abstract |
| 第四章 DSHDV强毒在人工感染鸭宿主细胞内的形态发生学和超微病理学研究 |
| 摘要 |
| 1 材料 |
| 1.1 毒株 |
| 1.2 实验动物 |
| 1.3 主要试剂及配制 |
| 1.4 主要仪器及设备 |
| 2 方法 |
| 2.1 人工复制病例 |
| 2.2 透射电镜样品制备及观察 |
| 3 结果 |
| 3.1 DSHDV的形态特征 |
| 3.2 DSHDV分布及形态发生特点 |
| 3.3 宿主细胞的超微结构变化 |
| 4 讨论 |
| 4.1 DSHDV病毒粒子在感染鸭体内形态特征与形态发生学过程 |
| 4.2 DSHDV致感染鸭的超微结构变化及意义 |
| 5 小结 |
| Abstract |
| 第五章 DSHDV强毒人工感染鸭和鸭胚致宿主细胞凋亡研究 |
| 摘要 |
| 1 材料 |
| 1.1 毒株 |
| 1.2 试验动物 |
| 1.3 主要试剂及配制 |
| 1.4 主要仪器及设备 |
| 1.5 器材 |
| 2 方法 |
| 2.1 鸭胚的人工感染 |
| 2.2 实验鸭的人工感染及样品的采集 |
| 2.3 HE染色法观察 |
| 2.4 透射电镜法观察 |
| 2.5 TUNEL法检测细胞凋亡 |
| 3 结果 |
| 3.1 DSHDV在鸭胚上的培养特性 |
| 3.2 DSHDV致鸭胚宿主细胞凋亡的观察 |
| 3.3 DSHDV致鸭宿主细胞凋亡的观察 |
| 4 讨论 |
| 4.1 细胞凋亡的基本特征 |
| 4.2 细胞凋亡的检测方法 |
| 4.3 DSHDV感染与宿主细胞凋亡 |
| 4.4 DSHDV致宿主细胞凋亡的规律 |
| 4.5 DSHDV致宿主细胞凋亡机制的探讨 |
| 5 小结 |
| Abstract |
| 第六章 免疫组化检测DSHDV方法的建立和在检测病毒侵染规律研究中的应用 |
| 摘要 |
| 1 材料 |
| 1.1 毒株 |
| 1.2 试验动物 |
| 1.3 抗体 |
| 1.4 主要试剂及配制 |
| 1.5 主要仪器及设备 |
| 1.6 器材 |
| 2 方法 |
| 2.1 人工复制病例 |
| 2.2 实验鸭的人工感染及样品采集 |
| 2.3 兔抗DSHDV高免血清IgG的提取和纯化 |
| 2.4 载玻片和盖玻片的处理 |
| 2.5 免疫组化检测材料的固定、包埋和切片 |
| 2.6 免疫组化检测鸭病毒性肿头出血症病毒方法的建立及优化 |
| 2.7 间接免疫酶法检测DSHDV在鸭体中的侵染规律 |
| 3 结果 |
| 3.1 兔抗DSHDV高免血清效价及IgG纯化 |
| 3.2 免疫组化SP染色方法的建立和优化 |
| 3.3 特异性实验结果 |
| 3.4 重复性和稳定性实验结果 |
| 3.5 间接免疫酶法检测组织中DSHDV在鸭体中的侵染规律 |
| 4 讨论 |
| 4.1 检测DSHDV抗原的间接免疫酶法的建立与优化 |
| 4.2 DSHDV抗原的定位和DSHDV的侵染规律 |
| 5 小结 |
| Abstract |
| 第七章 间接ELISA检测鸭病毒性肿头出血症抗体方法的建立和应用 |
| 摘要 |
| 1 材料 |
| 1.1 毒株 |
| 1.2 血清 |
| 1.3 实验动物 |
| 1.4 主要试剂 |
| 1.5 主要溶液的配制 |
| 1.6 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 抗原的制备与纯化 |
| 2.2 鸭病毒性肿头出血症阳性、阴性血清的制备 |
| 2.3 间接ELISA的基本操作程序 |
| 2.4 间接ELISA最佳工作条件的确定 |
| 2.5 特异性试验 |
| 2.6 敏感性试验 |
| 2.7 重复性试验 |
| 2.8 临床血清样品的检测 |
| 2.9 免疫鸭特异性抗体的检测 |
| 3 结果 |
| 3.1 病毒抗原的含量和阳性血清效价 |
| 3.2 间接ELISA法最佳工作条件的选择 |
| 3.3 特异性试验 |
| 3.4 敏感性试验 |
| 3.5 重复性试验 |
| 3.6 临床血清样品的检测结果 |
| 3.7 免疫鸭特异性抗体的检测结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 间接ELISA技术参数的选择 |
| 4.2 间接ELISA特异性和敏感性 |
| 4.3 间接ELISA试验质量控制 |
| 4.4 间接ELISA在临床上的应用 |
| 5 小结 |
| Abstract |
| 第三部分 结论 |
| 第四部分 参考文献 |
| 第五部分 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
（6）检测鸭肿头败血症病毒的间接夹心ELISA的建立及应用（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 供试材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 鸭抗XD病毒IgG纯度鉴定 |
| 2.2 间接夹心ELISA最佳工作条件 |
| 2.3 临界值确定 |
| 2.4 重复性试验 |
| 2.5 特异性试验 |
| 2.6 免疫电镜验证实验 |
| 2.7 保存期试验 |
| 2.8 与琼脂扩散实验敏感性比较 |
| 2.9 人工感染鸭XD病毒的检测及各组织器官中病毒分布 |
| 3 讨论与小结 |
（8）河北省鸭肝炎病毒BD-Ⅰ株的分离鉴定及弱毒株培育（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 DHV的病原与分布 |
| 1.2 DHV的病原学特征和理化特征 |
| 1.2.1 DHV-I型 |
| 1.2.2 DHV-II型 |
| 1.2.3 DHV-III型 |
| 1.3 DHV的分子生物学特征 |
| 1.4 DHV的流行病学 |
| 1.5 临床症状和病理变化 |
| 1.5.1 临床症状 |
| 1.5.2 病理变化 |
| 1.6 DHV的发病机理 |
| 1.7 鸭病毒性肝炎病毒检测技术研究进展 |
| 1.7.1 病毒分离和初步鉴定 |
| 1.7.2 电镜检测 |
| 1.7.3 中和试验(VN) |
| 1.7.4 琼脂扩散试验 |
| 1.7.5 凝集试验 |
| 1.7.6 荧光抗体技术 |
| 1.7.7 酶联免疫吸附试验(ELISA) |
| 1.7.8 胶体金技术 |
| 1.7.9 分子生物学诊断技术 |
| 1.7.10 其他检测方法 |
| 1.8 鸭病毒性肝炎免疫防制方法的研究进展 |
| 1.9 鸭病毒性肝炎的研究方向与进展 |
| 1.9.1 病毒提纯方法的优化 |
| 1.9.2 适于基层应用的快速诊断方法的建立 |
| 1.9.3 分子生物学研究 |
| 1.9.4 单克隆抗体的研究 |
| 1.9.5 疫苗研制 |
| 1.10 本研究的目的和意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 毒株 |
| 2.2 实验动物 |
| 2.3 实验中所需的主要试剂 |
| 2.3.1 分离鉴定所需主要试剂 |
| 2.3.2 反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)所需主要试剂 |
| 2.4 主要试剂的配制方法 |
| 2.5 主要仪器 |
| 2.6 鸭肝炎病毒BD-I株的分离及生物学特性的鉴定 |
| 2.6.1 病毒分离及增殖 |
| 2.6.2 兔抗DHV标准阳性血清及分离株高免血清制备 |
| 2.6.3 细菌分离 |
| 2.6.4 病毒毒价(ELD_(50))测定 |
| 2.6.5 理化特性鉴定 |
| 2.6.6 动物回归试验 |
| 2.6.7 组织病理学检查 |
| 2.6.8 交叉中和试验 |
| 2.6.9 琼脂扩散试验 |
| 2.6.10 病毒血凝胜测定 |
| 2.6.11 病毒的形态观察 |
| 2.7 I型鸭病毒性肝炎病毒(DHV-I)RT-PCR检测方法的建立 |
| 2.7.1 病毒的RNA提取 |
| 2.7.2 引物设计 |
| 2.7.3 RT反应 |
| 2.7.4 PCR反应 |
| 2.7.5 电泳鉴定 |
| 2.7.6 特异性检测 |
| 2.7.7 RT-PCR敏感性测定 |
| 2.7.8 临床检测 |
| 2.8 BD-I株致弱毒株培育 |
| 2.8.1 BD-I株致弱毒株毒力测定 |
| 2.8.2 免疫原性测定 |
| 2.8.3 免疫后抗体消长测定 |
| 3. 结果与分析 |
| 3.1 鸭肝炎病毒BD-I株的分离及生物学特性的鉴定 |
| 3.1.1 病毒分离 |
| 3.1.2 细菌分离 |
| 3.1.3 病毒毒价(ELD_(50))测定 |
| 3.1.4 理化特性鉴定 |
| 3.1.5 动物回归试验 |
| 3.1.6 病理组织学检查 |
| 3.1.7 中和试验 |
| 3.1.8 琼脂扩散试验 |
| 3.1.9 血凝性测定 |
| 3.1.10 病毒的形态观察 |
| 3.2 I型鸭病毒性肝炎病毒(DHV-I)RT-PCR检测方法的建立 |
| 3.2.1 RF-PCR的特异性和敏感性 |
| 3.2.2 对各种临床样品的检测 |
| 3.3 弱毒株培育 |
| 3.3.1 BD-I株致弱毒株毒力测定 |
| 3.3.2 免疫原性测定 |
| 3.3.3 免疫后抗体消长测定 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表的学术论文 |
| 作者简历 |
| 致谢 |
| 附发表论文 |
（9）鸭肠炎病毒的提纯和间接ELISA诊断方法的建立及应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 1 鸭病毒性肠炎概述 |
| 1.1 历史回顾 |
| 1.2 病原 |
| 1.2.1 病毒的形态特征与理化特性 |
| 1.2.2 病毒基因组 |
| 1.2.3 鸭肠炎病毒形态发生 |
| 1.3 流行病学及致病性 |
| 1.3.1 流行病学 |
| 1.3.2 临床症状及病理变化 |
| 2 诊断方法研究进展 |
| 2.1 病原分离鉴定 |
| 2.2 分子生物学诊断方法 |
| 2.2.1 核酸探针技术 |
| 2.2.2 原位杂交技术（ISH） |
| 2.2.3 常规PCR 诊断技术 |
| 2.2.4 实时荧光定量PCR 技术 |
| 2.3 血清学诊断方法 |
| 2.3.1 血清中和试验（SN） |
| 2.3.2 琼脂糖凝胶沉淀试验(AGP) |
| 2.3.3 反向间接血凝试验(RPHA) |
| 2.3.4 间接免疫荧光试验（IFA） |
| 2.3.5 微量固相放射免疫试验(Micro-SPRIA) |
| 2.3.6 酶联免疫吸附试验（ELISA） |
| 3 防治 |
| 3.1 预防 |
| 3.1.1 灭活苗 |
| 3.1.2 弱毒疫苗 |
| 3.2 治疗 |
| 4 研究的目的和意义 |
| 第一章 鸭肠炎病毒抗原的提纯 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 SPF 鸡胚 |
| 1.1.2 病毒 |
| 1.1.3 主要试剂 |
| 1.1.4 主要仪器 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 阴阳性血清的制备 |
| 1.2.2 间接ELISA 操作程序 |
| 1.2.3 鸡胚成纤维细胞的制备 |
| 1.2.4 病毒的增殖 |
| 1.2.5 半数细胞感染量（TCID_(50)）的测定 |
| 1.2.6 病毒的粗纯 |
| 1.2.7 蔗糖不连续密度梯度离心法 |
| 1.2.8 酒石酸钾不连续密度梯度离心法 |
| 1.2.9 氯化铯不连续密度梯度离心法 |
| 1.2.10 病毒含量的测定 |
| 1.2.11 病毒的电镜观察 |
| 1.2.12 间接ELISA 抗原性分析 |
| 1.2.13 SDS-PAGE 凝胶电泳 |
| 1.2.14 Western-Blot 分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 CEF 细胞的病变情况 |
| 2.2 阴阳性血清的制备 |
| 2.3 病毒毒价的测定 |
| 2.4 三种密度梯度离心结果 |
| 2.5 病毒浓度测定结果 |
| 2.6 电镜观察结果 |
| 2.7 ELISA 分析结果 |
| 2.8 蔗糖不连续密度梯度纯化的病毒SDS-PAGE 凝胶电泳结果 |
| 2.9 WESTERN-BLOT 分析结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 病毒增殖材料的选择 |
| 3.2 病毒纯化方法的比较 |
| 3.3 病毒的抗原性比较 |
| 第二章 鸭病毒性肠炎间接ELISA 诊断方法的建立及应用 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 毒株及疫苗 |
| 1.1.2 包被抗原 |
| 1.1.3 血清 |
| 1.1.4 实验鸭 |
| 1.1.5 主要试剂 |
| 1.1.6 主要的仪器设备 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 血清中和试验操作程序 |
| 1.2.2 酶联板均一性试验 |
| 1.2.3 抗原最佳包被浓度与阴阳性血清最佳稀释度的确定 |
| 1.2.4 阴阳性血清最佳作用时间的确定 |
| 1.2.5 酶标抗体最佳工作浓度的确定 |
| 1.2.6 酶标抗体最佳作用时间的确定 |
| 1.2.7 最佳封闭液的确定 |
| 1.2.8 底物显色时间的确定 |
| 1.2.9 间接ELISA 方法判定标准的确定 |
| 1.2.10 敏感性试验 |
| 1.2.11 交叉反应试验 |
| 1.2.12 阻断试验 |
| 1.2.15 批内重复性试验 |
| 1.2.16 批间重复性试验 |
| 1.2.13 与血清中和试验比较 |
| 1.2.14 与鸭肠炎病毒UL19 重组蛋白间接ELISA 诊断方法比较 |
| 1.2.17 免疫及免疫攻毒鸭抗体水平监测 |
| 1.2.18 现地应用试验 |
| 2 结果 |
| 2.1 酶联板均一性试验结果 |
| 2.2 抗原最佳包被浓度与阴阳性血清最佳稀释度的确定 |
| 2.3 阴阳性血清作用时间的确定 |
| 2.4 酶标抗体工作浓度的确定 |
| 2.5 酶标抗体作用时间的确定 |
| 2.6 封闭液的确定 |
| 2.7 底物显色时间的确定 |
| 2.8 间接ELISA 方法判定标准的确定 |
| 2.9 敏感性试验结果 |
| 2.10 交叉反应试验结果 |
| 2.11 阻断试验结果 |
| 2.12 批内重复试验 |
| 2.13 批间重复试验 |
| 2.14 与血清中和试验检测结果的比较 |
| 2.15 与UL19 重组蛋白间接ELISA 诊断方法的比较 |
| 2.16 免疫鸭抗体水平监测结果 |
| 2.17 免疫攻毒鸭抗体水平监测结果 |
| 2.18 现地应用试验结果 |
| 3 小结和讨论 |
| 3.1 间接ELISA 诊断方法的优势 |
| 3.2 间接ELISA 反应条件的优化 |
| 3.3 间接ELISA 诊断方法判定标准的确定 |
| 3.4 与血清中和试验和UL19 重组蛋白间接ELISA 的比较 |
| 3.5 间接ELISA 诊断方法的应用 |
| 3.6 间接ELISA 的质量控制 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（10）山东省鸭Ⅰ型病毒性肝炎的综合防制研究（论文提纲范文）
| 英文缩略表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 1 病原 |
| 1.1 生物学特性 |
| 1.2 病毒的增殖 |
| 1.3 病毒纯化 |
| 2 流行病学 |
| 3 临床症状及病理变化 |
| 4 诊断 |
| 4.1 病毒分离 |
| 4.2 中和试验 |
| 4.3 琼脂扩散试验 |
| 4.4 凝集试验 |
| 4.5 荧光抗体技术 |
| 4.6 酶联免疫吸附试验 |
| 4.7 胶体金技术 |
| 4.8 分子生物学诊断技术 |
| 5 鉴别诊断 |
| 5.1 与鸭瘟鉴别 |
| 5.2 与鸭巴氏杆菌病鉴别 |
| 6 预防措施 |
| 7 治疗 |
| 8 本研究的目的和意义 |
| 实验一 山东省发病鸭中鸭I型肝炎的流行病学调查 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 实验二 不同地区DHV-1分离株的毒力比较 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 实验三 I型鸭病毒性肝炎高免卵黄抗体的制备 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| Ⅰ型鸭病毒性肝炎的综合防制措施探讨 |
| 结论及创新之处 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表论文 |
四、“鸭传染性肿头症”病毒对雏鸭致病性和卵黄抗体研究（论文参考文献）
- [1]新型鸭瘟的诊断和防治[J]. 于杰,柳林,李英英. 畜牧与饲料科学, 2013(02)
- [2]鸭肿头败血症的研究进展[J]. 李木子,蒋文灿,刘雪梅,李晓艳,倪粒琼. 贵州农业科学, 2011(11)
- [3]鸭肿头败血症病毒的生物学特性[J]. 蒋文灿,盛敏. 中国兽医学报, 2010(10)
- [4]鸭病毒性肝炎弱毒疫苗（A66株）的研制[D]. 张小飞. 南京农业大学, 2010(08)
- [5]鸭病毒性肿头出血症病毒感染特性及其免疫检测技术的研究[D]. 李传峰. 四川农业大学, 2010(12)
- [6]检测鸭肿头败血症病毒的间接夹心ELISA的建立及应用[J]. 蒋文灿,郑林英. 西南农业学报, 2010(01)
- [7]鸭肿头败血症（DSHS）流行病学调查及诊治[J]. 蒋文灿,盛敏,安婷,刘巍申,刘爽,徐巨. 贵州农业科学, 2010(01)
- [8]河北省鸭肝炎病毒BD-Ⅰ株的分离鉴定及弱毒株培育[D]. 张丽. 河北农业大学, 2008(08)
- [9]鸭肠炎病毒的提纯和间接ELISA诊断方法的建立及应用[D]. 闫虹光. 中国农业科学院, 2008(10)
- [10]山东省鸭Ⅰ型病毒性肝炎的综合防制研究[D]. 刘美丽. 山东农业大学, 2007(03)