一、角膜内皮细胞凋亡的研究现状（论文文献综述）
范巍[1]（2020）在《飞秒激光辅助白内障超声乳化术治疗Fuchs角膜内皮营养不良合并白内障及高度近视白内障合并角膜散光病例的长期临床分析》文中提出目的:本论文旨在对比飞秒激光与传统超声乳化两种手术方法对Fuchs角膜内皮营养不良（FECD）合并白内障患者术后角膜内皮细胞丢失率与中央角膜厚度（CCT）变化情况,评估此类患者在不同白内障手术方案下的角膜内皮功能;并探索FECD合并白内障患者接受飞秒激光技术的最佳手术适应症,以期重新定义术前“安全区”中央角膜厚度,避免不必要的角膜内皮移植;本研究通过飞秒激光技术,量化撕囊口直径,测量高度近视白内障合并角膜散光患者术后远、中、近视力,近立体视功能、旋转稳定性等指标,评估Toric IOL在高度近视的安全性及必要性,并探究术后Toric IOL轴位旋转的最佳评估方法。方法:1、前瞻性病例对照研究,选择我院轻度或中度（Kramcher法分级2至4期）FECD合并白内障患者18例（31眼）,根据手术方式不同分为飞秒激光组10例（15眼）与传统超乳组8例（16眼）,对比两组术中累计超声乳化能量（CDE）及术前、术后3天、1月、3月、6月、12月角膜内皮细胞密度（ECD）、中央角膜厚度（CCT）、角膜内皮细胞丢失率等指标;2、前瞻性病例对照研究,选择我院FECD合并白内障患者23例（30眼）行飞秒激光辅助白内障超乳手术,按照Krachmer法裂隙灯分级将FECD患者分为3组:轻度组:6例（10眼）;中度组:11例（14眼）;重度组:6例（6眼）,测量术前CCT、ECD、周边3mm角膜厚度（PCT3mm）、PCT4mm与FECD分组的相关性,并评估术后3天、1月、3月、6月CCT及并发症情况;3、前瞻性病例对照研究,选择我院双眼高度近视白内障合并角膜规则散光,并双眼均接受白内障手术的患者,分为三组:A组:飞秒激光联合Toric IOL植入组20例（40眼）,B1组:飞秒激光联合IQ IOL植入组20例（40眼）,B2组:传统超声乳化联合Toric IOL植入组20例（40眼）。对比三组患者术前角膜散光、目标残留散光及术后7天、1月、3月最佳矫正远视力、裸眼中视力、裸眼近视力、实际残留散光、近立体视锐度、Toric IOL轴位旋转度、全眼高阶像差、全眼球差等指标。结果:1、飞秒激光组通过预劈核模式,术中CDE（4.50±2.43）较传统超乳组（7.17±2.80）显着减少（P<0.05）,术后1月、3月、6月、12月角膜内皮细胞丢失率显着低于传统超乳组（P<0.05）;术后1月、3月、6月CCT飞秒激光组亦显着低于传统超声乳化组（P<0.05）;而两组患者术后各随访期内ECD比较无显着性差异（P>0.05）。尽管两组患者术后中央角膜厚度逐渐降低,但术后所有随访期内两组CCT均大于术前（P<0.05）。随访12月内,两组均未出现大疱性角膜病变或其他术中并发症。2、术前ECD、术前PCT3mm、术前PCT4mm在FECD的轻度组与中度组、轻度组与重度组组间比较存在显着性差异（P<0.05）,但对于中度组与重度组的FECD患者,术前ECD、PCT3mm、PCT4mm均无显着性差异（P>0.05）;而术前CCT对于FECD轻、中、重度组患者,两两比较均存在显着性差异（P<0.05）。进一步相关分析发现,术前CCT与FECD分期线性相关性最强（r=0.882,P<0.05）;而术前ECD、术前PCT3mm、术前PCT4mm与FECD分期相关性较弱（r分别为-0.503,0.682,0.577,P<0.05）,且PCT受年龄因素影响明显,越靠周边角膜与年龄相关趋势越大。3、当术前CCT小于640μm时,FECD合并白内障患者接受飞秒激光辅助白内障手术,术后6月随访期内获得良好的视觉质量,未出现角膜内皮失代偿者,可以一定程度上避免不必要的角膜内皮移植术。4、通过飞秒激光技术,对高度近视并发白内障患者,术中CDE（5.43±2.52）显着低于传统超乳组（7.64±3.07）,EPT（32.22s±9.36s）亦较传统超乳组（41.77s±9.03s）显着减少,减少了高度近视眼术中眼部损伤。5、高度近视白内障合并角膜散光患者植入Toric IOL,较不矫正散光组,显着改善了术后7天、1月、3月裸眼中、近视力,Titmus近立体视锐度及残留散光度,差异均具有统计学意义（P<0.05）,减少了术后对眼镜的依赖程度;而术后7天、1月、3月最佳矫正远视力、全眼高阶像差及全眼角膜球差两组无显着性差异（P>0.05）。6、高度近视白内障合并角膜散光患者植入Toric IOL,术后各随访期等效球镜、残留散光、最佳矫正远视力较术前相比均有显着性差异（P<0.05）。通过Len SAR飞秒激光系统囊膜标记技术,术后3月Toric IOL旋转度为（4.08°±2.25°）,显着低于传统术中手工标记及术后裂隙灯光带轴向定位法（5.95°±2.01°）,差异具有统计学意义（P<0.05）;且术后3月,囊膜标记法轴位旋转度30眼（75%）<5°,未出现轴位旋转超过10°患者,裂隙灯光带法20眼（50%）<5°,39眼（97.5%）<10°,1例轴位旋转为12°。结论:1.飞秒激光辅助白内障超声乳化技术较传统超乳相比,通过预劈核模式,降低了术中CDE,减少了FECD患者术后中央角膜厚度,降低了角膜内皮丢失率,是减少此类患者术后角膜内皮功能失代偿的有效手术方法;2、在白内障合并FECD患者中,尽管白内障术后CCT逐渐降低,但术后12月随访期中CCT均大于术前水平,预示FECD患者行白内障手术角膜内皮失代偿风险较高;3、对于接受飞秒激光辅助白内障手术的FECD患者,当术前CCT小于640μm时,术后6月随访期内获得良好的视觉质量,未出现角膜内皮失代偿者;重新定义了FECD患者术前“安全区”中央角膜厚度,可以一定程度上避免不必要的角膜内皮移植术;4、术前CCT与裂隙灯主观法评价FECD分期相关性最强,是一个预测FECD预后及手术适应症的可重复性客观指标;5、高度近视并发白内障患者通过飞秒激光技术,量化了撕囊口直径,与传统手术相比,降低了术中CDE、EPT,减轻了对眼部组织的损伤;6、高度近视白内障合并角膜散光患者植入Toric IOL,能有效矫正角膜规则散光,提高了术后裸眼中、近视力及近立体视功能,减少了高度近视患者术后对眼镜的依赖程度;7、通过Len SAR飞秒激光系统囊膜标记技术,与传统术中标记、术后裂隙灯光带法轴向定位相比,显着提高了术后Toric IOL轴向定位的精准度,可作为Toric IOL术前标记、术后轴位旋转度观察的新方法。
龙俊君[2]（2020）在《供体角膜植片取材及保存时间对角膜内皮细胞密度的影响研究》文中指出[目 的]对临床供体角膜植片内皮细胞进行质量监测;分析供体角膜内皮细胞密度的影响因素并探究其变化规律。[方法]选取2019年1月-2019年11月于昆明市第一人民医院获取的供体角膜植片,供体编号253号-291号（38例）,共计76枚。纳入标准:于昆明市第一人民医院获取的角膜供体;供体年龄在3-65岁之间;角膜中央区无损伤;前后弹力层完整;基质层透明。排除标准:供体有细菌、真菌、病毒感染史;供体有与内皮损伤相关手术史或高眼压史;有眼部肿瘤病史或不明原因的神经系统疾病病史。在所收集的供体植片中有2枚因大面积角膜溃疡排除,4枚因患传染性疾病排除,1枚因既往内眼手术史排除,1枚因既往青光眼病史排除,余68枚角膜供体纳入研究。制定角膜组织获取登记报告表,记录供体编号、性别、年龄、死亡原因、死亡时间、死亡-获取时间、保存时间,并进行内皮细胞密度检测。将所获取的供体角膜植片保存于4℃ Eusol-C中期保存液中,分别于保存0-1天、保存1-3天、保存3-7天、保存7-14天及使用当天测量角膜内皮细胞密度,并对所测量数据进行统计分析。[结 果]1、68枚纳入研究的角膜供体中男性27例,女性7例。按年龄分组:年龄在 5-64 岁之间,平均 36.09±13.5 岁,其中<30 岁组 28 例（3253.964±340.288ceⅡs/mm2）,30-60 岁组 36 例（2965.321±282.685ceⅡs/mm2）,>60 岁组 4 例（2279.750±157.199ceⅡs/mm2）,不同年龄组供体角膜内皮细胞密度差异有统计学意义,P<0.05;按死亡-获取时间分组,0-2小时组取材的24例（3277.25±343.532ceⅡs/mm2）,2-4 小时组取材的 28 例（3008.61±340.506ceⅡs/mm2）,4-6 小时组取材的16例（2736.69±290.336ceⅡs/mm2）,不同死亡-获取时间组角膜内皮细胞密度的差异有统计学意义,P<0.05;按死亡原因进行分组:供体死亡原因外伤24 例（3025.06±420.150ceⅡs/mm2）,心脑血管意外 10 例（3073.95±292.831ceⅡs/mm2）,不同死亡原因的供体角膜内皮细胞密度的差异无统计学意义,P>0.05;2、运用多元线性回归方法分析,设角膜内皮细胞密度为因变量Y,自变量分别为年龄X1,供体死亡-获取时间X2。回归方程:Y=3849.128-11.711X1-143.474X2,拟合度 R2=0.5,回归模型有统计学意义,P<0.05,角膜内皮细胞与供体死亡-获取时间变化规律符合线性规律。供体角膜内皮细胞密度与供体年龄、供体死亡-获取时间呈负相关,3-65岁的供体其死亡-获取时间在7.5-12.6h之间,所获植片内皮细胞密度均可>2000mm2。3、在4℃ Eusol-C保存液中,保存时间0-14天之间,平均6.13天。保存1-3天23例,保存3-7天32例,余11例保存7-14天。测得角膜内皮细胞密度,取材当天 68 例（3039.44±385.554ceⅡs/mm2）,保存 1-3 天 66 例（2873.969±354.876ceⅡs/mm2）,保存 3-7 天 43 例（2625.600±318.574ceⅡs/mm2）,保存7-14天11例（2455.727±290.285ceⅡs/mm2）。保存前平均角膜内皮细胞为3039.44±385.554cells/mm2,使用前为 2723.57±343.535ceⅡs/mm2,保存后角膜内皮细胞密度较保存前明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）,但供体角膜内皮细胞随保存时间的变化规律并不符合线性趋势。[结 论]1、供体年龄与死亡-获取时间均可影响供体角膜内皮细胞密度,而供体死亡原因与其角膜内皮细胞密度无关;2、年龄和死亡-获取时间对角膜植片内皮细胞密度有影响,其变化规律符合线性趋势,供体角膜内皮细胞密度与供体年龄、供体死亡-获取时间呈负相关,对于用作穿透性角膜移植材料的角膜供体,年龄越大则要求死亡-获取时间越短;3、在4℃ Eusol-C保存液中供体植片角膜内皮细胞密度随保存时间增加而下降,但其变化规律并不符合线性趋势。
卜敬华[3]（2019）在《高脂血症对小鼠睑板腺和角膜内皮的影响及其作用机制的研究》文中提出第一部分:高脂饮食诱导的肥胖和高脂血症通过调节PPAR-γ通路促进小鼠睑板腺炎症目的:探讨高脂饮食诱导的肥胖和高脂血症与睑板腺慢性炎症之间的关系,并探究PPAR-γ在其中的作用。方法:将雄性C57BL/6J小鼠置于四种不同的喂养方案:a)正常饮食（SD）;b)高脂饮食（HFD）;c)高脂饮食+罗格列酮（PPAR-γ激动剂）（HFD-rosi）;d)高脂饮食喂养4周,然后替换为正常饮食喂养4周（HFD-rev）。定期监测体重、眼表和眼睑变化。对睑板腺组织切片进行H&E染色,油红O染色和CD45、IL-1β、IL-6、TNF-α和F4/80的免疫荧光染色。通过qRT-PCR评估睑板腺中PPAR-γ、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、IFN-γ、MMP-3 和 MMP-9 的基因表达。进行蛋白印迹以检测 PPAR-γ、NF-κB p65、p-NF-κB p65、p38、p-p38、JNK、p-JNK、ERK和p-ERK的蛋白表达情况。结果:高脂饮食诱导小鼠体重和血液胆固醇水平显着增加。油红O染色显示高脂饮食小鼠睑板腺腺泡中脂质的积累。H&E染色显示高脂饮食小鼠中睑板腺腺泡之间细胞浸润增加。与正常饮食小鼠相比,高脂饮食小鼠的睑板腺中观察到CD45和F4/80阳性细胞的浸润增加。高脂饮食小鼠的睑板腺PPAR-γ表达显着下调,炎症相关细胞因子显着上调以及MAPKs和NF-κBp65磷酸化激活。给与罗格列酮治疗（HFD-rosi）以及高脂饮食后再改为正常饮食（HFD-rev）的小鼠睑板腺炎症状态可出现明显逆转。结论:高脂饮食诱导的肥胖和高脂血症通过抑制小鼠睑板腺PPAR-γ表达,激活MAPK和NF-κB信号通路,促进睑板腺炎症。第二部分:载脂蛋白E缺乏导致小鼠睑板腺功能障碍目的:研究载脂蛋白E基因敲除（ApoE-/-）小鼠睑板腺和眼表组织的病理变化,探讨睑板腺功能障碍（MGD）与高脂血症的关系。方法:在裂隙灯显微镜下观察3、5、7个月龄雄性ApoE-/-小鼠以及年龄和性别匹配的野生型（WT）小鼠的眼表和睑缘情况,用立体显微镜对睑板腺结构进行观察。睑板腺组织切片进行H&E染色,油红O染色,TUNEL染色和K10、Fabp5、Ki67、p63、PPAR-γ、IL-6、TNF-α、NF-κB p65、p-NF-κB p65、AC-caspase 8 的免疫荧光染色。免疫组织化学染色方法检测CD45、4-HNE、NOX-4、3-NT。实时定量PCR和蛋白印迹检测睑板腺组织中相应基因表达。通过灌胃的方法给5个月的ApoE-/-小鼠分别服用罗格列酮和GW9662+罗格列酮2个月。结果:ApoE-/-小鼠眼睑出现显着异常,睑板腺缺失,腺泡形态异常,导管扩张,睑板腺开口堵塞。ApoE-/-小鼠中的睑板腺腺泡呈现出过度的脂质沉积。睑板腺导管和腺泡细胞异常角化增加,睑板腺腺泡细胞增殖减少,细胞凋亡增加。炎症细胞浸润到睑板腺腺泡的周围微环境中,NF-κB信号通路在睑板腺中被激活。ApoE-/-小鼠的睑板腺腺泡细胞中的氧化应激明显增加。进一步研究显示ApoE-/-小鼠睑板腺腺泡细胞中PPAR-γ的表达下调。PPAR-γ激动剂罗格列酮治疗2个月可降低ApoE-/-小鼠眼睑、角膜病变发病率,同时可以减轻睑板腺炎症。结论:MGD和高脂血症密切相关,ApoE-/-小鼠可作为模型研究脂代谢紊乱相关性MGD的病理生理和治疗。第三部分:高脂血症影响角膜内皮的紧密连接和泵功能目的:探讨不同高脂血症小鼠模型中角膜内皮的病理变化及相关机制。方法:采用喂养4周龄雄性野生型（WT）小鼠高脂饮食（HFD）和喂养载脂蛋白E敲除（ApoE-/-）小鼠正常饮食（SD）或高脂饮食的方法,建立三种不同程度的高脂血症小鼠模型。对照组饲喂WT小鼠正常饮食。16周后检测不同组小鼠体重,胆固醇水平和空腹血糖浓度。通过活体共聚焦显微镜评估角膜内皮细胞密度、角膜内皮细胞形态。对角膜内皮组织进行扫描电镜、透射电镜检测和ZO-1、N-cadherin、Na+-K+-ATPase、4-羟基壬烯醛（4-HNE）、8-羟基-2’-脱氧鸟苷（8-OHdG）和NADPH氧化酶4（NOX4）的免疫染色。通过qRT-PCR评估角膜内皮中ZO-1、N-cadherin和Na+-K+-ATPase的基因表达水平。对全角膜组织进行油红O染色以评估脂质沉积情况。通过角膜内皮损伤模型观察不同组小鼠角膜内皮损伤后的恢复功能。提取房水并进行质谱检测其中脂肪酸变化。用不同浓度的棕榈酸处理体外培养的兔角膜内皮细胞以模拟体内高脂血症。在棕榈酸处理24小时后,进行 CCK8 活力测定和 ZO-1、N-cadherin、Na+-K+-ATPase、TOM20 和 TIM23 的免疫荧光染色。通过 qRT-PCR 检测 ZO-1、N-cadherin、Na+-K+-ATPase、NOX4、NFE2L2（Nrf2）、超氧化物歧化酶1（SOD1）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶1（GPX1）的基因表达水平。结果:我们发现喂养高脂饲料的WT小鼠和喂养正常饲料或高脂饲料的ApoE-/-小鼠均可诱导出不同程度的高脂血症。油红O激活,线粒体超微结构异常改变。在高脂血症小鼠的角膜内皮细胞中还可观察到染色显示高脂血症小鼠的角膜内皮细胞中出现脂滴的积聚。在高脂血症模型小鼠中观察到角膜内皮细胞密度降低,内皮细胞形态异常,六边形比例明显下降,内皮细胞紧密连接破坏,内皮细胞表面微绒毛减少,泵功能标记物Na+-K+-ATPase表达紊乱且表达量减少,氧化应激细胞凋亡增加。此外,高脂血症小鼠内皮在损伤后恢复能力下降。通过质谱的方法检测房水中脂肪酸含量,发现在高脂血症小鼠房水中棕榈酸水平显着增加。体外培养的兔角膜内皮细胞显示出对棕榈酸的剂量依赖性细胞毒性,棕榈酸还可导致体外培养的兔角膜内皮细胞形态改变,泵功能降低,线粒体破坏,氧化应激标志物表达升高。结论:高脂血症可诱导角膜内皮细胞氧化应激,最终导致角膜内皮的病理改变。高脂血症可能是角膜内皮功能障碍的重要危险因素。
张伟杰[4]（2019）在《EPC和Pten在角膜内皮损伤修复中的作用机制研究》文中研究指明目的（1）利用激光建立角膜内皮失代偿动物模型,为研究治疗方法提供基础。（2）研究Rho激酶（Rho-associated protein kinase,ROCK）抑制剂Y-27632能否促进脐带血内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPC）增殖和向角膜内皮细胞（corneal endothelial cell,CEC）方向分化,从而替代CEC治疗角膜内皮失代偿。（3）初步探究抑癌基因Pten在CEC的周期阻滞和迁移中的作用,寻找促进角膜内皮原位再生的新靶点。方法（1）应用钇铝石榴石晶体（neodymium-doped yttrium aluminum garnet,Nd:YAG）激光对兔角膜内皮层进行均匀、分散的爆破,采用裂隙灯、光学相干断层扫描仪、压平式眼压计、海德堡共焦激光角膜显微镜检查角膜透明度、厚度和眼压等;扫描电镜和组织学方法检测内皮层损伤情况,评估模型的有效性、安全性和稳定性。（2）在条件培养液中添加Y-27632培养EPC,采用Brd U、Ki67免疫细胞化学和CCK-8实验检验其增殖;定量聚合酶链反应、蛋白免疫印迹、免疫细胞化学实验检测EPC的诱导分化效果;采用前房注射的方法修复激光损伤角膜内皮的动物模型,术后观察角膜透明度、水肿程度、眼压及内皮修复效果。（3）应用蛋白免疫印迹检测不同种属角膜内皮层Pten蛋白的表达。添加Pten抑制剂后,采用角膜类器官培养、Brd U染色、流式细胞学和免疫细胞化学方法来检测CEC细胞周期;通过划痕实验、侵袭实验检测CEC的迁移能力。在大鼠角膜内皮损伤模型上前房注射Pten抑制剂,评价其对内皮损伤修复的作用。结果（1）采用3 m J Nd:YAG激光能量,对兔角膜内皮层中央9mm的区域进行均匀分散地爆破,可成功制作兔角膜内皮失代偿模型。（2）Y-27632可以促进EPC增殖,并提高其向CEC方向诱导分化的效率。联合应用Y-27632和EPC前房注射,可促进角膜透明度的恢复、水肿的消退和角膜内皮损伤的修复,效果优于单纯注射Y-27632或EPC。（3）人和大鼠CEC的Pten蛋白表达量有差异,且这种差异与增殖能力有关。Pten的抑制剂可以通过影响PI3K/Akt通路,解除TGF-β2介导的G1期阻滞,促进CEC增殖和迁移。动物模型前房注射Pten抑制剂可以促进角膜内皮损伤修复。结论（1）Nd:YAG激光可以有效制作角膜内皮失代偿模型,且这种方法侵入性小,精确性高,副反应少,稳定性好。（2）Y-27632联合条件培养液可以促进EPC的增殖和诱导分化,二者联合有利于角膜内皮损伤的修复。（3）抑制Pten活性促进角膜内皮的再生,可以作为角膜内皮失代偿治疗的一个新靶点。
吴敏[5]（2018）在《角膜内皮失代偿动物模型建立及水通道蛋白、Smac/DIABLO的表达变化研究》文中提出[目的]1.利用恒河猴和SD大鼠探索建立角膜内皮失代偿动物模型,对比分析各自的优缺点和应用前景,为研究角膜内皮失代偿疾病动物模型建立提供新思路。2.研究水通道蛋白AQP-1、AQP-3、AQP-5、Na+-K+-ATP酶和第2个线粒体衍生的半胱天冬酶激活因子/低等电点的IAP直接结合蛋白（Smac/DIABLO）在聚维酮碘诱导的大鼠角膜内皮失代偿动物模型中的表达变化,初步探讨其作用机制。[方法]1.通过超声损伤诱导建立恒河猴角膜内皮失代偿动物模型,并进行临床和病理观察。2.通过前房灌注0.5%和0.25%浓度的聚维酮碘（PVP-I）诱导建立SD大鼠角膜内皮细胞失代偿动物模型,并进行临床和病理观察。3.对两种不同方法建立角膜内皮失代偿动物模型的优缺点进行比较分析。4.应用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western Blot观察水通道蛋白AQP-1、AQP-3、AQP-5、Na+-K+-ATP 和 Smac/DIABLO 在大鼠角膜内皮失代偿动物模型中的mRNA和蛋白表达变化。[结果]1.改良超声法诱导建立恒河猴角膜内皮失代偿模型成功率为100.0%。在超声损伤角膜内皮后,角膜改变逐渐出现在内皮层、基质层、前弹力层和基底上皮层,术后4w出现角膜严重混浊,明显的上皮下大泡改变。共聚焦显微镜检查显示超声损伤后早期主要改变是角膜内皮细胞间隙增宽、细胞轻度水肿,基质层出现活化的基质细胞和细胞形态改变,基质厚度增加,术后2周开始出现前弹力层上皮状神经纤维减少,同时伴有基质层和内皮水肿加重,术后3周基底上皮细胞间隙增宽,少量朗格汉斯细胞浸润,基质层和内皮水肿加重,术后4周基底上皮层大量朗格汉斯细胞浸润,前弹力层仅见少量上皮状神经纤维,基质层大量活化的基质细胞,内皮层严重水肿。随着造模时间延长,实验组角膜厚度不断增厚,与术前相比,差异具有统计学意义,造模后不同时间点与对照组相比差异具有统计学意义。造模后4周HE染色几乎看不到角膜内皮层,Descemet’s膜暴露,基质层厚度显着增加;扫描电镜下显示大片的Descemet’s膜裸露,仅有极少数内皮细胞附着,残留的角膜内皮细胞明显水肿。2.0.5%（实验1组）和0.25%（实验2组）PVP-I前房灌注诱导建立SD大鼠角膜内皮功能失代偿模型的成功率均为100.0%,0.5%浓度组在术后14d即出现明显的角膜内皮功能失代偿改变,而0,25%浓度组则在30d才出现明显的角膜内皮功能失代偿改变。术后并发症主要是前房积血和眼球萎缩,5眼（5.0%）眼发生前房积血,包括1组2眼（4.0%）和2组3眼（6.0%）。有4眼（4.0%）发生眼球萎缩,包括1组3眼（6.0%）和2组1眼（2.0%）。总的并发症发生率在实验1组和2组分别为10.0%和8.0%,两组间并发症发生率没有统计学意义（X2=2.7616,p>0.05）。实验1组、2组随着观察时间的延长,角膜厚度出现不断增加的趋势,1组术后14d、30d中央角膜厚度与术前和空白对照组中央角膜厚度相比均有显着性差异（p<0.05）;2组在30d时CCT与术前和空白对照组中央角膜厚度相比均有显着性差异（p<0.05）。HE染色显示1组和2组均出现不同程度角膜内皮细胞消失,角膜基质增厚可见丰富血管,胶原纤维组织消失。扫描电镜显示两组不同程度的内皮细胞脱落、水肿,透射电镜显示内皮细胞线粒体嵴内水肿,轴突水肿。实验1组的病理、扫描和透射电镜改变均较2组严重。3.在大鼠角膜内皮失代偿动物模型中,RT-PCR结果显示AQP1 mRNA在造模后出现表达显着变化,呈现先降低后升高趋势,到14d达到峰值,表达量约为正常角膜的4.7倍。AQP3 mRNA和AQP5 mRNA在造模后出现表达显着降低趋势,到7d达到谷值,分别为正常角膜表达量的8%和1%。Na+-K+-ATP酶mRNA在在造模后早期出现下降晚期升高的趋势,7d达到谷值,约为正常角膜的1/4,到30d达到峰值,为正常角膜的1.9倍。Smac/DIABLOmRNA表达出现先下降后升高再下降的趋势,3d达到峰值,约为正常角膜的1.5倍,至30d约下降到正常角膜的1/4。Western-blot结果显示,与正常角膜组织相比,AQP1蛋白出现先升高后下降趋势,造模后7d达到峰值,约为正常角膜的7倍,在造模后30d低于正常角膜组织的AQP1蛋白表达。Na+-K+-ATP酶蛋白表达显着升高,7d达到峰值,在14d开始降至接近正常角膜。Smac/DIABLO蛋白表达造模后不断升高,7d达到峰值,30d仍然显着升高。[结论]1.改良超声法能成功诱导建立恒河猴角膜内皮失代偿模型,共聚焦显微镜对于动态观察恒河猴角膜变化情况是有用的工具。2.0.5%和0.25%PVP-I前房灌注均能成功诱导建立SD大鼠角膜内皮失代偿模型,PVP-I造模存在引发眼球萎缩的可能性,0.5%浓度的PVP-I可以更加快速诱发模型,临床表现也更为典型。3.SD大鼠角膜内皮失代偿发生发展过程中,水通道蛋白在蛋白表达和mRNA表达均发生了显着变化,其中AQP1先降低后显着升高,AQP3和AQP5出现显着下降;AQP1的蛋白表达也出现显着升高然后下降。Na+-K+-ATP酶出现mRNA表达先下降后升高,蛋白表达出现先升高后降低的改变。Smac/DIABLO mRNA表达现先下降后升高再下降,蛋白表达水平则持续升高。4.SD大鼠角膜内皮失代偿模型角膜组织中发生了 AQPs、Na+-K+-ATP酶和Smac/DIABLO的表达显着变化,说明在CED的病理生理过程中,AQPs和Na+-K+-ATP 酶、Smac/DIABLO 起到了重要作用。AQP1 和 Na+-K+-ATP 酶可能是CED病情变化的敏感指标,Smac/DIABLO可能通过线粒体凋亡途径调节角膜组织的细胞凋亡,参与到CED发生发展的的病理生理过程,但具体的作用机制待进一步研究证实。
中国医科大学医学信息学系[6]（2012）在《中国实用眼科杂志2012年第30卷主题词索引》文中研究说明
陈苹[7]（2012）在《诱导小鼠ES/iPS细胞向角膜内皮细胞定向分化的研究》文中指出目的:通过在体外分阶段的序贯诱导途径,探索小鼠胚胎干细胞（ES）及诱导型多潜能干细胞（i PS）向角膜内皮样细胞定向分化的潜能,探究化学分子RA,细胞因子（b FGF、BMP4）联合体细胞共培养诱导的具体条件和方案,以期阐明其定向分化中的关键机制,并验证ES和i PS细胞作为角膜组织工程种子细胞的可行性,为组织工程角膜内皮层重建寻找来源充足,安全可靠的新型种子细胞奠定基础。方法:1.体外撕膜法分离消化新西兰大白兔的角膜内皮细胞及晶状体上皮细胞,建立培养扩增体系,并对其活力和特异性表达的标志物进行免疫荧光细胞化学（ICC）鉴定。收集晶状体上皮细胞的条件培养液,采用MTT法、Ki67的免疫荧光检测角膜内皮细胞在条件培养液中的增殖能力,用Western blot评估其表型标记物表达的变化。2.应用mef制备feeder,联合ES培养液维持和扩增小鼠ES细胞及i PS细胞系,并鉴定其全能性指标。去除lif因子及feeder,在低黏附培养皿中悬浮培养拟胚体EB,EB形成第四天加入不同浓度RA,并在不同时间点用定量PCR检测神经脊分化的指标。选择和比较不同的细胞外基质包括纤维连接蛋白、层粘蛋白、明胶、多聚赖氨酸和组织液房水作培养板的包被对神经脊（neural crest,NC）细胞迁出分化的影响,并采用ICC法对分化标志物进行检测。3.用P2-P3的兔角膜内皮细胞和兔晶状体上皮细胞分别进行如下共培养处理,包括:（1）条件培养液收集;（2）微胶囊包裹隔离共培养;（3）作为transwell小室隔离共培养的细胞;（4）丝裂霉素C处理制备饲细胞铺层;（5）活性细胞铺层。将初步诱导的NC样细胞序贯进入共培养阶段,比较并确定合适的共培养方法。应用ICC对分化后内皮样细胞进行表面标记关键分子的鉴定,定量PCR对分化后细胞m RNA表达谱的分析。4.采用b FGF+BMP4单层贴壁法诱导ES细胞向神经脊干细胞分化,后续条件培养液诱导向角膜内皮样细胞分化,并用ICC鉴定分化标记物的表达情况,用定量PCR分析基因表达的变化。结果:1.兔角膜内皮细胞、晶状体上皮细胞在体外可以稳定地培养增殖,并表达其组织特异性的标记物。晶状体的条件培养液对角膜内皮细胞的增殖没有明显影响,但能上调角膜内皮细胞中ZO-1,N-cadherin和Vimentin的表达。2.ES/i PS细胞在lif和feeder的培养条件下表达全能性的标记物Oct4,SSEA-1,AP（+）;去除lif和feeder后,在悬浮培养过程中形成拟胚体EB,第四天添加RA继续培养,随后的第四天获得一组神经脊分化标记物最高的表达。EB重新贴壁后继续培养时有大量细胞迁出,ICC检测显示有Nestin,P75,AP-2α,SOX10等的表达。3.Transwell小室,微胶囊包裹的实验组,EB细胞迁出生长,但不能维持良好的长势;在活性细胞做铺层的接触共培养组,EB细胞迁出受阻,出现大量的细胞凋亡;在晶状体上皮细胞及角膜内皮细胞条件培养液诱导7-8天后,诱导细胞形成紧密的铺路石结构,表达AQP1,ZO-1,Na+-K+-ATPase,N-cadherin等内皮标记。在长时间明胶铺层及Fn、Ln、多聚赖氨酸和兔房水铺层中,长时间明胶铺层能较好地维持EB贴壁生长并促进向内皮样细胞的分化。4.在单层细胞贴壁分化中,b FGF+BMP4诱导ES-cells表达神经脊细胞的标记物,继续晶状体条件培养液诱导6d出现角膜内皮样细胞标记物的表达。结论:1通过撕膜法可以建立稳定的兔角膜内皮细胞和晶状体上皮细胞的培养体系。晶状体上皮细胞条件培养液能更好地维持角膜内皮细胞的表型包括中ZO-1、N-cadherin、Vimentin,对细胞增殖没有明显影响。2.小鼠ES/i PS细胞可以通过EB途径经RA诱导向神经脊多潜能间充质干细胞分化。在定向分化中,长时间的明胶铺层效果更优于Laminin和Fibronectin所做的铺层。3.条件培养液是一种简单、可行、可控的共培养模式。在序贯法诱导方案中,角膜内皮细胞条件培养液和晶状体上皮细胞的条件培养液均能有效促进ES/i PS细胞来源的神经脊间充质干细胞向角膜内皮细胞的分化。4.单层细胞贴壁分化联合b FGF+BMP4因子诱导ES细胞向神经脊多潜能间充干细胞分化,后续应用晶状体上皮细胞条件培养液能更高效地诱导ES细胞分化成角膜内皮样细胞。
侯跃芳[8]（2010）在《中国实用眼科杂志2010年第28卷主题词索引》文中研究指明
胡晓琴[9]（2008）在《兔角膜内皮细胞压力仿生培养及调控机制的研究》文中研究表明目的本研究拟通过体外压力培养平台,分析不同压力梯度下角膜内皮细胞的形态和结构特点,以及其生物学功能的变化规律。探讨正常眼压对角膜内皮细胞活性的正向调节作用,为建立旨在提高角膜内皮细胞培养质量的三维仿生培养系统提供理论依据,构建工程化角膜内皮细胞移植膜。阐明病理性高眼压下角膜内皮细胞损伤的病理基础和调控环节,为青光眼治疗策略中的内皮细胞保护提供实验依据。方法第一部分角膜内皮细胞培养技术的改良将带有兔角膜内皮细胞的后弹力层完整撕下,胰蛋白酶-EDTA联合酶化,纯化的角膜内皮细胞进行体外培养。倒置显微镜下观察细胞形态,描记细胞生长倍增曲线。神经元特异性烯醇化酶抗体进行细胞表型鉴定。苏木素-伊红（HE）染色以及茜素红-台盼兰联合染色分析细胞活性,流式细胞仪检测细胞体外生长过程中AnnexinⅤ-PE的表达情况,透射电镜和扫描电镜进行细胞超微结构形态的观察。第二部分角膜内皮细胞压力仿生培养的研究设计并制作自动充压范围为0～60mmHg的压力维持培养装置,测定预设压力的维持时间,确定自动充压的时间点。将接种了传代角膜内皮细胞的培养板放入压力预设为2KP（14.66mmhg）的压力维持培养装置中,进行持续培养。观察细胞的形态,形成单层的时间,描记细胞倍增曲线。形成单层后茜素红-台盼兰联合活性染色评价细胞活性,正常压力培养过程中,激光共焦显微镜检测细胞连接蛋白ZO-1表达部位和表达强度,评价细胞间连接功能的建立情况。免疫荧光法追踪Caspase-3表达,流式细胞技术检测压力培养下AnnexinV-PE阳性细胞的比例。第三部分三维压力仿生培养构建工程化角膜内皮细胞移植膜胰酶消化去除羊膜上皮细胞,保留基底膜作为载体,接种纯化兔角膜内皮细胞,在压力培养系统中,进行三维仿生培养,构建工程化角膜内皮细胞移植膜。HE染色,电镜观察构建移植膜的组织结构及形态,免疫荧光分析ZO-1蛋白的表达。第四部分高压力作用下角膜内皮细胞损伤机制研究增压培养装置内给予持续高压3.2kp～4.6kp （24.06mmhg～34.59mmhg）、5.4kp～6.8kp（40.60mmhg～51.29mmhg）,观察角膜内皮细胞形态以及增殖活性的变化,评估角膜内皮细胞生物学活性与压力强度以及持续时间的相关性,检测早期凋亡因子Caspase-3、AnnexinV的表达规律。结果1.后弹力层撕除联合酶消化法获得大量纯化的角膜内皮细胞,快速贴壁生长并增殖,体外培养3～4 d即融合成单层细胞,表达神经元特异性烯醇化酶抗体阳性, HE染色及活性染色提示细胞功能良好。2.生理压力环境培养下的角膜内皮细胞生长活性良好,细胞立体感强、外形扁平,细胞间连接紧密,细胞膜及交界区ZO-1蛋白高水平表达,更接近机体生理状态下生长的内皮细胞。生理压力下未见明显的细胞凋亡现象。3.压力培养系统中,角膜内皮细胞接种于脱细胞羊膜后,快速生长并增殖,3～4d即融合成单层,其形态及生长密度优于单纯培养皿上培养的内皮细胞。HE染色及电镜显示构建的工程化内皮植片具有与生理角膜内皮组织相近的组织结构。4.高压环境下培养的角膜内皮细胞,增殖缓慢,胞体大而透明,胞浆内含较多的颗粒,细胞间隙增宽。随着培养时间的增长,Caspase-3、AnnexinV表达增强,凋亡细胞比例显着增加。结论1.角膜后弹力层撕除联合酶消化法可提高角膜内皮细胞的获取和培养效率,该方法提取的角膜内皮细胞纯,细胞数量较多,细胞生长良好,同时减少了上皮、基质引起细胞性污染的风险,为工程化角膜内皮移植膜的构建提供稳定的种子细胞来源。2.低压力仿生培养环境,对角膜内皮细胞的功能有正向调节作用,可促进体外培养角膜内皮细胞之间连接功能的建立,为工程化角膜内皮移植膜的构建提供了新的环境模式诱导平台。3.低压力三维仿生培养系统中,以脱细胞羊膜为载体,可构建细胞密度、形态以及组织结构与生理内皮相似的工程化内皮细胞移植膜,为角膜内皮细胞移植研究进行了前期技术储备。4.高压力对角膜内皮细胞有损伤作用,通过引起细胞凋亡的途径来实现,呈现出时间-量效曲线,Caspase-3、AnnexinV是细胞凋亡启动的关键因子。
陶远,王红,乔智[10]（2007）在《毛果芸香碱滴眼对兔眼角膜内皮细胞凋亡作用的影响》文中研究说明目的探讨长期应用毛果芸香碱对兔眼角膜内皮细胞有无影响及影响方式。方法用2%的毛果芸香碱给兔滴眼1个月和3个月后,取下兔眼球迅速固定,分离角膜内皮组织,用蛋白印迹（Western-blot）法检测兔眼角膜内皮细胞中抗凋亡基因bcl-2蛋白及凋亡基因bax蛋白的表达,流式细胞仪检测角膜内皮细胞的凋亡率,透射电镜下观察各组角膜内皮细胞的超微结构变化。结果应用毛果芸香碱1个月及3个月后,均呈现兔眼角膜内皮细胞凋亡基因bax蛋白表达增多,抗凋亡基因bcl-2蛋白表达减少,3个月组兔眼角膜内皮细胞凋亡率高于对照组（P<0.05）,透射电镜下观察可见,1个月及3个月组细胞内空泡形成,线粒体肿胀,内质网扩张,细胞核固缩,染色质固缩周边化等典型凋亡改变。结论长期应用2%的毛果芸香碱可以诱导兔眼角膜内皮细胞发生凋亡。
二、角膜内皮细胞凋亡的研究现状（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、角膜内皮细胞凋亡的研究现状（论文提纲范文）
（1）飞秒激光辅助白内障超声乳化术治疗Fuchs角膜内皮营养不良合并白内障及高度近视白内障合并角膜散光病例的长期临床分析（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、飞秒激光辅助白内障超声乳化术在Fuchs角膜内皮营养不良患者临床分析 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验对象 |
| 1.1.2 实验方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 FECD合并白内障患者发病率及基本资料情况 |
| 1.2.2 术后数据分析 |
| 1.2.3 术前、术后中央角膜厚度对比 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 二、飞秒激光辅助白内障超声乳化术对FECD患者手术适应症分析 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 对象 |
| 2.1.2 实验方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 术前基本资料 |
| 2.2.2 相关性分析 |
| 2.2.3 中央角膜厚度(CCT)与并发症分析 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 三、飞秒激光辅助白内障超声乳化术在高度近视白内障合并角膜散光患者应用 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 对象 |
| 3.1.2 方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 A组(飞秒激光联合Toric IOL)与B1组(飞秒激光联合IQ IOL)对照 |
| 3.2.2 A组(飞秒激光联合Toric IOL)与B2组(传统超乳联合Toric IOL)对照 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 综述 飞秒激光与数字导航系统研究现状 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（2）供体角膜植片取材及保存时间对角膜内皮细胞密度的影响研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结轮 |
| 参考文献 |
| 综述 供体角膜内皮细胞对角膜移植手术影响研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（3）高脂血症对小鼠睑板腺和角膜内皮的影响及其作用机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 1.1 睑板腺 |
| 1.1.1 睑板腺结构 |
| 1.1.2 睑板腺功能 |
| 1.1.3 睑板腺功能障碍 |
| 1.2 角膜内皮的结构和功能 |
| 1.3 高脂血症 |
| 1.4 高脂血症和眼部疾病 |
| 1.4.1 脂性角膜弓 |
| 1.4.2 脂质角膜病 |
| 1.4.3 糖尿病性视网膜病变 |
| 1.5 研究现状和本课题的研究意义 |
| 第二章 高脂饮食诱导的肥胖和高脂血症通过PPAR-γ通路促进小鼠睑板腺炎症 |
| 2.1 背景介绍 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 动物 |
| 2.2.2 主要仪器设备 |
| 2.2.3 主要试剂与药品 |
| 2.2.4 抗体 |
| 2.2.5 主要耗材 |
| 2.2.6 主要溶液配制 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 动物饲养与处理 |
| 2.3.2 裂隙灯检查 |
| 2.3.3 血液中总胆固醇含量检测 |
| 2.3.4 H&E染色 |
| 2.3.5 油红O染色 |
| 2.3.6 免疫荧光染色 |
| 2.3.7 RNA提取、反转录和qRT-PCR |
| 2.3.8 引物设计 |
| 2.3.9 Western Blot |
| 2.3.10 透射电镜 |
| 2.3.11 统计方法 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 高脂饮食可以诱导小鼠的肥胖和高脂血症以及睑板腺分泌物的异常 |
| 2.4.2 高脂饮食可以诱导小鼠睑板腺组织学改变 |
| 2.4.3 高脂饮食可以诱导小鼠睑板腺炎症细胞浸润 |
| 2.4.4 高脂饮食可以改变小鼠睑板腺PPAR-γ的表达水平 |
| 2.4.5 高脂饮食可以激活小鼠睑板腺MAPK和NF-κB信号通路 |
| 2.4.6 高脂饮食可以促进小鼠睑板腺腺泡细胞凋亡 |
| 2.4.7 高脂饮食可以破坏小鼠睑板腺线粒体结构 |
| 2.4.8 恢复饮食可以逆转小鼠睑板腺的表型 |
| 2.4.9 罗格列酮可以减轻高脂饮食诱导的睑板腺炎症 |
| 2.5 讨论 |
| 第三章 载脂蛋白E缺乏导致小鼠睑板腺功能障碍 |
| 3.1 背景介绍 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 动物 |
| 3.2.2 主要仪器设备 |
| 3.2.3 主要试剂与药品 |
| 3.2.4 抗体 |
| 3.2.5 主要耗材 |
| 3.2.6 主要溶液配制 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 动物饲养与处理 |
| 3.3.2 裂隙灯检查 |
| 3.3.3 血液总胆固醇含量检测 |
| 3.3.4 H&E染色 |
| 3.3.5 油红O染色 |
| 3.3.6 凋亡检测 |
| 3.3.7 免疫荧光染色 |
| 3.3.8 免疫组织化学染色 |
| 3.3.9 RNA提取、反转录和qRT-PCR |
| 3.3.10 引物设计 |
| 3.3.11 Western Blot |
| 3.3.12 统计方法 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 ApoE~(-/-)小鼠特征 |
| 3.4.2 ApoE~(-/-)小鼠睑板腺和眼表临床表现 |
| 3.4.3 ApoE~(-/-)小鼠睑板腺细胞的病理改变 |
| 3.4.4 ApoE~(-/-)小鼠眼睑组织的炎症 |
| 3.4.5 ApoE~(-/-)小鼠睑板腺细胞的氧化应激 |
| 3.4.6 ApoE~(-/-)小鼠睑板腺细胞分化的改变 |
| 3.4.7 PPAR-γ激动剂可显着改善ApoE~(-/-)小鼠睑板腺的病理改变 |
| 3.5 讨论 |
| 第四章 高脂血症影响角膜内皮的紧密连接和泵功能 |
| 4.1 背景介绍 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 动物 |
| 4.2.2 主要仪器设备 |
| 4.2.3 主要试剂与药品 |
| 4.2.4 抗体 |
| 4.2.5 主要耗材 |
| 4.2.6 主要溶液配制 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 动物 |
| 4.3.2 高脂血症动物的建立 |
| 4.3.3 血液胆固醇和空腹血糖检测 |
| 4.3.4 油红O染色 |
| 4.3.5 活体共聚焦显微镜 |
| 4.3.6 小鼠内皮损伤模型的建立 |
| 4.3.7 扫描电镜 |
| 4.3.8 透射电镜 |
| 4.3.9 房水的提取和检测 |
| 4.3.10 兔角膜内皮细胞原代培养 |
| 4.3.11 棕榈酸制备 |
| 4.3.12 CCK8实验 |
| 4.3.13 免疫荧光染色 |
| 4.3.14 免疫组织化学染色 |
| 4.3.15 RNA提取、反转录和qRT-PCR |
| 4.3.16 引物设计 |
| 4.3.17 统计方法 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 ApoE基因缺陷和高脂饮食可以诱导小鼠高脂血症以及角膜内皮细胞的脂质沉积 |
| 4.4.2 高脂血症导致小鼠角膜内皮细胞表型改变 |
| 4.4.3 高脂血症导致小鼠角膜内皮细胞损伤后失代偿 |
| 4.4.4 高脂血症诱导小鼠角膜内皮细胞氧化应激 |
| 4.4.5 棕榈酸诱导体外培养的兔角膜内皮细胞表型改变 |
| 4.4.6 棕榈酸诱导体外培养的兔角膜内皮细胞氧化应激和线粒体功能障碍 |
| 4.5 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 博士在读期间相关科研成果和获奖 |
| 致谢 |
（4）EPC和Pten在角膜内皮损伤修复中的作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词 |
| 引言 |
| 1.研究背景 |
| 1.1 角膜内皮层的结构和功能 |
| 1.2 角膜内皮失代偿 |
| 1.3 临床治疗现状 |
| 2.研究意义和创新之处 |
| 第一部分 Nd:YAG激光制作角膜内皮损伤模型的可行性研究 |
| 1.引言 |
| 1.1 Nd:YAG激光的基本原理及在眼科学的应用 |
| 1.2 角膜内皮损伤模型的研究现状 |
| 1.3 本研究的意义 |
| 2.材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 主要仪器设备 |
| 2.1.2 细胞检测试剂及抗体 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 动物选择及伦理审核 |
| 2.2.2 激光造模 |
| 2.2.3 裂隙灯检查和OCT检查 |
| 2.2.4 Goldmann压平式眼压计检查 |
| 2.2.5 共焦激光角膜显微镜检查 |
| 2.2.6 扫描电镜检查和组织学检查 |
| 2.2.7 统计学分析/数据分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 角膜透明度和角膜厚度分析 |
| 3.2 共焦激光角膜显微镜检查 |
| 3.3 扫描电镜检查 |
| 3.4 组织学检查 |
| 3.5 激光后的并发症 |
| 4 讨论 |
| 5 本章小结 |
| 第二部分 诱导人脐带血内皮祖细胞分化为角膜内皮样细胞的实验研究 |
| 1.引言 |
| 1.1 角膜内皮组织工程中种子细胞的来源 |
| 1.1.1 增强人角膜内皮细胞的可利用率 |
| 1.1.2 干细胞诱导分化为角膜内皮样的细胞 |
| 1.1.3 其他类型的细胞 |
| 1.2 组织工程角膜内皮载体材料的选择 |
| 1.2.1 复合载体支架移植 |
| 1.2.2 前房注射移植 |
| 1.3 Y-27632 在角膜内皮再生中的应用 |
| 1.4 本研究的意义 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 主要检测仪器设备 |
| 2.1.2 主要耗材 |
| 2.1.3 细胞培养试剂 |
| 2.1.4 细胞检测试剂及抗体 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 人脐带血内皮祖细胞的分离和培养 |
| 2.2.2 人角膜内皮细胞的分离和培养 |
| 2.2.3 条件培养液的制备 |
| 2.2.4 CCK-8 增殖实验 |
| 2.2.5 人脐血内皮祖细胞的体外诱导分化实验 |
| 2.2.6 免疫细胞化学实验 |
| 2.2.7 Brd U/Ki67 增殖实验 |
| 2.2.8 细胞总RNA的提取 |
| 2.2.9 逆转录反应及定量PCR实验 |
| 2.2.10 蛋白样本的提取 |
| 2.2.11 蛋白免疫印迹实验 |
| 2.2.12 动物模型中细胞注射前的准备 |
| 2.2.13 动物角膜内皮损伤模型的制备 |
| 2.2.14 裂隙灯检查和OCT检查 |
| 2.2.15 Goldmann压平式眼压计检查 |
| 2.2.16 共焦激光角膜显微镜检查 |
| 2.2.17 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 Y-27632 促进脐带血内皮祖细胞的增殖 |
| 3.2 Y-27632 促进脐带血内皮祖细胞分化为角膜内皮样的细胞 |
| 3.3 结合脐带血内皮祖细胞和Y-27632 的前房注射疗法促进角膜水肿的消退和角膜厚度的恢复 |
| 3.4 结合脐带血内皮祖细胞和Y-27632的前房注射疗法促进角膜透明度的恢复 |
| 3.5 结合脐带血内皮祖细胞和Y-27632的细胞疗法有利于角膜内皮损伤的修复 |
| 3.6 相关并发症 |
| 4 讨论 |
| 5 本章小结 |
| 第三部分 Pten在人角膜内皮细胞G1 期阻滞和迁移中的作用机制研究 |
| 1.引言 |
| 1.1 角膜内皮细胞的增殖特性 |
| 1.2 角膜内皮细胞在体情况下处于G1 期阻滞的原因 |
| 1.3 促进角膜内皮细胞增殖的研究进展 |
| 1.4 Pten的研究现状 |
| 1.5 本研究的意义 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 主要检测仪器及设备 |
| 2.1.2 主要耗材 |
| 2.1.3 细胞培养相关的试剂 |
| 2.1.4 细胞检测试剂及抗体 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 大鼠角膜类器官培养和药物处理 |
| 2.2.2 人和大鼠角膜内皮层组织蛋白的提取 |
| 2.2.3 人角膜内皮细胞系的培养和药物处理 |
| 2.2.4 流式细胞周期检测 |
| 2.2.5 免疫细胞化学实验 |
| 2.2.6 细胞样本的蛋白提取和蛋白免疫印记实验 |
| 2.2.7 划痕实验 |
| 2.2.8 Transwell小室侵袭实验 |
| 2.2.9 大鼠角膜内皮损伤模型的制作 |
| 2.2.10 免疫组织化学实验 |
| 2.2.11 扫描电镜检查 |
| 2.2.12 统计学分析/数据分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 Pten的表达量可能与角膜内皮细胞的周期阻滞有关 |
| 3.2 抑制Pten活性可以在体情况下解除角膜内皮细胞的周期阻滞 |
| 3.3 抑制Pten活性可以减轻p27Kip1 核聚集,有利于细胞抵御TGF-β2 介导的G1 期阻滞 |
| 3.4 Pten通过影响PI3K/Akt通路参与TGF-β2 介导的G1 期阻滞 |
| 3.5 抑制Pten的活性可以促进角膜内皮细胞的迁移 |
| 3.6 前房注射bp V(pic)可以促进角膜内皮损伤的修复 |
| 4 讨论 |
| 5 本章小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 学术论文及成果 |
（5）角膜内皮失代偿动物模型建立及水通道蛋白、Smac/DIABLO的表达变化研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| （一）CED动物模型建立 |
| （二）CED的临床治疗 |
| （三）水通道蛋白与角膜疾病 |
| （四）第2个线粒体衍生的半胱天冬酶激活因子/低等电点的IAP直接结合蛋白（Second mitochondria-derived activator of caspases/direct inhibitor ofapoptosis-binding protein with low pi, Smac/DIABLO) |
| 参考文献 |
| 第一部分 改良超声法诱导建立恒河猴CED模型 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 前房灌注聚维酮碘诱导建立SD大鼠CED模型 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 水通道蛋白、Smac/DIABLO在聚维酮碘诱导的大鼠CED模型中的表达变化研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（7）诱导小鼠ES/iPS细胞向角膜内皮细胞定向分化的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略语一览表 |
| 第一部分 前言 |
| 1.1 研究意义和背景 |
| 1.1.1 角膜内皮层重建的重要意义 |
| 1.1.2 组织工程技术修复角膜内皮层的研究现状 |
| 1.1.3 ES/IPS细胞为基础的干细胞治疗的研究现状 |
| 1.1.4 ES/iPS 细胞为基础的干细胞作为替代治疗的种子细胞的可行性 |
| 1.2 本论文的研究目的及主要内容 |
| 第二部分 晶状体上皮细胞的旁分泌作用对角膜内皮细胞的影响 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 试剂与材料 |
| 2.2.2 兔角膜内皮细胞(Corneal endothelial cell,CEC)的取材和培养 |
| 2.2.3 兔角膜内皮细胞的表面分子标记鉴定(表型鉴定) |
| 2.2.4 晶状体上皮细胞(Lens epitheliual cell,LEC)的取材和培养 |
| 2.2.5 晶状体上皮细胞表型鉴定 |
| 2.2.6 MTT/CCK8 生长曲线法检测 LEC 条件培养液对角膜内皮细胞增值的影响 |
| 2.2.7 免疫荧光法 Ki67 检测条件培养液对角膜内皮细胞增殖的影响 |
| 2.2.8 流式细胞术检测 LEC 条件培养液对角膜内皮细胞增殖的影响 |
| 2.2.9 Western-blot 检测条件培养液对角膜内皮细胞表型维持的影响 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 兔角膜内皮细胞 CEC 和晶状体上皮细胞 LEC 的体外生长形态与规律 |
| 2.3.2 兔角膜内皮细胞的表面分子标记鉴定 |
| 2.3.3 兔角膜内皮细胞Ac-LDL 及UEA-1 检测 |
| 2.3.4 兔晶状体上皮细胞的细胞标记鉴定 |
| 2.3.5 MTT/CCK8 生长曲线法检测晶状体条件培养液对角膜内皮细胞增殖的影响 |
| 2.3.6 免疫荧光法Ki67检测条件培养液对角膜内皮细胞增殖的影响 |
| 2.3.7 条件培养液下多次传代后的CEC细胞状态 |
| 2.3.8 流式细胞术检测晶状体条件培养液对角膜内皮细胞增殖的影响 |
| 2.3.9 Western-blot检测条件培养液对角膜内皮细胞表型维持的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 本章结论 |
| 第三部分 ES/iPS细胞的体外培养,经EB途径RA诱导向神经脊间充质干细胞的分化 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.2.1 试剂与材料 |
| 3.2.2 ES/iPS干细胞的体外培养和增殖 |
| 3.2.3 ES/iPS干细胞的全能性标记鉴定 |
| 3.2.4 拟胚体EB(Embryonic body,EB)形成 |
| 3.2.5 RA诱导EB进一步分化方法 |
| 3.2.6 不同铺层的制备 |
| 3.2.7 免疫荧光检测神经脊间充干细胞相关蛋白标记物(P75、AP-2α、SOX10) |
| 3.2.8 Real-time PCR法检测EB分化过程中神经脊间充干细胞相关m RNA表达 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 分化流程 |
| 3.3.2 feeder的准备 |
| 3.3.3 ES/iPS细胞的体外生长形态与规律 |
| 3.3.4 ES/iPS 干细胞的全能性标记物检测鉴定 |
| 3.3.5 EB分化及RA诱导分化的生长情况 |
| 3.3.6 不同铺层 EB 细胞迁出的形态与大体情况 |
| 3.3.7 免疫荧光检测神经脊间充干细胞相关蛋白标记物表达 |
| 3.3.8. RT-PCR检测分化过程胚层标记物表达及Realtime PCR法检测EB分化过程中神经脊间充质干细胞相关mRNA 表达 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 本章结论 |
| 第四部分 共培养诱导角膜内皮样细胞分化 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 试剂与材料 |
| 4.2.2 不同共培养体系的建立 |
| 4.2.3 不同共培养体系对EB贴壁细胞迁出的初步比较 |
| 4.2.4 条件培养液法进一步诱导ES/iPS细胞源的NC细胞向内皮样细胞分化 |
| 4.2.5 免疫荧光检测角膜内皮细胞相关蛋白标记物表达 |
| 4.2.6 Realtime PCR检测诱导分化后角膜内皮样细胞相关mRNA表达 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 不同共培养模式及其中诱导细胞的状态 |
| 4.3.2 不同共培养方式细胞分化生长的差别 |
| 4.3.3 免疫荧光检测诱导后角膜内皮细胞相关蛋白标记物表达情况 |
| 4.3.4 Realtime PCR法检测不同诱导方案,分化过程中角膜内皮细胞相关m RNA表达变化及差异 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 本章结论 |
| 第五部分 单层贴壁法诱导ES细胞向角膜内皮样细胞分化 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 试剂与材料 |
| 5.2.2 bFGF+BMP4单层贴壁法诱导ES细胞向NC细胞分化 |
| 5.2.3 神经脊 NC 细胞分化指标的检测 |
| 5.2.4 条件培养液法对 NC 细胞的序贯诱导 |
| 5.2.5 分化后角膜内皮样细胞标记物的检测 |
| 5.2.6 分化后角膜内皮细胞相关 mRNA 表达变化及差异 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 ES细胞单层贴壁法向神经脊干细胞分化的情况 |
| 5.3.2 免疫荧光检测神经脊间充干细胞相关蛋白标记物 |
| 5.3.3 RealtimePCR法检测分化过程中神经脊间充干细胞相关m RNA表达 |
| 5.3.4 NC分化后序贯诱导出现 CEC 的分化 |
| 5.3.5 分化后角膜内皮样细胞标记的检测 |
| 5.3.6 分化后角膜内皮细胞相关 mRNA 表达变化及差异 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 本章结论 |
| 第六部分 全文总结与展望 |
| 6.1 全文总结 |
| 6.2 主要贡献和创新点 |
| 6.3 未来研究工作展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 博士期间学术论文及科研成果 |
（9）兔角膜内皮细胞压力仿生培养及调控机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 引言 |
| 第2章 角膜内皮细胞培养技术的改良 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要试剂及器材 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 取材 |
| 2.2.2 兔角膜内皮细胞体外培养 |
| 2.2.3 角膜内皮细胞鉴定 |
| 2.2.4 兔角膜内皮细胞电镜观察 |
| 2.2.5 兔角膜内皮活性检测 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 兔角膜内皮细胞体外培养的观察 |
| 2.3.2 培养兔角膜内皮细胞的鉴定 |
| 2.3.3 体外兔角膜内皮细胞的超微结构 |
| 2.3.4 兔角膜内皮细胞活性检测 |
| 2.4 讨论 |
| 附图 |
| 第3章 角膜内皮细胞压力仿生培养的研究 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验自加压培养装置 |
| 3.1.2 实验动物 |
| 3.1.3 兔角膜内皮细胞培养试剂和仪器同第2章 |
| 3.1.4 细胞免疫组化试剂和仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 兔角膜内皮细胞压力仿生培养 |
| 3.2.2 细胞 ZO-1 蛋白免疫荧光检测 |
| 3.2.3 Annexinⅴ-PE 细胞凋亡检测 |
| 3.2.4 统计学处理 |
| 3.2.5 兔角膜内皮细胞生长曲线测定 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 压力装置性能 |
| 3.3.2 兔角膜内皮细胞压力仿生培养的观察 |
| 3.3.3 细胞ZO-1蛋白荧光显示 |
| 3.3.4 Annexinⅴ-PE 细胞凋亡检测 |
| 3.3.5 仿生压力培养与无压培养RCE细胞凋亡检测结果分析 |
| 3.3.6 细胞生长特性 |
| 3.4 讨论 |
| 附图 |
| 第4章 压力仿生培养构建工程化角膜内皮细胞移植膜 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 实验动物 |
| 4.1.2 羊膜 |
| 4.1.3 角膜植片 |
| 4.1.4 实验自加压培养装置同第3章 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 处理羊膜 |
| 4.2.2 角膜植片提取 |
| 4.2.3 角膜植片的培养 |
| 4.2.4 兔角膜内皮细胞原代培养、传代培养 |
| 4.2.5 羊膜上角膜内皮细胞压力培养 |
| 4.2.6 电镜检测 |
| 4.2.7 角膜植片 羊膜细胞培养膜 HE 染色 免疫荧光检测 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 细胞培养 |
| 4.3.2 HE 染色 |
| 4.3.3 电镜观察 |
| 4.3.4 免疫荧光 |
| 4.4 讨论 |
| 附图 |
| 第5章 高压力作用下角膜内皮细胞损伤机制研究 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.1.1 实验动物 |
| 5.1.2 实验自加压培养装置同第 3 章 |
| 5.1.3 角膜内皮细胞培养试剂和仪器第 2 章 |
| 5.1.4 细胞免疫组化试剂和仪器 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 兔角膜内皮细胞的体外高压力原代培养 |
| 5.2.2 兔角膜内皮细胞的体外高压力传代培养 |
| 5.2.3 高压培养兔角膜内皮细胞与时间的关系的比较 |
| 5.2.4 兔角膜内皮细胞免疫荧光检测 |
| 5.2.5 AnnexinⅤ-PE 细胞凋亡检测 |
| 5.2.6 统计学处理 |
| 5.3 实验结果 |
| 5.3.1 自加压力装置性能 |
| 5.3.2 兔角膜内皮细胞体外压力培养的观察 |
| 5.3.3 免疫荧光显示 |
| 5.3.4 AnnexinⅤ-PE细胞凋亡检测结果分析 |
| 5.4 讨论 |
| 附图 |
| 第6章 结论与展望 |
| 6.1 全文结论 |
| 6.2 问题与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
（10）毛果芸香碱滴眼对兔眼角膜内皮细胞凋亡作用的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 动物与试药 |
| 1.1.2 试剂及仪器 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 实验分组及药物处理 |
| 1.2.2 取材 |
| 1.2.3 蛋白印迹法 (Western-blot) 检测bax和bcl-2 |
| 1.2.4 流式细胞仪检测角膜内皮细胞的凋亡率 |
| 1.2.5 电镜观察 |
| 1.3 统计学处理 |
| 2 结 果 |
| 2.1 bcl-2蛋白和bax蛋白在兔角膜内皮细胞的表达 |
| 2.2 流式细胞仪检测兔眼角膜内皮细胞凋亡的结果 |
| 2.3 兔眼角膜内皮细胞透射电镜下检测结果 |
| 3 讨 论 |
四、角膜内皮细胞凋亡的研究现状（论文参考文献）
- [1]飞秒激光辅助白内障超声乳化术治疗Fuchs角膜内皮营养不良合并白内障及高度近视白内障合并角膜散光病例的长期临床分析[D]. 范巍. 天津医科大学, 2020(06)
- [2]供体角膜植片取材及保存时间对角膜内皮细胞密度的影响研究[D]. 龙俊君. 昆明医科大学, 2020(02)
- [3]高脂血症对小鼠睑板腺和角膜内皮的影响及其作用机制的研究[D]. 卜敬华. 厦门大学, 2019(08)
- [4]EPC和Pten在角膜内皮损伤修复中的作用机制研究[D]. 张伟杰. 上海交通大学, 2019
- [5]角膜内皮失代偿动物模型建立及水通道蛋白、Smac/DIABLO的表达变化研究[D]. 吴敏. 昆明医科大学, 2018(01)
- [6]中国实用眼科杂志2012年第30卷主题词索引[J]. 中国医科大学医学信息学系. 中国实用眼科杂志, 2012(12)
- [7]诱导小鼠ES/iPS细胞向角膜内皮细胞定向分化的研究[D]. 陈苹. 上海交通大学, 2012(05)
- [8]中国实用眼科杂志2010年第28卷主题词索引[J]. 侯跃芳. 中国实用眼科杂志, 2010(12)
- [9]兔角膜内皮细胞压力仿生培养及调控机制的研究[D]. 胡晓琴. 南昌大学, 2008(01)
- [10]毛果芸香碱滴眼对兔眼角膜内皮细胞凋亡作用的影响[J]. 陶远,王红,乔智. 山东大学学报(医学版), 2007(12)