一、结缔组织生长因子诱导肾成纤维细胞转为成肌纤维细胞（论文文献综述）
林佳丽[1]（2021）在《温度对斑马鱼肌肉营养组成和胶原蛋白含量的影响及初步机制研究》文中研究表明鱼肉品质受多种因素影响,除品种和遗传因素等先天因素之外,养殖环境是影响鱼肉品质的主要因素之一。温度作为一种重要的环境因子,在鱼类的生长和生理活动中发挥重要作用,然而温度是否会影响鱼类肌肉品质及其作用机制目前尚不清楚。本实验以模式生物斑马鱼（Danio rerio）为研究对象,设置了18℃（低温）、28℃（最适温度）和34℃（高温）三个温度组,每组3个重复,开展7周的养殖实验。通过分析不同温度下鱼体生长、体成分以及肌肉营养成分（氨基酸和脂肪酸）、肌肉组织结构、胶原蛋白含量及转录组变化,探讨温度对斑马鱼肌肉营养组成、组织结构和胶原蛋白含量的影响及可能分子机制,为水产养殖中通过环境调控改善鱼肉品质提供理论基础。主要研究结果如下:1.温度对斑马鱼生长及肌肉营养成分的影响生长方面,温度显着影响斑马鱼的终末体长和终末体重,其中28℃组具有最大的体长和体重,显着大于18℃组（p<0.05）。全鱼生化成分方面,与28℃组相比,18℃和34℃组的水分含量均无显着性差异,18℃组的粗蛋白和灰分含量均显着降低（p<0.05）。温度显着影响斑马鱼肌肉氨基酸组成以及EAA、NEAA、FAA和TAA的含量（p<0.05）。总体上,18℃和34℃组大部分氨基酸含量低于28℃组肌肉（p<0.05）。34℃组Tyr、Ala、Met、Leu、Arg、His和Gly含量显着低于28℃组（p<0.05）,而18℃组仅Pro、Met、Leu和His含量显着低于28℃组（p<0.05）。另外,34℃组EAA、NEAA、FAA和TAA均显着低于28℃组（p<0.05）,18℃组NEAA和TAA含量显着低于28℃组（p<0.05）。温度对肌肉脂肪酸组成也有一定的影响,18℃和34℃组总饱和脂肪酸含量均显着高于28℃组（p<0.05）。其中,34℃组C16:0含量显着高于28℃组（p<0.05）;18℃和34℃组C18:0和C18:1T含量均显着高于28℃组（p<0.05）。2.温度对斑马鱼肌肉组织结构和胶原蛋白含量的影响组织形态学分析发现,与28℃相比较,18℃和34℃均会导致肌纤维平均直径增大,密度减小,排列较疏松（p<0.05）。天狼星红染色分析发现,18℃可提高肌肉组织胶原蛋白含量（p<0.05）。进一步,通过Western blot发现18℃组肌肉组织的I胶原蛋白的表达量显着高于28℃组和34℃组（p<0.05）。这些结果表明,温度显着影响斑马鱼肌肉组织结构和胶原蛋白含量。3.温度对斑马鱼肌肉品质相关基因表达的影响为了探讨温度影响斑马鱼肌肉品质的可能机制,本研究对不同温度处理组肌肉组织进行转录组测序,分析不同温度处理组间DEGs数量、GO成分和KEGG通路富集情况。结果发现,随着温度差异的增大,DEGs的数量增多;18℃vs 28℃组DEGs富集的KEGG通路主要有氧化磷酸化作用、氨基酸的生物合成、精氨酸和脯氨酸代谢等;28℃vs 34℃组富集的通路主要是氨酰-t RNA的生物合成、RNA转运、蛋白酶体等;18℃vs 34℃组,富集的通路主要涉及真核生物核糖体的生物合成、氨酰-t RNA的生物合成、内质网中的蛋白质加工、RNA转运、精氨酸和脯氨酸的代谢等。进一步我们通过q RT-PCR对肌肉品质相关的DEGs的表达模式进行验证,验证结果与转录组测序基本一致。肌肉生长和发育相关基因方面,随着温度的升高,myf6的表达水平显着增加,mef2cb和myog的表达水平则显着减少（p<0.05）。精氨酸与脯氨酸代谢方面,arg2的表达水平随温度升高而显着下调,与gatm的表达趋势相反,pycr1b的表达水平在18℃组显着低于28℃和34℃组（p<0.05）。胶原蛋白合成基因方面,大部分胶原蛋白基因（col1a1a、col1a2、col2a1b等）的表达水平随着温度升高而显着减少（p<0.05）。胶原蛋白代谢调控基因方面,MMPs（mmp2、mmp9、mmp14a、mmp14b、mmp15a）、TIMP2（timp2a、timp2b）和TGF-β1（tgfb1a、tgfb1b）的表达水平总体上随着温度升高而显着减少（p<0.05）;CTGF（ctgfa、ctgfb）的表达水平在34℃组显着下降（p<0.05）;SERPINH1（serpinh1a、serpinh1b）的表达水平随温度升高而增加（p<0.05）。在内质网蛋白质加工通路上,PDIs（p4hb、pdia4）、热休克蛋白基因（hsp70、hsp40）和sec24a等的表达水平总体上随温度升高而上调（p<0.05）,与man1b1b、edem3的表达趋势相反（p<0.05）。这些结果表明,温度可能通过调节肌肉生长发育、氨基酸代谢、胶原蛋白代谢及蛋白质加工等基因表达从而影响肌肉品质。
杨帆[2]（2021）在《兔伸直型膝关节挛缩模型中肌源性挛缩的病理特征及其机制研究》文中研究指明目的膝关节损伤在日常生活以及运动中十分常见,关节固定是其常用的治疗手段,然而长时间或不恰当的固定同样是膝关节挛缩的常见原因。膝关节挛缩不但影响了患者的日常生活,也对患者家庭与社会造成了极大的医疗与经济负担。本研究主要通过膝关节固定建立兔伸直型膝关节挛缩模型,探讨其中肌源性挛缩的病理特征,并研究其可能存在的相关机制。方法30只新西兰白兔,根据固定时间,随机分为以下5组:对照组（I-0,6只,不进行任何处理）、固定1周组（I-1,6只,左膝关节伸直位固定1周）、固定2周组（I-2,6只,左膝关节伸直位固定2周）、固定4周组（I-4,6只,左膝关节伸直位固定4周）和固定8周组（I-8,6只,左膝关节伸直位固定8周）。在每个时间点结束后处死兔子,然后通过检测固定后膝关节挛缩角度分析肌源性挛缩与关节源性挛缩的情况,通过股直肌Masson染色分析股直肌肌纤维横截面积的情况,通过Western Blot分析缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和转化生长因子-β1（TGF-β1）的蛋白表达水平,分析各组结果差异。结果固定8周内固定组的总挛缩角度随着固定时间的延长不断增加（P<0.001）;固定组的肌源性挛缩角度在前4周内随着固定时间的延长而增加（P<0.05）,但4周后I-4组和I-8组相比差异无统计学意义（P>0.05）。据Masson染色及定量结果提示,股直肌横截面积在固定4周内不断降低,而胶原纤维沉积占比在固定4周内不断升高（P<0.05）,但固定4周后I-8组与I-4组相比,股直肌横截面积的降低和胶原纤维沉积占比的增加差异都无统计学意义（P>0.05）。股直肌缺氧诱导因子-1α蛋白表达水平在固定4周内不断升高（P<0.05）,但4周后I-4组和I-8组相比差异无统计学意义（P>0.05）;2周内转化生长因子-β1蛋白表达增加有统计学意义（P<0.05）,2周后每个固定组相比差异无统计学意义（P>0.05）。结论在本研究中可通过固定前4周内所检测的肌源性挛缩角度的增加、股直肌横截面积的降低与胶原纤维沉积占比的增加,推断关节挛缩早期肌源性挛缩的病理特征主要为肌纤维化和萎缩的时间依赖性改变。且通过股直肌缺氧诱导因子-1α和转化生长因子-β1的蛋白表达水平的检测结果,认为肌源性挛缩的机制可能与缺氧诱导因子-1α和转化生长因子-β1高表达有关。
刘倩[3]（2020）在《施万细胞对膀胱平滑肌细胞纤维化的保护作用研究》文中提出研究背景神经源性膀胱（Neurogenic bladder,NB）是小儿外科常见的疾病,目前的各种治疗办法只能缓解病人的症状,无法从根本上对膀胱储尿、排尿的功能进行改善。一个重要的原因在于,随着病情的进展多数患儿会出现膀胱纤维化的病理改变,膀胱容量明显减小,顺应性降低,出现显着小梁化改变,正常的膀胱壁组织被异常增生的结缔组织的浸润取代,最终形成一个小容积、高压力的囊袋,导致膀胱失去正常功能。因而研究导致膀胱发生纤维化的主要致病因素并采取有效的干预措施对阻止疾病的进展具有非常重要的意义。既往研究证实,胶原蛋白等细胞外基质成分沉积于不同器官,如心、肝、肺等,可导致不同病理状态下的器官纤维化,与这些器官类似,膀胱纤维化的特点是膀胱壁内胶原沉积。结缔组织生长因子（Connective tissue growth factor,CTGF）可能在介导组织、器官纤维化的发生、发展中起十分重要的作用。膀胱失神经支配后会引起膀胱纤维化,这可能是由于功能不全的神经细胞,无法给膀胱细胞提供必要的营养物质,进而导致膀胱细胞功能紊乱,最终导致纤维化的发生。既往研究发现膀胱逼尿肌的功能失调,与支配逼尿肌神经的功能具有相关性。我们据此猜测,神经支配及神经营养物质对膀胱纤维化过程有某种作用。施万细胞（Schwann cell）是外周神经系统中具有重要功能的一种胶质细胞,它可以通过分泌包含脑源性神经营养因子（Brain-derived neurotrophic factor,BDNF）在内 的多种神经营养因子发挥神经营养、促进神经组织再生等作用。目前还没有相关研究揭示施万细胞在膀胱纤维化中的作用。本次研究共分为2个部分,第一部分为:大鼠失神经支配膀胱纤维化模型的建立及CTGF在膀胱纤维化中的作用研究;第二部分为:施万细胞和BDNF在膀胱平滑肌细胞纤维化中的作用及可能的机制研究。第一部分大鼠失神经支配膀胱纤维化模型的建立及CTGF在膀胱纤维化中的作用研究研究目的采用大鼠去神经支配建立NB膀胱纤维化模型,观察不同时间点膀胱组织形态学的变化以及CTGF随着膀胱纤维化的发展的变化趋势。分离出膀胱平滑肌细胞（Bladder smooth muscle cells,BSMCs）并培养,应用CTGF作用于培养的BSMCs,观察纤维化相关指标的变化,研究CTGF在膀胱纤维化中的作用。研究方法应用雌性SD大鼠去神经支配建立NB膀胱纤维化模型。采用体重160-200g,成年雌性SD大鼠32只,将大鼠随机分为4组（n=8/组）,其中一组接受假手术,10天后处死,另三组采用电灼破坏双侧盆神经节的方法建立去神经支配模型,分别在去神经10天、20天和30天后处死。摘取大鼠膀胱组织,进行苏木精伊红（Hematoxylin and eosin,H&E）染色,观察膀胱壁组织结构的变化;再进行Masson染色进一步评价膀胱组织有无纤维化及纤维化的程度。应用免疫组织化学方法检测膀胱组织中CTGF的表达。切取SD大鼠膀胱组织,分离并培养BSMCs,用CTGF处理BSMCs,应用免疫荧光染色观察α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）表达的变化,应用蛋白质免疫印迹（Western Blot）方法检测Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白（CollagenⅠ,ColⅢ;Collagen Ⅲ,Col Ⅲ）的表达水平,探索CTGF对纤维化的作用。结果1.膀胱组织H&E染色特点:在膀胱去神经支配构建的NB大鼠模型中,膀胱组织平滑肌细胞排列紊乱,逼尿肌细胞被增多的胶原纤维分割。在粘膜下层、肌层等可见炎性细胞浸润,另外随着造模时间的延长,膀胱平滑肌组织显着减少,而膀胱壁纤维结缔组织明显增生。2.Masson染色结果:与H&E染色一致,NB大鼠模型中呈红染的膀胱平滑肌组织以时间依赖性方式显着减少,蓝染的胶原纤维显着增加（与对照组比较,NB第10天,P<0.05;NB第20天,P<0.01;NB第30天,P<0.01）,提示膀胱组织纤维化在逐渐加重。以上结果表明,大鼠NB模型建立成功。3.CTGF免疫组织化学染色结果:在NB大鼠模型中,膀胱组织平滑肌及粘膜移行上皮可见CTGF着色明显,平滑肌细胞内可见粗大的棕色颗粒沉积,造模后20天CTGF表达最明显（与对照组比较,NB第10天,P>0.05;NB第20天,P<0.0001;NB第30天,P<0.001）,粘膜下层无明显棕色颗粒沉积。这些结果表明CTGF在NB模型组膀胱组织中的表达显着增加,提示其可能在膀胱纤维化发生中起重要作用。4.为了进一步证实CTGF对膀胱纤维化发生的影响,分离出原代BSMCs,并施加CTGF作用。免疫荧光染色发现,用CTGF处理后BSMCs的α-SMA显着增加（P<0.0001）;Western blot蛋白印迹分析显示BSMCs的Col Ⅰ和Col Ⅲ明显增加（P<0.01）。提示CTGF可能在NB中促进BSMCs的纤维化。结论1.电灼破坏双侧盆神经节的方法可成功建立大鼠去神经支配致膀胱纤维化的模型。2.失神经支配可导致膀胱纤维化的发生,CTGF可能在膀胱纤维化发生中起重要促进作用。第二部分施万细胞对膀胱平滑肌细胞纤维化的保护作用及其机制的研究研究目的检测大鼠膀胱纤维化模型不同时间段膀胱组织中BDNF表达水平,观察去神经支配的大鼠膀胱组织中BDNF含量的变化趋势。分离出BSMCs和施万细胞。将BSMCs进行单独培养或与施万细胞共培养,在培养的细胞体系中应用CTGF诱导纤维化的发生,检测不同培养体系中α-SMA、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的表达水平,观察施万细胞对BSMCs纤维化有无抑制作用。进一步实验探究施万细胞对BSMCs纤维化的作用是否是由BDNF介导。通过检测不同实验组基质金属蛋白酶-1（matrix metalloproteinase-1,MMP-1）、基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）和组织金属蛋白酶抑制剂-1（tissue inhibitor of matrix metalloproteinases 1,TIMP-1）表达情况,进一步揭示施万细胞和BDNF对BSMCs纤维化作用的潜在作用机制。研究方法利用本实验第一部分大鼠去神经支配建立的膀胱纤维化模型,通过酶联免疫吸附试验（Enzyme linked immunosorbent,ELISA）检测失神经第10天、20天和30天膀胱组织中BDNF的表达,观察去神经支配的大鼠膀胱组织中BDNF含量的变化趋势。从新生SD大鼠的坐骨神经中分离出施万细胞,与BSMCs共培养,施加CTGF诱导BSMCs,应用免疫荧光染色观察α-SMA表达,Western Blot方法检测Col Ⅰ和Col Ⅲ的表达水平,对比共培养体系与BSMCs单独培养纤维化指标的差异,评估施万细胞在膀胱纤维化中的作用。进一步通过ELISA检测BDNF在CTGF干预的共培养体系与单独培养的BSMCs中的变化情况,初步探索施万细胞对膀胱纤维化产生保护作用是否由BDNF介导。β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色检测施万细胞有无发生衰老,以排除施万细胞衰老对共培养体系实验结果的影响。根据是否与施万细胞共培养、施加BDNF作用等因素的差异设立不同的实验组:A组:BSMCs对照组,B组:BSMCs+CTGF作用,C组:BSMCs与施万细胞共培养+CTGF作用,D组:BSMCs+BDNF+CTGF作用。应用免疫荧光染色观察α-SMA、Col Ⅰ和Col Ⅲ表达的变化,进一步验证施万细胞对BSMCs纤维化的保护作用由BDNF介导。应用实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR,qPCR）检测各组 MMP-1、MMP-2 和 TIMP-1 mRNA 表达情况,揭示BDNF对BSMCs纤维化抑制作用的潜在机制。结果1.NB大鼠膀胱组织中BDNF含量显着降低。通过ELISA检测膀胱组织BDNF,发现NB去神经支配的大鼠膀胱组织中BDNF明显减少,且呈时间依赖性地降低（与对照组比较,NB第10天,P<0.01;NB第20天,P<0.001;NB第30天,P<0.0001）,这表明BDNF可能在NB膀胱纤维化中发挥保护作用。2.施万细胞能显着减轻BSMCs的纤维化。免疫荧光染色结果显示,在经过CTGF诱导纤维化之后,相较于BSMCs单独培养,BSMCs与施万细胞共培养体系中α-SMA表达降低（P<0.0001）,Western Blot结果显示BSMCs与施万细胞共培养体系中的Col Ⅰ和Col Ⅲ含量也显着降低（Col Ⅰ,P<0.001;Col Ⅲ,P<0.01）。这些结果表明,施万细胞能明显减轻CTGF诱导的BSMCs纤维化,并可能在NB膀胱纤维化中发挥保护作用。3.酶联免疫吸附试验表明,与单独培养的BSMCs相比,在施万细胞与BSMCs共培养体系中,BDNF表达显着增加（P<0.01）,这表明施万细胞对BSMCs纤维化的保护作用可能是通过BDNF介导的。4.β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色显示各组的阳性密度相当,表明施万细胞在CTGF干预及共培养体系均没有发生衰老。5.在进一步实验中,免疫荧光染色法观察到B组与A组比较,其α-SMA、ColⅠ和Col Ⅲ表达增强（P<0.0001）,这进一步验证了 CTGF能促进BSMCs纤维化的发生。C组与B组比较,其α-SMA表达降低（P<0.0001）,ColⅠ表达降低（P<0.05）,Col Ⅲ 表达降低（P<0.01）。D 组与 B 组比较,其 α-SMA、ColⅠ和 ColⅢ表达降低（P<0.0001）。提示施万细胞和BDNF均能抑制CTGF诱导的BSMCs的纤维化,施万细胞对纤维化的保护作用可能是通过BDNF产生的。6.通过对MMP-1、MMP-2和TIMP-1 mRNA表达的检测发现,B组与A组比较,MMP-1、MMP-2mRNA 表达降低,TIMP-1 mRNA 表达升高（P<0.0001）,提示CTGF可通过下调BSMCs中MMP-1 mRNA、MMP-2mRNA表达,上调TIMP-1 mRNA的表达促进纤维化的发生。同B组比较,C组MMP-1 mRNA（P<0.01）、MMP-2 mRNA（P<0.05）表达升高,TIMP-1 mRNA 表达降低（P<0.0001）;D 组MMP-1 mRNA（P<0.0001）、MMP-2 mRNA（P<0.01）亦存在表达升高,TIMP-1 mRNA也表现出表达降低（P<0.0001）,与C组中的表达变化趋势一致,施万细胞与BDNF均可逆转CTGF诱导BSMCs纤维化过程中的MMP-1、MMP-2 mRNA的表达下调与TIMP-1 mRNA的表达上调,进一步揭示了施万细胞可能通过分泌BDNF对BSMCs中MMP-1、MMP-2、TIMP-1表达水平进行调节,从而抑制纤维化的发生。结论1.施万细胞显着抑制BSMCs纤维化,这种作用与其产生BDNF的功能有关。2.施万细胞可能通过分泌BDNF对BSMCs中MMP-1、MMP-2、TIMP-1表达水平进行调节,从而抑制膀胱纤维化的发生。
宋晶[4]（2020）在《基于TGF-β1/LIMK1信号通路研究解毒通络方对大鼠心肌纤维化的抑制作用》文中研究指明目的:以盐酸异丙肾上腺素腹腔注射法复制大鼠心肌纤维化（Myocardial fibrosis,MF）模型,用细胞分子生物学技术和方法,观察TGF-β1/LIMK1信号通路在心肌纤维化过程中的表达情况,观察解毒通络方对TGF-β1/LIMK1信号通路的调控方式及干预MF的作用机制。方法:实验一:50只SD雄性大鼠随机分为5组,正常对照组、3d组、7d组、14d组、28d组,正常对照组给予生理盐水注射,其他组给予异丙肾上腺素腹腔注射5mg.kg-1,分别于3天、3天、7天、14天、28天时,记录大鼠体重并乙醚麻醉状态下迅速取SD大鼠心脏,测量心脏重量后,取出心室部,放入4%多聚甲醛固定液,供组织学HE染色,免疫组化法测α-肌动蛋白（α-SMA）、波形蛋白（Vim）阳性表达面积,取出心尖部迅速置于液氮中保存,分光光度法测羟脯胺酸含量。实验二:根据实验一结果,将60只SD雄性大鼠分为正常对照组、模型组、卡托普利组、中药低、中、高剂量组,正常对照组给予生理盐水注射,其他组给予异丙肾上腺素腹腔注射5mg.kg-1,中药组每日按10g、20g、30g.kg-1灌胃解毒通络方冲剂悬液;卡托普利组每日按5mg.kg-1灌胃卡托普利片悬液;正常对照组每日给予以等体积自来水灌胃。记录大鼠体重后乙醚麻醉状态下迅速取SD大鼠心脏,测量心脏重量计算心重指数;心尖部迅速置于液氮中保存,分光光度法测定羟脯胺酸含量。将心室部,放入4%多聚甲醛固定液,供组织学HE及MAasson染色,免疫组化法测I型胶原蛋白（Col I）、III型胶原蛋（Col III）、α-SMA、Vim、单丝氨酸蛋白激酶（LIMK1）阳性表达面积;眼球采血,收集血清并置于-20℃冰箱,收集的血清进行细胞分组培养。实验三:用提前制备的动物血清分正常对照组、模型组、卡托普利组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组培养成纤维细胞,Western-blot法检测各组成纤维细胞中α-SMA、Vim、ROCK1、LIMK1蛋白相对表达量;实时荧光定量PCR法检测成纤维细胞中TGF-β1、RhoA、ROCK1、LIMK1的mRNA含量;MTT法检测TGF诱导成纤维细胞增殖时相;用TGF刺激成纤维细胞后,实时荧光定量PCR法检测成纤维细胞中RhoA、ROCK1、LIMK1的mRNA含量。结果:实验一:大鼠心肌纤维化模型构建:1.HE染色结果:正常对照组心肌细胞横纹清晰,细胞和大小、间隙一致,胞浆染色清晰,注射异丙肾上腺素后3天、7天、14天、28天大鼠心肌组织细胞均出现细胞排列紊乱,坏死区细胞核固缩,胞浆减少或缺失,结缔组织增生。在3d组这种改变最明显,7d组、14d组相对减轻,28d组有所改善。2.心重指数:与正常对照组比较,3d组心重指数无明显差异,P>0.05。7d组、14d组、28d组心重指数下降,P<0.05。3.羟脯氨酸含量测定:与正常对照组比较,3d组、7d组、14d组、28d组羟脯胺酸含量明显增加,P<0.05,且随时间变化呈递增趋势。4.免疫组化结果:与正常对照组比较,3d组、7d组的大鼠心肌组织中,可见明显α-SMA、Vim蛋白阳性表达,且P<0.05。14d、28d组与正常对照组比较无显着差异P>0.05。实验二:解毒通络方动物体内药效学观察:1.心重指数:应用异丙肾上腺素制备大鼠心肌纤维化模型,采用注射后3天的造模方法。与正常对照组比较,模型组大鼠心重指数无明显增加,且P>0.05,与模型组比较,卡托普利组与中药低、中、高剂量组心脏指数无明显改变,且P>0.05。2.羟脯胺酸含量测定结果:与正常对照组比较,模型组羟脯氨酸含量明显增加,P<0.05;与模型组比较,卡托普利组与中药低、中、高剂量组羟脯氨酸含量明显下降,且P<0.05。3.HE染色:正常对照组细胞排列整齐,细胞间隙大小均一,胞浆染色均匀,模型组、卡托普利组以及各剂量中药组则出现不同程度的心肌纤维化表现,主要以细胞核固缩、心肌纤维溶解、断裂为主,细胞排列不规则,细胞结构破坏,细胞浆染色不均匀为主,卡托普利组与不同剂量中药组心肌纤维化程度较轻。4.Masson染色:与正常对照组比较,模型组、卡托普利组以及不同剂量中药组均出现不同程度的心肌组织损伤,具体表现为细胞核固缩,细胞排列紊乱,细胞间隙不规则,并出现大量蓝染的纤维胶原,并破坏心肌细胞,坏死部分有少量炎症浸润。与模型组比较,卡托普利组以及各剂量中药组心肌纤维化程度较轻。大鼠心肌组织中胶原纤维容积比（CVF）,与正常对照组比较,模型组明显增加,且P<0.05,与模型组比较,卡托普利组以及中药低、中、高剂量组明显减少,且P<0.05。5.免疫组化法测定ColI、ColIII、α-SMA、Vim、LIMK1蛋白阳性表达面积:（1）I型胶原蛋白及III型胶原蛋白在免疫组化染色中显示为棕色,与正常对照组比较,模型组I型胶原蛋白及III型胶原蛋白阳性表达面积明显高于正常对照组,P<0.05。与模型组比较,卡托普利组及中药低、中、高剂量组阳性表达面积明显低于模型组。P<0.05。（2）α-SMA、Vim蛋白阳性表达表现为棕色,与正常对照组比较,模型组中α-SMA、Vim蛋白表达面积明显高于正常对照组,且P<0.05;与模型组比较,卡托普利组与中药低、中、高剂量组α-SMA、Vim蛋白表达面积明显下降,P<0.05;（3）与正常对照组比较,模型组LIMK1蛋白表达量明显高于正常对照组,P<0.05。与模型组比较,卡托普利组与中药低、中、高剂量组明显低于模型组,P<0.05。实验三:解毒通络方对心肌成纤维细胞TGF-β1/LIMK1信号通路的作用1.Western-blot法检测各组成纤维细胞中α-SMA、Vim、ROCK1、LIMK1蛋白含量:（1）与正常对照组比较,模型组α-SMA、Vim蛋白表达量有所升高,有统计学差异P<0.05,卡托普利组与模型组比较表达量下降,具有显着差异,P<0.05。中药低、中、高剂量组与模型组比较有所下降,具有显着差异,P<0.05;（2）与正常对照组比较,模型组成纤维细胞中ROCK1蛋白表达含量明显增加,P<0.05。与模型组比较,卡托普利组、中药低、中剂量组与中药高剂量组成纤维细胞中ROCK1蛋白表达含量明显下降,有统计学差异,P<0.05。（3）与正常对照组比较,模型组LIMK1蛋白表达量有所升高,有统计学差异,P<0.05,卡托普利组与模型组比较表达量下降,具有显着差异,P<0.05。中药低、中、高剂量组与模型组比较有所下降,且具有统计学差异,P<0.05;2.荧光定量PCR法检测成纤维细胞中TGF-β1、RhoA、ROCK1、LIMK1mRNA含量:（1）荧光定量PCR检测各组成纤维细胞中TGF-β1的mRNA表达量,与正常对照组比较,模型组中TGF-β1mRNA的表达量明显上升,P<0.05。与模型组比较,卡托普利组与中药低、中、高剂量组中TGF-β1mRNA的表达量明显下降,P<0.05。（2）荧光定量PCR检测各组成纤维细胞中RhoA、ROCK1的mRNA的表达量:与正常正常对照组比较,模型组中RhoA、ROCK1的mRNA的表达量明显上升,P<0.05。与模型组比较,卡托普利组与中药低、中、高剂量组中RhoA、ROCK1mRNA的表达量明显下降,P<0.05。（3）应用荧光定量PCR检测各组成纤维细胞中LIMK1mRNA的表达量,结果显示,与正常对照组比较,模型组中LIMK1mRNA的表达量明显上升,P<0.05。与模型组比较,卡托普利组与中药低、中、高剂量组中LIMK1mRNA的表达量明显下降,P<0.05。3.MTT法检测TGF-β1诱导成纤维细胞增殖时相:用不同浓度的TGF-β1刺激成纤维细胞后,根据吸光值计算细胞增殖率,结果显示不同浓度的TGF-β1刺激成纤维细胞时,细胞表现出增殖现象,低浓度组、中浓度及高浓度组TGF-β1对细胞增殖均表现为24小时后出现增殖,48小时达到高峰,72小时后出现下降。而低浓度组在不同时间点均表现为最强的增殖率。中浓度组在各个时间点增殖率最低。所以在成纤维细胞增殖的研究中,选择低浓度(0.025 ng.ml-1)的TGF-β1为药物剂量,以48小时为时间点干预成纤维细胞。4.用TGF-β1刺激成纤维细胞后,荧光定量PCR法检测成纤维细胞中RhoA、ROCK1、LIMK1的mRNA含量:结果显示,（1）与正常对照组比较,模型组中RhoAmRNA含量明显增高。P<0.05。与模型组比较,卡托普利组与中药低、中、高剂量组中RhoAmRNA含量明显减少。P<0.05。（2）与正常对照组比较,模型组中ROCK1、LIMK1的mRNA含量明显增加,P<0.05。与模型组比较,卡托普利组以及中药低、中、高剂量组ROCK1、LIMK1的mRNA含量明显减少,P<0.05。结论:1.应用盐酸异丙肾上腺素注射液5mg.kg-1腹腔注射大鼠,3天后大鼠心肌组织病理形态改变,心肌组织中羟脯胺酸含量增加,心肌组织中α-SMA、Vim蛋白表达量增多,说明注射异丙肾上腺素3天后大鼠心肌纤维化模型制备成功。2.在应用解毒通络方干预大鼠心肌纤维化模型时,心肌纤维化有明显的改善。并通过抑制心肌胶原蛋白的分泌及沉积而实现抑制心肌纤维化。3.在体外应用解毒通络方干预大鼠成纤维细胞时,可通过下调TGF-β1/LIMK1信号通路中RhoA、ROCK1、LIMK1因子,抑制成纤维细胞中α-SMA、Vim蛋白表达,从而抑制心肌纤维化。4.在TGF-β1诱导大鼠成纤维细胞增殖时,解毒通络方可以抑制成纤维细胞增殖,并通过下调TGF-β1/LIMK1信号通路中RhoA、ROCK1、LIMK1因子而实现的。
秦田雨[5]（2020）在《肾康注射液对慢性肾脏病和肾纤维化的作用及机制研究》文中提出[目的]从整体动物、细胞和分子水平,结合系统药理学靶点预测,研究中药复方肾康注射液（Shenkang,SK）对慢性肾脏病（chronic kidney disease,CKD）和肾纤维化的保护作用和机制,为SK对CKD及肾纤维化的临床治疗提供更多的数据支持及科学依据。[方法]1.系统药理学:首先通过数据挖掘和文献查阅构建SK分子数据库,并通过药物相似性和药物半衰期评估来筛选活性分子;使用WES药物靶向模型来预测生物活性成分的直接药物靶向;使用Cytoscape 3.2软件构建复合物-靶标,靶标-通路和靶标-疾病网络,并根据BioGPS数据库确定靶标在组织和器官中的分布。2.整体动物:C57BL/6小鼠36只,采用随机对照设计法将小鼠按体重随机分为:假手术组,模型组,阳性药（ARB）组,SK高剂量组,SK中剂量组,SK低剂量组（n=6）。对模型组、ARB组、SK各剂量组小鼠实施UUO手术,制备肾纤维化模型,假手术组分离左输尿管但不结扎输尿管。术后第一天开始给药,共计14天。假手术组和模型组:尾静脉注射生理盐水0.13 mL/10 g,灌胃生理盐水0.15 mL/10 g,ARB组:尾静脉注射生理盐水0.13 mL/10g,灌胃氯沙坦钾溶液0.15 mL（生药0.13 g）/10 g,SK高剂量组:尾静脉注射SK 0.13 mL（生药0.08 g）/10 g,灌胃生理盐水0.15 mL/10 g,SK中剂量组:尾静脉注射SK 0.13 mL（生药0.04 g）/10 g,灌胃生理盐水0.15 mL/10 g,SK低剂量组:尾静脉注射SK 0.13 mL（生药0.02 g）/10 g,灌胃生理盐水0.15 mL/10 g,实验过程中观察记录小鼠体重等一般情况,给药第13天行MRI扫描测定FA值明确活体肾纤维化程度,给药14天后摘眼球取血,称量肾脏重量,分别冻存固定肾脏。比色法测定血肌酐、血尿素氮、血CysC水平,行HE和天狼星红染色观察患侧肾脏病理形态学和纤维化程度,透射电镜观察超微结构情况,Western Blot检测各组小鼠肾脏肌成纤维细胞标志物α-SMA,ECM成分Col Ⅰ,JAK2/STAT3通路分子蛋白磷酸化水平,Real-time PCR检测假手术组、UUO组和SK中剂量组肾脏肌成纤维细胞标志物α-SMA,FSP-1、ECM成分(Col Ⅲ,JAK2、STAT3、TGF-β1和负调节分子SOCS1,SOCS3 mRNA水平。3.细胞:NRK-49F细胞进行复苏传代培养,以10 ng/mL 的TGF-β1刺激48 h诱导NRK-49F细胞增殖活化,不同浓度SK（0,1,2,4mg/mL）干预后,观察细胞形态、Western Blot检测NRK-49F细胞成纤维细胞标志物α-SMA,ECM成分Col Ⅲ,JAK2/STAT3通路分子蛋白磷酸化水平和负调节分子Prdx5的表达,Real-time PCR检测NRK-49F细胞肌成纤维细胞标志物α-SMA,JAK2、STAT3 mRNA 水平。[结果]1.系统药理学部分:以DL≥0.6为筛选标准,“HL=long”用于定义适当的HL范围。最终选出88种化合物作为活性分子。利用WES算法和CTD、TTD筛选结果,确定了 85个与治疗CKD相关的潜在化合物作用靶点,包括STAT3。通过KEGG数据库映射获得关键通路,包括NF-κB、MAPK、TRP离子通道和VEGF通路,结合CKD病理机制的相关进展,构建了 CKD治疗模块的通路,包括炎症、增殖、分化、迁移、通透性、降解等模块。对靶标-疾病相互作用网络的深入分析表明,SK治疗CKD主要通过影响6种疾病发挥作用:泌尿生殖系统疾病、代谢性疾病、内分泌疾病、心血管疾病,病理过程和免疫疾病。组织定位结果显示SK通过包括肾脏、肝脏、肺和心脏在内的组织模块发挥作用。2.整体动物部分:（1）肾功能检测:与假手术组比较,UUO组小鼠肾脏血CREA、BUN、Cys-C水平显着性升高（p<0.01）;与UUO组相比,ARB和高剂量SK组小鼠血CREA水平显着降低（p<0.01）;与UUO组相比,ARB和SK各剂量组小鼠血BUN水平显着降低（p<0.05或p<0.01）;与UUO组相比,SK高剂量组小鼠血Cys-C水平显着降低（p<0.05）。（2）肾脏重量和病理检测:与假手术组相比,UUO模型组的患侧肾质量/体重、患侧肾/对侧肾质量、对侧肾质量/体重均显着增加（p<0.05或p<0.01）。但各药物治疗后对UUO小鼠肾脏重量各指标没有产生影响。与假手术组比较,UUO组小鼠肾脏FA值显着性升高（p<0.01）;与UUO组相比,ARB阳性药组、SK高中低剂量组FA值显着降低（p<0.01或p<0.001）,其中以SK中剂量组最为显着（p<0.001）。与假手术组比较,UUO组小鼠肾脏病理损伤明显;与UUO组比较,各治疗组肾脏损伤情况均有不同程度缓解,细胞外基质积聚、炎性细胞浸润、肾小管扩张和/或萎缩减轻,以SK中剂量组和高剂量组较好。与假手术组比较,UUO组小鼠天狼星红面积极显着增加（p<0.001）;与UUO组比较,ARB组、SK高、中、低剂量组小鼠患侧肾脏天狼星红染色红色面积显着减少（p<0.05或p<0.01）。电镜下观察各浓度SK对UUO所致的细胞器丰富的成纤维细胞增多,间质局灶胶原纤维增生和肾小管凋亡均有一定的改善作用。（3）Western blot检测:与假手术组相比,UUO组α-SMA蛋白水平显着增加（p<0.01）,与UUO比较,SK中剂量组和低剂量组显着下调了 UUO状态下的α-SMA蛋白水平升高（p<0.05）;与假手术组相比,UUO组Col Ⅰ蛋白水平显着增加（p<0.01）,与UUO 比较,SK中剂量组显着下调了 Col Ⅰ蛋白水平升高（p<0.05）;与假手术组相比,UUO组p-STAT3（Try705位点）/STAT3比例显着增加（p<0.01）,与UUO比较,SK中（p<0.01）、低剂量（p<0.001）组显着下调了 Try705位点的STAT3磷酸化程度;与假手术组相比,UUO组p-JAK2（Try1007位点）/JAK2比例有上升趋势,但无统计学差异,与UUO 比较,SK高剂量组显着下调了 Try1007位点的JAK2磷酸化程度（p<0.05）,（4）PCR检测:与假手术组相比,UUO组小鼠患侧ECM成分Col Ⅰ、Col Ⅲ、FN,成纤维细胞活化标志物α-SMA、FSP-1,以及 JAK2、STAT3、TGF-β、JAK2/STAT3 通路负调节因子SOCS1、SOCS3 mRNA水平显着上升（p<0.05或p<0.01或p<0.001）;与UUO组相比,SK中剂量组显着降低了 Col Ⅰ、ColⅢ、FN,α-SMA、FSP-1,JAK2、TGF-β、SOCS1、SOCS3 mRNA 水平（p<0.05 或p<0.01）。3.细胞实验:TGF-β1诱导后,NRK-49F细胞的细胞骨架显示出内部微丝束,并逐渐增厚和伸长,丧失纺锤形或星形成纤维细胞外观。不同浓度的SK一定程度上逆转了TGF-β1诱导的形态变化和增殖。与空白对照组比较,模型对照组成纤维细胞p-STAT3（Try705位点）/STAT3、Prdx5蛋白水平显着性升高（p<0.05）,p-JAK2（Try1007位点）/JAK2有一定程度升高但未达统计学意义（p>0.05）;与模型对照组相比,4 mg/mL SK组和2 mg/mL SK组细胞的STAT3蛋白Try705位点的磷酸化水平显着降低（p<0.05）,1 mg/mL SK组和2 mg/mL SK组细胞的JAK2蛋白Try1007位点的磷酸化水平显着降低（p<0.05）,4 mg/mL SK组细胞的Prdx5蛋白表达水平显着降低（p<0.05）。与空白对照组比较,模型对照组成纤维细胞α-SMA、JAK2、STAT3 mRNA水平显着升高（p<0.05或p<0.001）;与模型对照组相比,ARB及不同浓度SK均极显着地降低了α-SMA mRNA 水平（p<0.001）,与模型对照组相比,ARB、1mg/mL、2 mg/mL SK（p<0.05）及 4 mg/mL SK（p<0.01）显着降低了 STAT3 mRNA 水平,与模型对照组相比,ARB及4 mg/mL SK显着降低了 JAK2 mRNA水平（p<0.05）。[结论]（1）系统药理学预测显示SK中多种化合物可能通过作用于与炎症、凋亡、增殖等相关的NF-κB、MAPK、TRP离子通道和VEGF等多通路的靶点分子治疗CKD。（2）SK有效改善UUO小鼠肾功能指标和肾间质纤维化,其机制可能是通过调节JAK2/STAT3信号通路抑制成纤维细胞活化实现的,验证了系统药理学结果。（3）SK还能够抑制TGF-β1诱导NRK-49F增殖活化以及ECM产生,其作用机制可能是通过抑制JAK2/STAT3通路的激活介导的。
鲁齐林[6]（2020）在《高糖伴腰椎管狭窄黄韧带肥厚的炎性机制及姜黄素的干预效应研究》文中认为背景整体观是祖国医学基本哲学观,整体观哲学强调人是有机的整体,机体整体与局部在生理与病理中都存在相互联系及影响。近年来2型糖尿病与退行性腰椎管狭窄症之间的关系研究成为了现代医学的热门领域。祖国医学在早期亦介绍此全身影响性疾病消渴对局部腰痹病存在影响,并提示两者的媒介因素可能是血瘀。现代炎症反应概念是祖国医学血瘀内涵的重要部分之一,其也是结缔组织纤维化的重要环节。本课题在中医整体观理论指导下,通过现代实验技术探究全身性代谢性疾病2型糖尿病（属于消渴范畴）对脊柱局部常见的退行性腰椎管狭窄（属于腰痹病范畴）黄韧带肥厚的具体作用机制及中药在其防治方面的潜在价值研究。目的在中医整体观指导下,通过回顾性分析,探究全身性代谢性疾病2型糖尿病（属于消渴范畴）对局部退行性腰椎管狭窄（属于腰痹病范畴）患者中椎管内黄韧带等重要参数的影响;通过人体黄韧带组织检测及病理分析、体外实验研究,探讨巨噬细胞移动抑制因子（MIF）及其相关的促纤维化炎症介质在黄韧带中含量、对应黄韧带病理学改变以及MIF对黄韧带效应细胞的促炎性机理,阐明血瘀理论概念下的炎症反应在两者之间的关系;根据“从瘀而治”理论,探讨活血化瘀中药姜黄有效成分姜黄素对MIF作用于成纤维细胞的干预效应。方法第一部分:在中医整体观指导下,回顾性分析中国人民解放军中部战区总医院3年来（2016年1月1日-2019年1月1日）诊断为退变性腰椎管狭窄症住院病人。在双盲前提下测量并对比合并2型糖尿病（DM+）与非合并2型糖尿病（DM-）两组人群之间在黄韧带厚度、下关节突间距、椎管有效腔隙矢状径方面的情况,研究两组人群之间是否存在差异性。第二部分:前瞻性设计:在2018年8月27日-2019年5月29日,结合诊断、纳入、排除标准,录入湖北六七二中西医结合骨科医院所有脊柱外科40例退行性腰椎管狭窄症手术患者。根据合并2型糖尿病与否分为DM+组和DM-组。40例患者中合并2型糖尿病20例（DM+组）,其中男性8例,女性12例,平均年龄61.55±2.41岁,BMI:25.62±0.785,该组黄韧带来源L4/L5水平14例,L5/S1水平4例,L3/L4水平2例;非糖尿病患者20例（DM-组）,其中男性11例,女性9例,平均年龄58.85±3.78岁,BMI:23.60±0.643,该组黄韧带来源L4/L5水平15例,L5/S1水平3例,L3/L4水平2例。术前根据Jong-Beom Park黄韧带测量方法在腰椎MRI水平面上测量手术节段黄韧带厚度。术中40例黄韧带样本完整取出后按左右侧分为a、b两份（a份干冰盒收集后冻存、b份予以甲醛固定）,a份采用ELISA技术检测MIF及相关促纤维化炎症介质（TGF-β1、IL-1β、IL-6、TNF-αMMP-13）含量;b份采用Masson染色及IHC染色后Image-Pro Plus 6.0软件对图片进行量化。运用影像、生化、统计方法来对比两组样本之间的差异。第三部分:采用NIH3T3细胞进行常规方法复苏、培养、传代（实验用3-5代）进行体外细胞实验。1.正常（5mM葡萄糖）与高糖（25mM葡萄糖）浓度刺激NIH3T3细胞48小时,Western Blot检测MIF的表达差异及镜下观察细胞增殖情况。2.引入外源性MIF（重组鼠巨噬细胞移动抑制因子,rmMIF）,按浓度设置为N正常浓度对照组（2 ng/ml）、L低浓度组（4 ng/ml）、M中浓度组（10ng/ml）、H高浓度组（50 ng/ml）刺激NIH3T3细胞进行研究:（1）48h时间点光镜下观察比较不同浓度rmMIF对NIH3T3细胞增殖生长形态的影响;（2）分别在0、24、48、72h时间点予以CCK-8法检测对比四组之间A450值（酶标仪下450nm处的吸光度值）;（3）48h流式细胞术检测比较成纤维细胞增殖S期情况。3.设置正常浓度rmMIF（2ng/ml）、高rmMIF浓度（50ng/ml）、高rmMIF浓度+Rho激酶特异性抑制剂Y27632三组刺激NIH3T3细胞48 h后运用RT-PCR及Western Blot法检测对比三组之间细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）的m RNA与蛋白表达差异。第四部分:NIH3T3细胞体外实验,分组设计:A组（无处理组）、B组（刺激组）加rm MIF（50ng/ml）、C组（抑制剂组）加rm MIF（50ng/ml）+ISO-1（20μM）、D组（姜黄素组）加rm MIF（50ng/ml）+姜黄素（20μM）与DMEM培养液一并置37℃、5%CO2孵箱培养48 h,分别采用:（1）CCK-8检测法在48h对无处理组、刺激组、姜黄素组三组用酶标仪测450 nm处的吸光度值（A450值）;（2）运用RT-PCR及Western Blot方法检测比较各组之间炎症介质（TGF-β1、MMP-13、IL-1β、IL-6、TNF-α）及胶原蛋白（COL-1、COL-3）的m RNA与蛋白表达差异。结果第一部分:通过测量与对比研究发现,合并2型糖尿病组（DM+）与非合并2型糖尿病组（DM-）黄韧带厚度为（5.23±0.71）mm vs（4.42±0.60）mm;下关节突间距为（11.32±1.23）mm vs（12.09±1.57）mm;椎管有效腔隙矢状径为（7.57±1.87）mm vs（8.24±1.74）mm;两组在此三种参数中存在统计学差异（P<0.05）。第二部分:DM+组vs DM-组:黄韧带厚度为（5.567±1.090）vs（4.828±0.552）mm;MIF含量为（312.105±80.820）vs（210.363±62.182）pg/mg protein;TGF-β1含量为（2728.121±890.373）vs（2170.131±689.459）pg/mg protein;MMP-13含量为（564.167±189.391）vs（379.841±101.363）pg/mg protein;IL-1β含量为（15.585±5.797）vs（10.785±2.787）pg/mg protein;IL 6含量为（17.238±4.449）vs（12.523±2.842）pg/mg protein;TNF-α含量为（13.947±4.688）vs（9.829±2.616）pg/mg protein;Masson染色后的胶原纤维胶原容积分数为（50.354±9.762）vs（41.803±5.873）;IHC中MIF阳性染色IOD为（2808.882±699.779）vs（1615.892±408.609）以上指标在两组之间差异有统计学意义（P<0.05）;IHC中MIF阳性染色棕色颗粒分布于黄韧带成纤维细胞细胞核、胞质内以及基质中,而且此病理现象在DM+组内更加明显。相关性分析显示:黄韧带内的MIF浓度与厚度呈正相关（r=0.768,P=0.000）。第三部分:1.相比于正常糖浓度,体外高糖浓度下培养的NIH3T3细胞对MIF蛋白的表达水平更高且48h时间点高糖浓度组NIH3T3细胞增殖明显。2.（1）光镜下可见同一时间点（48h）不同rm MIF浓度组间NIH3T3细胞生长呈现差异,rm MIF刺激浓度越高细胞密度越大;（2）CCK-8检测显示:正常、低、中、高rm MIF浓度组间A450值（48h）组间总体均数差异有统计学意义（P<0.05）,与正常浓度对照组相比,低、中、高rm MIF浓度组增殖活性高且差异有统计学意义（P<0.05）;（3）流式细胞术检测显示随rm MIF浓度增加各组内S期的细胞占比增多。3.rm MIF刺激NIH3T3细胞48 h后细胞Cyclin-D1的m RNA和蛋白表达增加,经Rho途径抑制剂阻滞后Cyclin-D1的m RNA和蛋白表达降低。第四部分:CCK-8检测显示:刺激组较无处理组A450值高（P<0.05）,姜黄素组较刺激组A450值降低（P<0.05）,姜黄素组与无处理组A450值无统计学差异（P>0.05）;RT-PCR及Western Blot检测显示:B刺激组较A无处理组各因子胶原m RNA及蛋白表达更高（P<0.05）;D姜黄素组较B刺激组的表达降低（P<0.05）;D姜黄素组与C抑制剂组间表达差异无统计学意义（P>0.05）。结论1.合并2型糖尿病的腰椎管狭窄症患者人群中,黄韧带肥厚等3种参数退变程度明显高于非糖尿病患者,证实了2型糖尿病是腰椎管狭窄,尤其是黄韧带肥厚的易感因素。揭示全身代谢性因素可对腰椎局部产生影响,符合中医整体观理论;2.在2型糖尿病合并腰椎管狭窄患者的黄韧带内发现MIF及其相关的促纤维化炎症介质（TGF-β1、IL-1β、IL-6、TNF-αMMP-13）含量更高,其中MIF含量与黄韧带厚度呈正相关。在合并2型糖尿病组内黄韧带样本内存在更明显的弹力纤维降解及胶原纤维增生现象,而且该组人群MIF的含量高且在黄韧带中的分布更加广泛。3.高糖环境刺激成纤维细胞高表达的MIF可促进成纤维细胞增殖及炎性介质表达,MIF参与的炎症反应可能在介导合并2型糖尿病的腰椎管狭窄黄韧带肥厚病理过程中占主导地位,其中,MIF促进的成纤维细胞增殖及胶原纤维增生可能是黄韧带瘢痕修复致其肥厚的重要部分。炎症反应包括炎性损伤及修复两重要部分,其是中医血瘀理论的主要内涵之一;4.活血化瘀中药姜黄的有效成分姜黄素可有效地阻断MIF对成纤维细胞的相关炎性及促增殖效应,这表明姜黄可能是防治2型糖尿病合并腰椎管狭窄黄韧带肥厚的有效药物之一,值得进一步研究。以上研究进一步说明了中医整体观在分析合并2型糖尿病的腰椎管狭窄黄韧带肥厚机理中的重要指导作用,同时也有力地证明了血瘀是消渴影响腰痹病的重要媒介因素且活血化瘀药遵循中医“从瘀而治”理论可能是此类全身性慢性疾病并发腰椎黄韧带肥厚寻找有效干预方法的重要指导依据之一。
鲁曼[7]（2020）在《电针委中穴对大鼠腰多裂肌损伤后TGF-β1、CTGF、Vimentin表达的影响》文中进行了进一步梳理腰痛是临床上比较常见的症状之一,不仅发病率高,而且也容易复发,通常情况下,患者可自觉腰部的疼痛、麻木、乏力等感觉,主要表现为一侧或两侧的疼痛不适,一般为局限性的异常感觉,但是严重者除了腰部不适外,也会出现下肢放射性的疼痛感。腰痛作为临床常见症状,并不是仅仅出现在疼痛科、针灸科和骨科,其它科室的疾病也会引起腰部的不适感,比如妇科和泌尿外科。“委中”穴是足太阳膀胱经上的穴位,其所在的经脉循行和经筋循行的路线均经过人体的腰背部,临床上选用“委中”穴来治疗腰腿痛,体现了“经脉所过,主治所及”的理论;且“委中”穴为膀胱经的下合穴,选用“委中”穴治疗腰痛,可以体现“合治内腑”的理论;《四总穴歌》中“腰背委中求”的记载,是对腰痛病选用“委中”穴进行治疗的经验总结,充分体现了古人的智慧。多裂肌位于脊柱两侧的深部位置,附着在脊柱旁,是核心肌群的重要组成部分之一,腰部多裂肌在功能状态正常的情况下,能够协助腰部完成侧屈、前屈、后伸、旋转活动,是保持机体腰部正常运动的重要肌肉之一,能够维持腰部及脊柱的稳定性。腰部多裂肌受到损伤或外力刺激,功能状态发生异常时,腰部脊柱及其周围的筋膜、小关节、韧带等组织就会出现力量失衡,损伤严重时,腰部便会出现明显的疼痛感,遇到挤压神经时,便会出现下肢放射性疼痛。可知,腰部多裂肌与腰痛的发生密切相关,因此探索腰部多裂肌损伤以后的修复情况,对于腰痛的治疗具有重要的指导意义。转化生长因子TGF-β1在肌肉再生和肌肉纤维化中发挥着重要的作用,结缔组织生长因子CTGF是其下游因子,TGF-β1能够促进结缔组织CTGF活跃,而结缔组织增多会直接导致器官和组织的纤维化产生,以往研究表明,TGF-β1能够诱发肌肉纤维化,促进成纤维细胞增生,因此TGF-β1和CTGF的过度表达,都不利于肌肉损伤后的修复,严重时会促使组织形成瘢痕。Vimentin波形蛋白,它是肌肉生长的重要指标,在肌肉再生早期发挥着重要的作用,能够引发肌卫星细胞的激活,从而促进组织损伤修复。研究目的本研究通过观察多裂肌损伤后的组织形态学变化,以及TGF-β1、CTGF、Vimentin的表达变化,来探讨电针“委中”穴对大鼠腰多裂肌损伤后肌纤维再生和致纤维化相关因子的影响,为临床针灸治疗腰痛提供实验数据支持。研究方法将54只雄性8周龄SD大鼠,分成空白组、模型组、电针委中穴组,每组各18只,再将每组随机分成治疗1d、3d、7d三个时间点,每个时间点各6只大鼠。空白组不进行任何处理;电针委中穴组进行电针治疗,每天治疗1次,每次持续20min;模型组与电针委中穴组同步固定,但不采取治疗措施。通过Masson染色法观察各组大鼠多裂肌组织形态学变化,免疫组化法检测各组大鼠TGF-β1、CTGF、Vimentin的表达情况,Western-blot法检测各组大鼠TGF-β1的蛋白表达情况。研究结果（1）Masson染色结果:空白1d、3d、7d组可以观察到大量被红染的肌纤维,它们整齐的分布,排列着;模型组可以见到大量被蓝染的胶原纤维,其间分布着少许红色的肌纤维;电针委中穴组与模型组相比,可以见到红染的肌纤维,相对而言,被蓝染的胶原纤维则较少。（2）免疫组化法检测结果TGF-β1:治疗1d时,与空白组相比,模型组与电针委中穴组的TGF-β1降低（P<0.01,P<0.01）;与模型组比较,电针委中穴组有下降趋势（P<0.01）。治疗3d时,模型组与电针委中穴组的表达高于空白组（P<0.01,P<0.01）;与模型组相比,电针委中穴组的表达减少（P<0.01）。治疗7d时,模型组与电针委中穴组的表达高于空白组（P<0.01）;电针委中穴组的表达比模型组减少（P<0.01）。CTGF:治疗1d时,模型组比空白组的表达增加（P<0.01）,电针委中穴组比空白组的表达有所上升（P<0.05）;与模型组比较,电针委中穴组的表达减少（P<0.05）。治疗3d时,模型组的表达量高于空白组（P<0.01）,电针委中穴组与空白组之间差异无统计学意义（P>0.05）;治疗7d时,模型组与电针委中穴组表达量高于空白组（P<0.01,P<0.01）,而电针委中穴组表达量低于模型组（P<0.01）。Vimentin:治疗1d时,模型组与电针委中组的表达量高于空白组（P<0.01,P<0.01）;与模型组比较,电针委中穴组有所增加（P<0.01）。治疗3d时,与空白组比较,模型组与电针委中穴组表达增加（P<0.01,P<0.01）;电针委中穴组比模型组更高（P<0.01）。治疗7d时,模型组与电针委中穴组表达量高于空白组（P<0.01,P<0.01）,电针委中穴组表达量高于模型组（P<0.05）。（3）Western-blot法检测结果TGF-β1治疗1d时,与模型组相比,电针委中穴组表达下降（P<0.05）;治疗3d时,与空白组比较,电针委中穴组表达量降低（P<0.05）;治疗7d时,各组之间差异无统计学意义（P>0.05）。研究结论（1）电针“委中”穴能够降低TGF-β1和CTGF的表达量,同时增加Vimentin的表达量,这是促进骨骼肌损伤修复的机制之一。（2）电针通过抑制纤维化因子的表达,提高肌纤维再生的能力,达到治疗大鼠骨骼肌损伤修复的目的,其效果最明显可能出现在第3天。
邹书帆[8]（2019）在《KLF15抑制小鼠心室超负荷所致心功能衰竭的作用及机制研究》文中研究表明背景与目的风湿性主动脉瓣狭窄是常见的导致左心室超负荷的疾病,是造成心力衰竭的主要病因之一;但是,通过人工瓣膜置换解除心室负荷并不能使所有患者同等受益。患者术后心脏形态、功能的恢复情况与术前心功能情况呈正相关。我们在前期动物实验中也发现,升主动脉缩窄50%的左室超负荷大鼠心脏功能会经历一段相对正常甚至轻度增加的代偿期以及进行性降低的失代偿期,并在进一步的去负荷手术中发现代偿阶段的左室超负荷大鼠心脏形态恢复佳,而失代偿阶段却不能有效的恢复初始水平。虽然我们的前期研究很好的验证了临床现象,但对于左室超负荷致心功能代偿向失代偿的转变的具体机制尚未明确,有待进一步研究。在超负荷所致机械应力作用下产生包括:心肌细胞肥大、间质纤维化、微血管结构破坏、间质胶原沉积等变化统称为心肌重塑,是心肌结构改变的主要病理学特征。在心肌组织中,约70%的细胞都是非心肌细胞,成纤维细胞及内皮细胞是其中数量最多的细胞种类。我们推测心肌细胞除了自身的适应性肥大之外,可能对间质重塑的发生发展也起到重要的调控作用,而间质重塑导致的基质结构的改变可能是心脏功能从代偿到失代偿转变的标志。因此,研究超负荷过程中不同时期心肌重塑的变化特点及分子机制具有重要的意义。大量研究表明,Krüppel样因子家族成员KLF15对间质纤维化有重要的抑制作用,但具体机制不清楚。有研究表明,慢性主动脉瓣狭窄患者心肌组织TGF-β显着增加,同时,受TGF-β调控的CTGF的表达也增强并证实了Smad3的磷酸化是TGF-β调控CTGF表达的关键环节,推测可能与KLF15竞争性抑制磷酸化Smad3对CTGF转录启动子的促进作用。另一方面,有研究发现:慢性压力超负荷会导致p38-MAPK活化进而抑制KLF15的表达。推测KLF15低表达可能是心肌细胞对间质纤维化调控的关键因素。最新研究显示:KLF15对心肌间质血管生成中有着重要的作用,可能是KLF15抑制心功能失代偿性转变的另一关键途径,其机制可能与KLF15正性调控VEGF的分泌有关,有待进一步研究。基于前期研究及国内外进展,我们推测在超负荷疾病的病理生理发展过程中不同时期心肌重塑的变化各有特点,而间质性重塑是导致心功能衰竭的重要环节。KLF15作为关键性负性调控因子抑制间质重塑从而抑制心功能衰竭。本研究引入KLF15过表达转基因小鼠,并通过构建左室压力超负荷小鼠模型,对KLF15抑制左心室压力超负荷所致心功能衰竭作用及机制进行深入研究,有助于我们深入理解瓣膜疾病等压力超负荷疾病的病理生理过程,并为改善慢性重症瓣膜疾病的临床转归提供理论依据。研究方法1.选用8-10周龄野生型（WT）健康雄性SPF级饲养C57/BL6J小鼠,在非人工通气条件下行升主动脉缩窄术构建左室压力超负荷小鼠模型。分别于术前及术后1周、2周、3周、4周、5周、6周行心脏超声检查其射血分数（EF）及短轴缩短率（FS）,明确在不同时间点左室超负荷小鼠的心功能情况。在确定小鼠心功能代偿期及失代偿期的具体时间点后,进一步采用M型心脏超声及电子天平对其左室厚度、左室内径、心脏重量、肺重量等具体指标进行检测,从大体形态上评价左室超负荷小鼠在不同阶段心脏的形态学变化特点。2.在左室超负荷野生型小鼠心功能代偿期及失代偿期分别对其心肌组织行HE、Masson染色及血管内皮特异性标志物CD31免疫组化染色;ELⅠSA检测其心肌组织Ⅰ型胶原及Ⅲ型胶原含量;WB检测心肌组织KLF15及其相关蛋白CTGF、VEGF的表达情况,p38、Smad3的磷酸化水平;并设置假手术组为空白对照。从心肌显微结构及分子表达层面进一步阐明心功能代偿期及失代偿期的不同特点,并对KLF15与其相关蛋白CTGF、VEGF表达水平及p38、Smad3磷酸化水平的内在关系进行更深入的研究。3.引入心脏过表达KLF15转基因（TG）小鼠为研究对象建立左室压力超负荷模型,以野生型小鼠左室压力超负荷模型为阴性对照,并分别设置假手术组作为空白对照。通过应用超声心动图、心脏重量、肺重量、病理学及免疫组化染色、ELISA及WB等检测方法从大体标本、微观结构及分子生物学三个层面对KLF15如何调控相关因子的表达从而抑制左室超负荷所致心功能衰竭的具体机制进行更深一步的探讨研究结果1.超声心动图提示,在升主动脉缩窄术后2周时,与假手术组相比,超负荷组EF及FS均有一定程度的增加,且达到代偿高峰,但差异无统计学意义。2周之后超负荷组心功能随缩窄时间延长呈下降趋势,且在缩窄5周及6周与假手术组出现明显差异（P<0.05）。从心脏形态变化来看,心功能代偿期小鼠心脏主要呈现出以IVS、LVPW增加为特征的向心性肥厚表现,而心功能失代偿期小鼠主要呈现以LVID增加为特征的离心性肥厚表现。心脏重量及肺重量的检测结果表明,心功能代偿期主要表现为心脏重量的增加,而在心功能失代偿期心脏重量与肺重量均有增加且肺重量增加更为显着。2.HE染色显示:心功能代偿期小鼠心肌细胞出现肌纤维横截面增粗、间距增加,细胞核深染等肥大表现,心功能失代偿期小鼠在肌纤维增粗的同时,其间距进一步增加,且出现胞质断裂,碎片样改变及肌纤维排列不规则等表现。Masson染色显示:心功能失代偿期小鼠心肌组织出现了严重的纤维化反应。CD31免疫组化染色显示心功能代偿期小鼠心肌组织CD31密度增加,而心功能失代偿期小鼠CD31密度明显降低。ELISA显示:心功能代偿期小鼠心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量与假手术组相比差异无统计学意义（P﹥0.05）;心功能失代偿期小鼠心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量与假手术组相比明显增加（P<0.01）。WB显示:心功能代偿期小鼠心肌仅表现出Smad3磷酸化水平的增加（P<0.01）,而心功能失代偿期小鼠心肌KLF15及VEGF表达水平降低（P<0.01）、CTGF表达水平及p38、Smad3磷酸化水平均明显增加（P<0.01）。3.在左室超负荷6周的条件下,超声心动图提示,与WT小鼠相比,TG小鼠LVID的增加及EF、FS的降低均有明显减轻。肺重量增加相对轻微。病理学染色显示野生型小鼠表现出更为严重的间质纤维化反应。CD31免疫组化染色显示WT及TG小鼠心肌组织CD31密度均明显降低,TG小鼠心肌组织CD31密度降低程度更为轻微。ELISA显示:左室超负荷WT小鼠心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量与左室超负荷TG小鼠相比明显增加（P<0.01）。WB显示:与左室超负荷WT小鼠相比,左室超负荷组TG小鼠CTGF表达水平明显降低（P<0.01）;VEGF及KLF15表达水平均明显增加（P<0.01）。结论1.本研究采用的非人工通气升主动脉缩窄术可成功构建左室超负荷动物模型,且在应用该建模方法后2周和6周两个不同时相点,分别可成功构建出心功能代偿模型及心功能失代偿模型;2.在心功能代偿期,心肌重塑的特点主要表现为心肌细胞肥大及间质微血管密度一定程度的代偿增加,无明显间质纤维化,心功能可维持正常甚至一定程度代偿增加;其机制与KLF15抑制p-Smad3对CTGF转录的促进作用及对VEGF的正性调控有关。3.在心功能失代偿期,除了心肌细胞本身的肥大之外,还出现了心肌间质严重的纤维化、胶原蛋白沉积及间质血管生成障碍等复杂的立体的重塑,并伴随着心功能的降低。其机制与p38磷酸化抑制KLF15表达,低表达的KLF15失去了对CTGF转录的抑制作用及VEGF转录的促进作用有关。4.心脏特异性KLF15过表达转基因小鼠可明显改善左室压力超负荷6周所导致的心功能衰竭,其作用途径与抑制间质纤维化、胶原沉积及促进血管生成作用有关。具体机制与KLF15过表达补偿了上游磷酸化p38对其的抑制作用,并通过正性调控VEGF表达与负性调控CTGF表达实现。
刘宇[9]（2019）在《骨骼肌急性损伤修复过程中巨噬细胞作用及相关机制研究》文中认为研究目的:骨骼肌损伤是运动医学领域最常见损伤之一,其修复机理的研究,已不再局限于肌卫星细胞本身,免疫细胞特别是巨噬细胞在肌卫星细胞活化及损伤修复中的作用正被逐步认识,但其作用及作用机制仍处于初探阶段。本研究通过构建骨骼肌钝挫伤模型和药物选择性剔除巨噬细胞模型,观测巨噬细胞剔除后骨骼肌损伤修复过程以及相关细胞因子的时空特点,从组织形态学和分子生物学角度探讨巨噬细胞调控骨骼肌急性损伤修复过程的可能机制。研究方法:以体重18.2～22.9g,健康雄性C57BL/6小鼠为研究对象,随机分为四组,包括:（1）未损伤正常对照组（Scon组,n=8只）;（2）PBS 损伤组（分为伤后 12h、1d、3d、5d、7d、14d 组,n=8 只/组）;（3）未损伤巨噬细胞剔除组（Tcon组,n=8只）;（4）巨噬细胞剔除损伤组（分为伤后12h、1d、3d、5d、7d、14d组,n=8只/组）。自制腓肠肌钝挫伤模型,采用一质量16.8g,直径15.9mm的实心不锈钢钢珠从高100cm,内径16.0mm透明管道顶端自由落体垂直撞击小鼠双侧腓肠肌肌腹中段。巨噬细胞剔除模型,于腓肠肌钝挫伤前3d腹腔注射脂质体包被的氯膦酸盐悬浮液（0.2mL/10g体重）,然后于伤后即刻、3d、6d、9d、12d补充注射脂质体包被的氯膦酸盐悬浮液0.1mL,PBS损伤组按照上述方法和步骤腹腔注射脂质体包被的磷酸缓冲盐。经HE染色观测骨骼肌钝挫伤后再生修复过程;经Masson三色染色评定骨骼肌钝挫伤后纤维化瘢痕愈合过程;经流式细胞技术和免疫蛋白印迹技术验证巨噬细胞剔除模型;经免疫组织化学法检测:巨噬细胞特异性标志物（F4/80）、纤维化调控因子（Myostatin）、肌卫星细胞增殖和分化的特异性标志物（MyoD和Myogenin）,观察这些细胞因子在骨骼肌钝挫伤后再生修复过程中定位表达的时间规律;经免疫蛋白印迹法检测:纤维化调控因子（Myostatin）、细胞外基质标志物（PDGFRα和α-SMA）、肌卫星细胞增殖和分化的特异性标志物（MyoD和Myogenin）、肌再生因子（IGF-1、uPA、HGF/C-met和COX-2）、蛋白合成Akt/mTOR及其下游信号通路,评定这些细胞因子的蛋白水平在骨骼肌钝挫伤后再生修复过程中定量表达的时间规律;经免疫荧光双标法观察巨噬细胞特异性标志物（F4/80）和（IGF-1、uPA,、HGF/C-met和COX-2）的共定位表达。研究结果:（1）F4/80蛋白水平在骨骼肌钝挫伤后立即上升,3d到达峰值,阳性产物从肌外膜处转移至受损骨骼肌周围表达。与PBS损伤组比较,巨噬细胞剔除损伤组伤后未明显观察到F4/80的定位和定量表达。（2）伤后14d,巨噬细胞剔除损伤组纤维化程度显着高于PBS损伤组;纤维化调控因子（Myostatin）、细胞外基质标志物（PDGFRα和α-SMA）的蛋白水平显着高于PBS损伤组。（3）肌卫星细胞增殖标记物（MyoD）蛋白水平在骨骼肌钝挫伤后1d到达峰值,阳性细胞核由正常肌细胞边缘迁移至受损骨骼肌周围聚集;肌卫星细胞分化标记物（Myogenin）蛋白水平伤后3d到达峰值,首次在新生成肌细胞核上观察到Myogenin 阳性表达。巨噬细胞剔除损伤组,MyoD、Myogenin蛋白水平和定位表达趋势类似PBS损伤组但推迟2天出现,且蛋白峰值水平低于PBS损伤组。（4）骨骼肌钝挫伤后3d,肌再生因子（IGF-1、uPA,、HGF/C-met和COX-2）与F4/80存在共定位表达,且肌再生因子蛋白水平在骨骼肌钝挫伤后早期表达增加。巨噬细胞剔除损伤组,肌再生因子（除COX-2以外）伤后蛋白水平表达未见增加。（5）Akt/mTOR信号通路蛋白水平在骨骼肌钝挫伤后早期表达增加,巨噬细胞剔除损伤组未见增加。结论:巨噬细胞剔除导致骨骼肌急性损伤后再生功能障碍,以“非功能性”的纤维化结缔组织取代新生肌纤维完成伤后塑形过程。巨噬细胞通过促进肌卫星细胞的增殖和分化、调控促纤维化因子、肌细胞再生因子、炎性因子以及蛋白质代谢信号分子的分泌活性等一系列机制,参与骨骼肌急性损伤后的修复过程。
刘航[10]（2019）在《富含半胱氨酸蛋白61对肾纤维化及肾成纤维细胞的作用及机制研究》文中研究表明目的 富含胱氨酸蛋白61（cysteine-rich protein 61,Cyr61）是一种富含半胱氨酸的具备肝素联结活性的分泌蛋白,主要调理细胞外基质生成、细胞增生、分化、凋亡等重要的生物进程。缺血再灌注性急性肾损伤（IR-AKI）所致的肾纤维化中,肾间质成纤维细胞的异样激活发挥重要作用,而已有研究显示Cyr61在肾组织缺血早期高表达。因此,我们检测IR-AKI后肾纤维化及肾成纤维细胞中Cyr61的表达量,并探究Cyr61对肾成纤维细胞的影响及相关机制。方法 （1）制备IR-AKI后肾纤维化的大鼠模型,采用生化检测和组织病理切片Masson染色方法评估大鼠肾功能及纤维化,Western蛋白印迹试验半定量分析Cyr61蛋白表达变化。（2）利用生物信息学分析缺血再灌注肾脏活化的成纤维细胞中Cyr61的表达情况。（3）TGF-β1（梯度浓度0、0.5、1、2、5μg/L）诱导激活正常大鼠肾脏成纤维细胞株（NRK-49F细胞）48 h,CCK8方法检测细胞增殖活性,Western蛋白印迹试验半定量分析Cyr61蛋白水平。（4）质粒转染NRK-49F细胞,分为:空白组、对照组（空载质粒组）、Cyr61+组/Cyr61--组（过表达Cyr61质粒组/低表达Cyr61质粒组）。NRK-49F细胞被过表达Cyr61质粒转染24h、48h、72h后,采用CCK8试验测定细胞增生能力。（5）5μg/L TGF-β1刺激及质粒转染细胞48h,将细胞分为:对照组、活化组、Cyr61+组/Cyr61--组、Cyr61+活化组/Cyr61--活化组。通过CCK8试验测定细胞增殖活性,通过流式细胞检测法分类细胞周期,通过PCR试验分析Cyr61、纤维化相关因子（胶原蛋白Col1α1与Col3α1、基质金属蛋白酶MMP9与MMP13）以及衰老信号途径（p53/p21途径与p16/Rb1途径）相关因子的基因转录情况,通过Western蛋白印迹试验半定量分析Cyr61、Col3、MMP9蛋白的变化。结果 （1）在IR-AKI后肾脏纤维化过程中,胶原纤维在AKI后1W肾脏中表达最明显,而Cyr61蛋白此时处于最低水平（P<0.05）;（2）生物信息学基因芯片数据分析显示Cyr61在缺血再灌注后3天肾成纤维细胞中表达降低（P<0.05）。（3）与对照组相比,TGF-β1梯度浓度活化的NRK-49F细胞的增殖活性均增加,而Cyr61蛋白水平于1μg/L组降低,5μg/L组升高（P<0.05）;（4）对比对照组,过表达Cyr61质粒转染24h、48h、72h后细胞的增殖能力均降低,且呈时间依赖性;（5）Cyr61能降低NRK-49F细胞胶原纤维Col1α1 mRNA、Col3α1 mRNA的转录,降低Col3蛋白的水平,同时Cyr61能增加基质金属蛋白酶MMP9 mRNA、MMP13 mRNA的转录,提高MMP9蛋白的表达水平;（6）Cyr61可以抑制NRK-49F细胞的增生能力,促进细胞留滞于G1期,促进细胞衰老途径相关因子p53、p21和Rb的转录。结论 Cyr61不仅可以抑制体外实验中成纤维细胞的纤维化细胞表型,还可能通过p53/p21/Rb相关的细胞衰老信号途径,促进肾成纤维细胞留滞于G1细胞周期、抑制细胞增生能力,进而影响IR-AKI后肾纤维化的过程。
二、结缔组织生长因子诱导肾成纤维细胞转为成肌纤维细胞（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、结缔组织生长因子诱导肾成纤维细胞转为成肌纤维细胞（论文提纲范文）
（1）温度对斑马鱼肌肉营养组成和胶原蛋白含量的影响及初步机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.鱼类肌肉品质相关评价指标 |
| 1.1 物理指标 |
| 1.2 营养指标 |
| 2.胶原蛋白 |
| 2.1 胶原蛋白概述 |
| 2.2 胶原蛋白的生物合成和分解 |
| 2.3 胶原蛋白与鱼类肌肉品质 |
| 3.鱼类肌肉品质调控相关基因的研究进展 |
| 3.1 肌肉生长和发育相关调控基因 |
| 3.2 氨基酸生物合成与代谢相关调控基因 |
| 3.3 胶原蛋白代谢调控相关基因 |
| 4.温度与鱼类肌肉品质 |
| 5.研究目的和意义 |
| 第二章 温度对斑马鱼生长和肌肉营养组成的影响 |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 实验饲料 |
| 2.2 实验用鱼及饲养管理 |
| 2.3 实验取样 |
| 2.4 测定指标与方法 |
| 2.5 数据分析 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 温度对斑马鱼生长和全鱼生化成分的影响 |
| 3.2 温度对斑马鱼肌肉氨基酸组成的影响 |
| 3.3 温度对斑马鱼肌肉脂肪酸组成的影响 |
| 4.讨论 |
| 4.1 低温和高温均会抑制斑马鱼的生长 |
| 4.2 温度影响斑马鱼肌肉氨基酸和脂肪酸的组成 |
| 5.结论 |
| 第三章 温度对肌肉组织结构和胶原蛋白含量的影响 |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 实验饲料 |
| 2.2 实验用鱼及饲养管理 |
| 2.3 实验取样 |
| 2.4 测定指标与方法 |
| 2.5 数据分析 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 温度对斑马鱼肌肉组织结构的影响 |
| 3.2 温度对斑马鱼肌肉胶原蛋白含量的影响 |
| 4.讨论 |
| 4.1 低温和高温导致肌纤维平均直径增大,密度减小 |
| 4.2 低温促进斑马鱼肌肉组织的胶原蛋白沉积 |
| 5.结论 |
| 第四章 温度对斑马鱼肌肉品质相关基因表达的影响 |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 实验饲料 |
| 2.2 实验用鱼及饲养管理 |
| 2.3 实验取样 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.5 数据分析 |
| 3.实验结果 |
| 3.1 转录组测序分析 |
| 3.2 肌肉品质相关DEGs的表达情况验证 |
| 4.讨论 |
| 4.1 温度影响氨基酸和蛋白质代谢相关通路的富集 |
| 4.2 温度影响斑马鱼肌肉生长和发育相关基因的表达 |
| 4.3 温度影响斑马鱼肌肉Arg和 Pro代谢相关基因的表达 |
| 4.4 温度影响斑马鱼肌肉胶原蛋白代谢相关基因的表达 |
| 4.5 温度可能影响内质网中蛋白质的加工过程 |
| 5.结论 |
| 第五章 全文总结与展望 |
| 总结 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 硕士期间发表论文及参加学术会议情况 |
| 已发表论文 |
| 参加学术会议 |
| 致谢 |
（2）兔伸直型膝关节挛缩模型中肌源性挛缩的病理特征及其机制研究（论文提纲范文）
| 英文缩略词表(Abbreviation) |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 6 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 骨骼肌纤维化发生机制的研究进展 |
| 6 参考文献 |
（3）施万细胞对膀胱平滑肌细胞纤维化的保护作用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 大鼠失神经支配膀胱纤维化模型的建立及CTGF在膀胱纤维化中的作用研究 |
| 前言 |
| 实验材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 施万细胞对膀胱平滑肌细胞纤维化的保护作用及其机制的研究 |
| 前言 |
| 实验材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 创新和不足 |
| 参考文献 |
| 综述 膀胱纤维化发生的分子机制概述 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表论文 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 英文文章一 |
| 英文文章二 |
（4）基于TGF-β1/LIMK1信号通路研究解毒通络方对大鼠心肌纤维化的抑制作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 综述一 心肌纤维化的现代研究 |
| 1 心肌纤维化概念 |
| 2 心肌纤维化发病机制 |
| 3 心肌纤维化的现代治疗 |
| 4 小结 |
| 综述二 心肌纤维化的中医研究进展 |
| 1 从中医角度探讨心肌纤维化病因病机 |
| 2 毒伤血络学说 |
| 3 中医药治疗心肌纤维化 |
| 4 解毒通络方药的现代研究 |
| 5 小结 |
| 实验研究 |
| 第一章 心肌纤维化大鼠模型的构建 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 解毒通络方对大鼠心肌纤维化抑制作用的体内研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 解毒通络方对心肌成纤维细胞TGF-β1/LIMK1信号通路的研究 |
| 1 实验材料 |
| 第一部分 解毒通络方对大鼠体外细胞的作用及机制 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 第二部分 解毒通络方抑制大鼠成纤维细胞增殖机制 |
| 4 实验方法 |
| 5 实验结果 |
| 6 讨论 |
| 7 小结 |
| 结论 |
| 本文创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简介 |
（5）肾康注射液对慢性肾脏病和肾纤维化的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 慢性肾脏病肾纤维化的现代研究进展 |
| 1 病因研究 |
| 2 发病机制研究 |
| 3 治疗与展望 |
| 参考文献 |
| 综述二 中医药防治慢性肾脏病研究进展 |
| 1 病名研究 |
| 2 病因病机研究 |
| 3 防治研究 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 实验一 肾康注射液治疗慢性肾脏病的系统药理学分析 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果和讨论 |
| 3 结论 |
| 参考文献 |
| 实验二 肾康注射液对UUO小鼠肾间质纤维化的保护作用及机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 实验三 肾康注射液对NRK-49F人鼠肾间质成纤维细胞活化的作用及机制研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 主要研究成果 |
| 个人简历 |
（6）高糖伴腰椎管狭窄黄韧带肥厚的炎性机制及姜黄素的干预效应研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表(ABBREVIATION) |
| 前言 |
| 1 祖国医学对退行性腰椎管狭窄症的认识 |
| 2 现代医学对退行性腰椎管狭窄症的认识 |
| 3 祖国医学对2型糖尿病及合并腰椎管狭窄症的认识 |
| 4 现代医学对2型糖尿病及合并腰椎管狭窄症的认识 |
| 5 基于中医基本哲学整体观辩证认识两者之间的关系 |
| 6 巨噬细胞移动抑制因子与2型糖尿病并退行性腰椎管狭窄的联系 |
| 7 姜黄与阻断MIF对成纤维细胞效应作用的联系 |
| 8 本课题研究目的及方法 |
| 参考文献 |
| 第一章 2型糖尿病对退变性腰椎管狭窄症患者椎管内结构参数的影响 |
| 1 对象及研究方法 |
| 1.1 对象 |
| 1.2 研究方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 根据是否合并2型糖尿病分组 |
| 2.2 测量对比腰椎节段的确定 |
| 2.3 椎管内各参数对比结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 中医基本哲学整体观认识消渴症及腰痹病之间的关系 |
| 3.2 退变性腰椎管狭窄症与2型糖尿病特征 |
| 3.3 退变性腰椎管狭窄症患者纳入标准及影像学测量点选择依据 |
| 3.4 合并2型糖尿病的退变性腰椎管狭窄症患者中各项参数特征 |
| 3.5 2型糖尿病对腰椎管中骨性结构参数的影响及分析 |
| 3.6 2型糖尿病对腰椎管中纤维性软组织结构参数的影响及分析 |
| 3.7 黄韧带肥厚及与2型糖尿病潜在关系分析 |
| 4 结论、不足及展望 |
| 参考文献 |
| 第二章 退行性腰椎管狭窄症合并2型糖尿病患者黄韧带中MIF定量分析及其效应研究 |
| 1 研究对象及黄韧带获取与初步处理 |
| 1.1 对象及伦理内容 |
| 1.2 黄韧带获取及初步处理 |
| 2 方法 |
| 2.1 黄韧带厚度测量 |
| 2.2 主要试剂及仪器表(表2-2,表2-3) |
| 2.3 黄韧带内的蛋白提取、浓度测量及相关炎症介质ELISA测定 |
| 2.4 黄韧带弹力、胶原纤维Masson染色及定量分析 |
| 2.5 黄韧带内MIF免疫组织化学(IHC)研究及定量分析 |
| 2.6 黄韧带厚度与MIF含量相关性分析 |
| 2.7 统计方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 黄韧带厚度对比 |
| 3.2 黄韧带内MIF、TGF-β1、MMP-13、IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白定量 |
| 3.3 黄韧带弹力、胶原纤维Masson染色及定量分析 |
| 3.4 黄韧带内MIF免疫组织化学(IHC)研究及定量分析 |
| 3.5 黄韧带厚度与MIF含量相关性分析 |
| 4 讨论 |
| 4.1 血瘀为消渴及腰痹病的共同致病因素 |
| 4.2 腰椎黄韧带的正常及病理学表现 |
| 4.3 腰椎黄韧带肥厚的基本影响因素 |
| 4.4 源自2型糖尿病的代谢因素对腰椎黄韧带肥厚影响 |
| 4.5 MIF特性及在2 型糖尿病人肥厚黄韧带内含量的差异 |
| 4.6 MIF促进结缔组织纤维化作用 |
| 4.7 转化生长因子-β1 特性及组间含量差异 |
| 4.8 基质金属蛋白酶13 特性及组间含量差异 |
| 4.9 白细胞介素1特性及组间含量差异 |
| 4.10 白细胞介素-6 特性及组间含量差异 |
| 4.11 肿瘤坏死因子α特性及组间含量差异 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 第三章 MIF在糖浓度差异下的表达及其对成纤维细胞的促增殖效应与机制研究 |
| 1 实验材料与方法 |
| 1.1 主要试剂与仪器(表3-1 表3-2) |
| 1.2 不同浓度糖对NIH3T3 细胞MIF蛋白表达及增殖影响 |
| 1.3 不同浓度外源性MIF(rmMIF)对NIH3T3 细胞增殖的影响 |
| 1.4 MIF促进NIH3T3 细胞增殖机制研究 |
| 1.5 统计学方法 |
| 2.结果 |
| 2.1 NIH3T3细胞在不同糖浓度环境下MIF的表达及细胞增殖情况 |
| 2.2 不同浓度外源性MIF(rmMIF)对NIH3T3 细胞增殖的影响 |
| 2.3 MIF促进NIH3T3 细胞增殖机制研究 |
| 3 讨论 |
| 3.1 整体观指导下分析消渴与腰痹病的联系 |
| 3.2 黄韧带主要的效应细胞在纤维化过程中的作用 |
| 3.3 MIF与组织纤维化的联系 |
| 3.4 高糖环境促进成纤维细胞对MIF的表达 |
| 3.5 MIF呈浓度耐性促进成纤维细胞增殖 |
| 3.6 MIF促进成纤维细胞增殖机制探究 |
| 3.7 MIF促进成纤维细胞增殖的机制总结 |
| 3.8 MIF与 TGF-β1 促成纤维细胞增殖协同效应分析 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第四章 姜黄素对MIF诱导成纤维细胞炎性介质表达及促增殖效应的干预作用 |
| 1 实验材料与方法 |
| 1.1 主要试剂与仪器 |
| 1.2 主要溶液的配制 |
| 1.3 姜黄素对MIF促成纤维细胞增殖干预效应 |
| 1.4 姜黄素抑制MIF促成纤维细胞炎性介质及Ⅰ Ⅲ型胶原表达 |
| 1.5 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 姜黄素对MIF促成纤维细胞增殖干预效应 |
| 2.2 姜黄素抑制MIF促成纤维细胞炎性介质及Ⅰ Ⅲ型胶原表达 |
| 3 讨论 |
| 3.1 血瘀因素贯穿整体哲学观对消渴并发腰痹病 |
| 3.2 对MIF相关效应研究分析 |
| 3.3 实验用细胞的选择 |
| 3.4 促纤维化炎症介质对成纤维细胞的作用 |
| 3.5 促纤维化炎症介质对成纤维细胞作用存在网状效应 |
| 3.6 MIF促成纤维细胞炎症介质的表达分析 |
| 3.7 MIF促进诸项炎症介质表达机制总结 |
| 3.8 祖国医学对姜黄的药物特性认识及运用 |
| 3.9 现代医学对姜黄的药物特性研究及运用 |
| 3.10 姜黄有效成分的细胞毒性及实验剂量选择 |
| 3.11 姜黄素对MIF促成纤维细胞增殖干预效应 |
| 3.12 姜黄素抑制MIF促成纤维细胞炎性介质表达分析 |
| 4 结论 |
| 5 展望 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 博士期间发表论文及科研情况 |
| 致谢 |
（7）电针委中穴对大鼠腰多裂肌损伤后TGF-β1、CTGF、Vimentin表达的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 腰痛的中西医研究进展 |
| 1 中医对腰痛的认识 |
| 1.1 关于腰痛的文献记载 |
| 1.2 腰痛的致病因素 |
| 1.3 腰痛的分类 |
| 1.4 腰痛的中医治疗方法 |
| 2 西医对腰痛的认识 |
| 2.1 腰痛的原因 |
| 2.2 腰痛的分类 |
| 2.3 腰痛的临床检查手段 |
| 2.4 腰痛的鉴别诊断 |
| 2.5 腰痛的治疗方法 |
| 3 总结 |
| 参考文献 |
| 综述二 委中穴的相关研究进展 |
| 1 委中穴相关文献记载 |
| 2 委中穴与经络的关系 |
| 3 委中穴的解剖位置 |
| 4 委中穴的功效 |
| 4.1 疏经通络 |
| 4.2 清热解毒 |
| 4.3 利尿通淋 |
| 4.4 祛湿止痒 |
| 4.5 止吐止泻 |
| 4.6 补肾强骨 |
| 5 委中穴实验研究 |
| 6 委中穴临床应用 |
| 7 总结 |
| 参考文献 |
| 综述三 骨骼肌的损伤与修复 |
| 1 骨骼肌损伤模型研究 |
| 1.1 骨骼肌常见损伤模型 |
| 1.2 布比卡因制造骨骼肌损伤模型的研究 |
| 2 骨骼肌损伤相关细胞的变化 |
| 3 与再生修复相关指标的研究 |
| 3.1 转化生长因子TGF-β1 |
| 3.2 结缔组织生长因子CTGF |
| 3.3 波形蛋白Vimentin |
| 4 总结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 实验技术路线图 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 2 统计学处理 |
| 3 检测结果 |
| 3.1 Masson三色染色法观察各组大鼠腰多裂肌组织形态学变化 |
| 3.2 免疫组化法检测各组大鼠腰多裂肌TGF-β1、CTGF、Vimentin的表达变化 |
| 3.3 Western-blot法检测各组大鼠腰多裂肌组织中TGF-β1表达的情况 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 6 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（8）KLF15抑制小鼠心室超负荷所致心功能衰竭的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略语表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 左室超负荷小鼠心功能代偿及失代偿模型构建 |
| 2.1 实验材料及试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 左室超负荷所致心功能代偿及失代偿期心肌重塑的研究 |
| 3.1 实验材料及试剂 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 KLF15 抑制左室超负荷所致心功能衰竭的作用及机制研究 |
| 4.1 实验材料及试剂 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述一 心肌纤维化分子机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 KLF15 调控心肌重塑的研究进展 |
| 参考文献 |
| 发表文章 |
| 致谢 |
（9）骨骼肌急性损伤修复过程中巨噬细胞作用及相关机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文名词缩写表（Abbreviations) |
| 前言 |
| 论文总体设计 |
| 第一部分 综述:免疫系统与骨骼肌伤后修复再生 |
| 1 概述 |
| 2 骨骼肌损伤的生理性修复过程 |
| 2.1 肌肉ECM的组成 |
| 2.2 骨骼肌伤后修复阶段 |
| 2.3 ECM在肌肉修复中的作用 |
| 3 骨骼肌损伤的病理性修复过程 |
| 3.1 骨骼肌纤维化修复 |
| 3.2 骨骼肌纤维化的相关细胞因子 |
| 4 骨骼肌损伤修复过程中的免疫反应 |
| 4.1 中性粒细胞与骨骼肌损伤修复 |
| 4.2 巨噬细胞与骨骼肌损伤再生修复 |
| 5 骨骼肌急性损伤模型 |
| 5.1 牵拉伤动物模型 |
| 5.2 撕裂伤动物模型 |
| 5.3 钝挫伤动物模型 |
| 5.4 化学诱导模型 |
| 5.5 与免疫机制有关的骨骼肌损伤模型的使用 |
| 6 小结 |
| 第二部分 骨骼肌急性损伤修复过程中巨噬细胞作用及其相关机制研究 |
| 1 研究对象 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.2 实验动物模型建立 |
| 2.3 实验分组 |
| 2.4 动物取材和称重 |
| 2.5 骨骼肌组织流式细胞检测 |
| 2.6 石蜡包埋与切片 |
| 2.7 骨骼肌组织HE染色 |
| 2.8 骨骼肌组织Masson染色 |
| 2.9 骨骼肌组织免疫蛋白印迹实验 |
| 2.10 骨骼肌组织免疫组化实验 |
| 2.11 骨骼肌组织免疫荧光双标实验 |
| 2.12 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 骨骼肌钝挫伤后的宏观表现和HE染色结果 |
| 3.2 流式细胞检测巨噬细胞剔除结果 |
| 3.3 骨骼肌钝挫伤后F4/80免疫蛋白印迹和免疫组化结果 |
| 3.4 骨骼肌钝挫伤后Masson染色结果 |
| 3.5 骨骼肌钝挫伤后Myostatin免疫蛋白印迹和免疫组化结果 |
| 3.6 骨骼肌钝挫伤后ECM标记物免疫蛋白印迹结果 |
| 3.7 骨骼肌钝挫伤后MyoD、Myogenin免疫蛋白印迹和免疫组化结果 |
| 3.8 骨骼肌钝挫伤后肌再生因子免疫蛋白印迹结果 |
| 3.9 骨骼肌钝挫伤后巨噬细胞与肌再生因子免疫荧光共定位表达结果 |
| 3.10 骨骼肌钝挫伤后Akt/mTOR信号通路蛋白免疫印迹结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 脂质体包被氯磷酸盐对骨骼肌钝挫伤后F4/80的影响 |
| 4.2 骨骼肌钝挫伤修复过程的形态学特征分析 |
| 4.3 巨噬细胞剔除致骨骼肌钝挫伤后纤维化分析 |
| 4.4 巨噬细胞对骨骼肌钝挫伤后肌卫星细胞增殖和分化的影响 |
| 4.5 巨噬细胞对骨骼肌钝挫伤后肌再生因子动态表达的影响 |
| 4.6 巨噬细胞对骨骼肌钝挫伤后Akt/mTOR蛋白合成信号通路的影响 |
| 5 结论 |
| 研究意义和创新点 |
| 局限和展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人科研经历 |
（10）富含半胱氨酸蛋白61对肾纤维化及肾成纤维细胞的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验细胞 |
| 1.3 实验试剂 |
| 1.4 主要仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 实验动物分组 |
| 2.2 实验动物模型的建立 |
| 2.3 生化标本与肾脏组织病理学检查 |
| 2.4 生物信息学分析 |
| 2.5 实验细胞分组 |
| 2.6 细胞培养 |
| 2.7 质粒转染 |
| 2.8 细胞增殖活性检测 |
| 2.9 细胞周期检测 |
| 2.10 RNA提取和实时荧光定量PCR |
| 2.11 Western免疫印迹 |
| 3 统计学分析 |
| 结果 |
| 1 缺血性急性肾损伤后大鼠肾功能及纤维化变化和Cyr61 蛋白的表达 |
| 2 生物信息学分析显示Cyr61在IR后3 天激活的肾成纤维细胞中低表达 |
| 3 梯度浓度的 TGF-β1 诱导下 NRK-49F 细胞的增生能力与细胞内 Cyr61蛋白的表达水平 |
| 4 过表达Cyr61 以时间依赖性方式抑制NRK-49F细胞的增生能力 |
| 5 过表达Cyr61 抑制NRK-49F细胞纤维化相关因子的表达 |
| 6 过表达Cyr61 抑制NRK-49F细胞增殖、促进细胞衰老 |
| 7 干扰Cyr61 表达促进NRK-49F细胞的纤维化表型 |
| 8 干扰Cyr61 表达减少NRK-49F细胞的衰老 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 综述参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 缩略词表 |
| 附录 |
| 致谢 |
四、结缔组织生长因子诱导肾成纤维细胞转为成肌纤维细胞（论文参考文献）
- [1]温度对斑马鱼肌肉营养组成和胶原蛋白含量的影响及初步机制研究[D]. 林佳丽. 汕头大学, 2021(02)
- [2]兔伸直型膝关节挛缩模型中肌源性挛缩的病理特征及其机制研究[D]. 杨帆. 安徽医科大学, 2021(01)
- [3]施万细胞对膀胱平滑肌细胞纤维化的保护作用研究[D]. 刘倩. 山东大学, 2020(04)
- [4]基于TGF-β1/LIMK1信号通路研究解毒通络方对大鼠心肌纤维化的抑制作用[D]. 宋晶. 长春中医药大学, 2020(08)
- [5]肾康注射液对慢性肾脏病和肾纤维化的作用及机制研究[D]. 秦田雨. 北京中医药大学, 2020(04)
- [6]高糖伴腰椎管狭窄黄韧带肥厚的炎性机制及姜黄素的干预效应研究[D]. 鲁齐林. 湖北中医药大学, 2020(08)
- [7]电针委中穴对大鼠腰多裂肌损伤后TGF-β1、CTGF、Vimentin表达的影响[D]. 鲁曼. 北京中医药大学, 2020(04)
- [8]KLF15抑制小鼠心室超负荷所致心功能衰竭的作用及机制研究[D]. 邹书帆. 中国人民解放军陆军军医大学, 2019(03)
- [9]骨骼肌急性损伤修复过程中巨噬细胞作用及相关机制研究[D]. 刘宇. 上海体育学院, 2019
- [10]富含半胱氨酸蛋白61对肾纤维化及肾成纤维细胞的作用及机制研究[D]. 刘航. 青岛大学, 2019(03)