一、Studies on the resistance mechanism of a 5-fluorouracil resistant human hepatocellular carcinoma cell line Bel/5-FU（论文文献综述）
林小玲,柯维强,唐文军,闫其星[1]（2022）在《消瘤胶囊对人肝癌耐药细胞株Bel/Fu化疗敏感性的影响》文中提出目的:探讨消瘤胶囊对人肝癌耐药细胞株Bel/Fu化疗敏感性的影响。方法:将人肝癌耐药细胞株Bel/Fu随机分为空白对照组、5-氟尿嘧啶组(12.5 mg·L-1)、消瘤胶囊组(25 g·L-1)、联合用药组(12.5 mg·L-15-氟尿嘧啶+25 g·L-1消瘤胶囊),每组设置6个复孔。待细胞融合度达80%左右时,各组培养基中加入相应浓度的药物,空白对照组加入等体积细胞培养基,培养48 h。光学显微镜下观察各组细胞状态;MTT法检测细胞增殖抑制率;TUNEL法检测细胞凋亡率;RT-PCR法检测细胞GST-π mRNA、p-gp mRNA水平;Western Blot法检测细胞GST-π、p-gp、gp蛋白表达。结果:与空白对照组比较,5-氟尿嘧啶组、消瘤胶囊组和联合用药组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率显着升高（P<0.05,P<0.01）,细胞GST-π mRNA、p-gp mRNA水平显着降低（P<0.05）,细胞GST-π蛋白表达、p-gp/gp水平显着降低（P<0.05）;与5-氟尿嘧啶组比较,消瘤胶囊组和联合用药组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率显着升高（P<0.05,P<0.01）,细胞GST-π mRNA、p-gp mRNA水平显着降低（P<0.05）,细胞GST-π蛋白表达、p-gp/gp水平显着降低（P<0.05）;与消瘤胶囊组比较,联合用药组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率极显着升高（P<0.01）,细胞GST-π mRNA、p-gp mRNA水平显着降低（P<0.05）,细胞GST-π蛋白表达、p-gp/gp水平显着降低（P<0.05）。结论:消瘤胶囊可增强Bel/Fu细胞对5-氟尿嘧啶化疗敏感性,抑制细胞增殖、促进细胞凋亡,作用可能与抑制GST-π、p-gp表达有关。
余赛红,郑晓亮,蒲依依,颜冬梅,王孝举,于洁[2]（2021）在《通过核糖核苷酸还原酶M2逆转肝癌细胞对5-氟尿嘧啶耐药》文中研究说明目的:探讨核糖核苷酸还原酶M2（RRM2）在肝癌细胞对5-氟尿嘧啶（5-FU）耐药中的作用,并开发潜在的策略来提高肝癌细胞对5-FU的敏感性。方法:利用Western blot检测5-FU耐药肝癌细胞（BEL/5-FU）与非耐药肝癌细胞（BEL7402）中RRM2蛋白的表达差异;通过用RNA干扰技术下调BEL/5-FU细胞中RRM2的表达或RRM2抑制剂3-AP（Triapine）抑制RRM2活性;CCK-8和集落形成实验用于检测细胞的增殖能力;使用高内涵细胞成像系统仪检测与分析细胞凋亡。结果:BEL/5-FU细胞中RRM2的表达量是BEL7402细胞的2.5倍。RNA干扰技术能够下调BEL/5-FU细胞中RRM2的表达,并使5-FU对BEL/5-FU细胞的半数抑制浓度(IC50)下降约50%,同时细胞集落形成能力也显着减弱。3-AP与5-FU联合处理BEL/5-FU细胞,使5-FU对BEL/5-FU细胞的IC50下降约40%,细胞集落形成能力减弱,并促进5-FU导致的细胞凋亡。结论:RRM2与肝癌细胞对5-FU的耐药相关,本研究通过抑制RRM2的活性来逆转肝癌细胞对5-FU的耐药,为提高肝癌的5-FU化疗疗效提供新靶点和新思路。
王彦权[3]（2021）在《肝龙胶囊对肝细胞癌增殖及缺氧微环境的影响》文中认为目的:探讨已上市药物肝龙胶囊对肝细胞癌增殖及缺氧微环境的作用及其作用机制的影响。方法:本研究以肝癌敏感细胞株BEL-7402和Balb/c-nude小鼠为研究对象;使用肝龙胶囊、美洲大蠊粗提物脱脂膏、美洲大蠊粗提物CII-3为受试药物进行体内外双重干预,索拉非尼为本研究的阳性对照药品,观察已上市药物肝龙胶囊是否具有抗肝癌的作用,作用效果如何,是否在体内外都能发挥作用,以及作用效果是否优于CII-3、脱脂膏、索拉非尼等。体外细胞实验:（1）采用噻唑蓝比色法（MTT法）检测实验用药肝龙胶囊对实验用细胞株BEL-7402在增殖方面的影响;进一步确定肝龙胶囊在体外的最佳作用时间以及最适给药浓度;（2）克隆集落实验考察肝龙胶囊对BEL-7402细胞株抑制作用的影响;（3）观察不同给药浓度及时长下肝癌细胞在形态学方面的变化;（4）通过激光共聚焦显微镜观察经DAPI荧光染料染色后BEL-7402肝癌细胞株凋亡程度;确定肝龙胶囊抑制BEL-7402肝癌细胞株的作用;（5）使用流式细胞仪检测肝龙胶囊在诱导BEL-7402细胞株凋亡能力方面的影响;（6）使用RT-q PCR法检测BEL-7402肝癌细胞株中缺氧诱导因子HIF-1α、VEGF及VEGFR2的m RNA相对表达量,确定实验用药肝龙胶囊在缺氧微环境方面的影响;体内动物实验:（7）在Balb/c-nude小鼠中,建立BEL-7402肝癌细胞株的腋下移植瘤模型,通过检测腋下移植瘤小鼠的一般状态、免疫器官、肝肾功能、肿瘤生长抑制以及肿瘤组织中缺氧诱导因子HIF-1α、VEGF及VEGFR2的变化及肿瘤组织病理学检查等环节的影响,从体内用药确定肝龙胶囊对肝细胞癌增殖及缺氧微环境的作用及其作用机制的影响。结果:体外细胞实验:（1）在MTT法检测肝龙胶囊对BEL-7402细胞株增殖能力的影响实验中,给药在24 h、36 h以及48 h后,BEL-7402肝癌细胞株对肝龙胶囊IC5（mg/m L）数值为4.12±1.65、6.56±2.30、4.07±1.10;IC10（mg/ml）数值为7.71±2.24、14.43±4.21、15.39±5.51;IC20（mg/ml）数值为10.76±3.94、19.57±5.09、17.23±5.82;IC50（mg/ml）数值为31.46±5.46、42.57±3.20、33.16±3.77;（2）经MTT法确定肝龙胶囊的使用剂量;最终确定肝龙胶囊对BEL-7402肝癌细胞株使用的剂量为48 h的IC5、IC10、IC20的剂量,分别为:4.07、15.39和17.23 mg/ml,对应低、中、高剂量;（3）倒置显微镜下观察不同给药浓度及时间下BEL-7402肝癌细胞株形态学变化,可见给药后肝癌细胞株在数量上产生了明显的变化,呈现随着随着药物浓度增加而逐渐减少的情况,死细胞明显增多,并且癌细胞的形态也发生着明显的凋亡变化;（4）克隆集落实验表明,应用肝龙胶囊药液干预后,BEL-7402肝癌细胞株的克隆集落形成的数量有明显的下降,并随着给药剂量的增加呈现出剂量依赖的趋势;（5）激光共聚焦实验表明,肝龙胶囊可导致BEL-7402肝癌细胞株的凋亡,并且随着肝龙胶囊给药剂量的增加而呈现出依赖关系;（6）流式细胞术结果显示,肝龙胶囊能明显诱导肝癌细胞株的凋亡（P<0.05）,其中肝龙胶囊高剂量组效果仅次于效果最优的索拉非尼组,脱脂膏组与CII-3组效果相当（P>0.05）;（7）RT-q PCR结果显示,肝龙胶囊、CII-3和脱脂膏及各用药组均能抑制VEGF的表达水平,随着肝龙胶囊药液浓度的增加而呈现出用药剂量依赖的趋势,索拉非尼阳性组及肝龙胶囊高剂量组显示出较优效果（P<0.05）并作用效果相当（P>0.05）;均能抑制HIF-1α的表达水平,肝龙胶囊中、高剂量组及美洲大蠊提取物组显示出较优效果（P<0.05）并作用效果相当（P>0.05）;除索拉非尼阳性组外,均能抑制VEGFR2的表达水平,肝龙胶囊中、高剂量组及美洲大蠊提取物组显示出较优效果（P<0.05）并作用效果相当（P>0.05）;体内动物实验:（8）在Balb/c-nude小鼠成瘤的相关实验中,肝龙胶囊、CII-3和脱脂膏及各用药组均能抑制裸鼠肝癌移植瘤瘤块的生长,提高脏器指数（除脾脏指数外）,提示了肝龙胶囊的安全性;（9）在病理学HE染色观察中,肝龙胶囊给药后可看到Balb/c-nude小鼠的肿瘤细胞体积普遍呈现偏小状态,可观察到部分坏死区域,少部分出现核皱缩、破裂及消失等细胞早期凋亡的形态性特征变化,提示肝龙胶囊在体内仍能发挥良好的抗肿瘤作用;（10）RT-q PCR结果显示HIF-1α、VEGF、VEGFR2在绝大部分的给药组别中的表达量是高于敏感株组别,说明了缺氧微环境的产生与上述因子的高表达相关;综合肝龙胶囊的作用效果,其中索拉非尼组以及肝龙胶囊中剂量组具有显着的下调体内3种缺氧微环境相关蛋白水平的能力（P<0.05）;（11）免疫组织化学染色结果显示HIF-1α、VEGF、VEGFR2、ki67、CD31在绝大部分的给药组别中的表达量是高于敏感株组别,说明了缺氧微环境的产生与上述因子的（12）高表达相关;综合肝龙胶囊的作用效果,其中肝龙胶囊中剂量组及CII-3组具有显着的下调体内这几种相关蛋白水平的能力（P<0.05）;结论:（1）肝龙胶囊能有效抑制BEL-7402肝癌细胞株的增殖能力以及促进BEL-7402肝癌细胞株的凋亡能力;并且可下调BEL-7402肝癌细胞株缺氧微环境相关蛋白的表达水平;（2）肝龙胶囊能有效抑制Balb/c-nude裸小鼠体内腋下移植瘤的的生长,诱导体内肿瘤的凋亡;并且可下调Balb/c-nude裸小鼠体内腋下移植瘤中缺氧微环境相关蛋白的m RNA、蛋白的表达水平;（3）肝龙胶囊在体内外抑制肝细胞癌增殖及改善缺氧微环境的作用机制可能为下调相关蛋白HIF-1α、VEGF、VEGFR2、ki67、CD31的表达水平,减少肿瘤的血管生成,从而达到抗肿瘤的作用。（4）肝龙胶囊抗肿瘤作用优于美洲大蠊粗提物脱脂膏和CII-3。
李彩琳[4]（2021）在《基于AMPK为靶点的美洲大蠊多肽PAE2逆转肝癌多药耐药作用及机制研究》文中认为目的:基于AMPK靶点在细胞水平及动物水平上探讨美洲大蠊多肽PAE2逆转肝癌多药耐药细胞BEL-7402/5-FU的作用及其机制研究。方法:（1）以人肝癌敏感BEL-7402细胞和人肝癌多药耐药细胞BEL-7402/5-FU为试验对象,ELISA法检测美洲大蠊多肽PAE2对细胞内AMPK含量的影响。RT-PCR法检测美洲大蠊多肽PAE2对细胞中AMPK m RNA含量的影响。（2）噻唑蓝法（MTT）测定AMPK激活剂AICAR作用时间及浓度。（3）划痕试验检测BEL-7402细胞、BEL-7402/5-FU细胞的侵袭转移能力以及美洲大蠊多肽PAE2对耐药细胞侵袭转移能力的影响。（4）RT-PCR法检测美洲大蠊多肽PAE2对细胞中侵袭转移相关因子MMP2,MMP9,m TOR,AKT,4EBP1 m RNA含量的影响。（5）激光共聚焦显微镜观察多肽PAE2对细胞自噬流LC3B的影响。（6）免疫细胞化学法（ICC）检测美洲大蠊多肽PAE2对细胞自噬相关蛋白P62的影响。（7）RT-PCR检测美洲大蠊多肽PAE2对自噬相关因子ATG5,ATG7,BECLIN,PIK3C3,LC3B,P62等m RNA的影响。（8）以Balb/c-nude为试验对象,裸鼠腋下接种人肝癌BEL-7402和BEL-7402/5-FU细胞,建立裸鼠皮下移植瘤模型。给予相应受试药物14天,观察裸鼠一般状态。裸鼠每天称重,隔天用游标卡尺记录肿瘤长径和短径,计算瘤体积。（9）裸鼠取材计算脏器指数及肿瘤重量。（10）裸鼠眼球取血,进行生化指标测定。（11）H&E染色观察多肽PAE2对裸鼠皮下移植瘤肿瘤组织及肝组织病理学的影响。（12）RT-PCR法检测美洲大蠊多肽PAE2对裸鼠肿瘤组织中侵袭转移相关因子MMP2,MMP9,m TOR,AKT,4EBP1 m RNA含量的影响。（13）实时荧光定量法（RT-PCR）检测美洲大蠊多肽PAE2对侵袭转移相关因子ATG5,ATG7,BECLIN,PIK3C3,LC3B,P62等m RNA的影响。结果:（1）ELISA结果显示,肝癌耐药细胞中耐药细胞中AMPK含量明显升高;美洲大蠊多肽PAE2可显着降低耐药细胞中AMPK的含量（P<0.05）。RT-PCR结果显示耐药细胞中AMPK m RNA表达量显着升高,美洲大蠊多肽PAE2可显着降低耐药细胞中AMPK m RNA的表达（P<0.05）。（2）经MTT法确定AMPK激活剂的IC20为0.006m M即1.55ug/m L（分子量258.23）。并以IC20作用48h作为后续细胞试验中与美洲大蠊多肽PAE2不同剂量组合用。（3）划痕试验结果显示,耐药细胞比敏感细胞具有更强的划痕愈合能力即侵袭转移能力,而美洲大蠊多肽PAE2可抑制细胞24h,48h划痕试验愈合率（P<0.05）。美洲大蠊多肽PAE2和AMPK激活剂联用后可减弱美洲大蠊多肽PAE2对划痕愈合率的影响（P<0.05）。（4）RT-PCR结果显示,相比于敏感细胞,耐药细胞中侵袭转移正相关因子MMP2m RNA、MMP9 m RNA、AKT m RNA表达量显着增高（P<0.05）,肝癌耐药组中m TOR m RNA则呈现增高趋势,而4EBP1 m RNA表达无显着变化。美洲大蠊多肽PAE2可降低耐药细胞中MMP2 m RNA、MMP9 m RNA、AKT m RNA、m TOR m RNA、4EBP1 m RNA、的表达且这种影响可通过与AICAR联用后抵消,但这种抵消效果并不呈现剂量依赖性。（5）激光共聚焦结果显示,与敏感细胞相比,耐药细胞可能具有更强的自噬能力,耐药细胞给予美洲大蠊多肽PAE2后可降低细胞中自噬流的产生,美洲大蠊多肽PAE2和AICAR合用后可加强细胞的自噬。（6）免疫细胞化学法检测自噬标志性蛋白P62在细胞中的表达,免疫细胞化学法结果显示,与敏感细胞相比,耐药细胞中P62表达量相对更少（P<0.05）,而给予美洲大蠊多肽PAE2后,细胞中P62呈现高表达状态;和单独给予美洲大蠊多肽PAE2相比,美洲大蠊多肽PAE2和AICAR联用后对细胞中P62蛋白的降低效果极为显着（P<0.05）。（7）RT-PCR试验结果显示,和敏感细胞相比,耐药细胞中ATG5,ATG7,BECLIN,PIK3C3,LC3B等m RNA呈现高表达状态（P<0.05）,而P62 m RNA则呈现极低表达状态（P<0.05）;单独给予美洲大蠊多肽PAE2后可降低细胞中ATG5,ATG7,BECLIN,PIK3C3,LC3B等m RNA的表达,同时升高P62 m RNA的表达;美洲大蠊多肽PAE2合用AICAR后,可升高ATG5,ATG7,LC3B m RNA的表达,降低P62 m RNA的表达,但联用后各组对PIK3C3 m RNA,BECLIN m RNA的表达并无显着影响或略成降低趋势。（8）裸鼠腋下接种敏感细胞BEL-7402和耐药细胞BEL-7402/5-FU后状态稳定,饮食饮水正常,给药后裸鼠出现体重下降,消瘦等情况。接种敏感细胞的裸鼠皮下移植瘤更容易成瘤,且更稳定,耐药细胞接种肿瘤成瘤率更低,且易发生肿瘤转移。瘤体积计算结果显示,接种肿瘤后5天左右瘤稳定生长,化疗药及美洲大蠊多肽PAE2对肿瘤均有一定的抑制效果。（9）裸鼠取材后称量瘤种后可见,敏感组瘤重远远超过耐药组,美洲大蠊多肽PAE2和索拉非尼能明显降低肿瘤的重量,联合用药组降低肿瘤重量效果更为显着。脏器计算结果显示,皮下接种肝癌敏感细胞和耐药细胞对裸鼠的心、脾、肺、肝、肾指数均无明显影响;给予相应受试药物后索拉非尼组裸鼠肝脏指数明显上升,表明阳性药索拉非尼对裸鼠肝脏具有一定的保护作用。美洲大蠊多肽PAE2低剂量以及美洲大蠊多肽PAE2联合AICAR后裸鼠肺脏指数、肾脏指数升高,可能是由于药物对裸鼠脏器具有一定的保护作用。（10）血清生化指标检测结果显示,敏感组及耐药组谷草转氨酶含量明显升高（P<0.05）,耐药组中谷丙转氨酶明显升高（P<0.05）;单独给予美洲大蠊多肽PAE2及联合给药后裸鼠血清中肌酐尿素氮均呈现上升趋势。（11）从肿瘤组织H&E染色结果可见,与正常组裸鼠肝脏比较,接种肿瘤后裸鼠肝脏细胞排列不规则,有皱缩现象,而给予化疗药物及美洲大蠊多肽PAE2后对耐药细胞的影响并不是很显着。肝癌皮下移植瘤不规则形态,给予相应药物后肿瘤细胞均出现形态变化,细胞核缩小或核碎裂的情况,多呈不规则状,也出现成片坏死的状态。（12）裸鼠皮下移植瘤RT-PCR结果显示,与敏感组比较,耐药组肿瘤组织中侵袭转移因子MMP2、MMP9、m TOR、AKT、4EBP1等m RNA表达量均显着升高（P<0.05）;给予化疗药物索拉非尼及单独给予美洲大蠊多肽PAE2后侵袭转移因子m RNA均显着降低;但PAE2联合用AICAR后仅仅可升高MMP2、MMP9、4EBP1等m RNA的表达量,对组织中m TOR、AKT等m RNA的表达无显着影响。（13）裸鼠RT-PCR结果显示,与敏感组比较,耐药组肿瘤组织中自噬相关因子ATG5、ATG7、BECLIN、PIK3C3、LC3B、P62等m RNA表达量均显着升高（P<0.05）,给予美洲大蠊后自噬相关因子m RNA表达量均降低,美洲大蠊多肽PAE2联合AICAR后可升高肿瘤组织中ATG5、BECLIN、LC3B、P62等m RNA的表达,而对ATG7、PIK3C3等m RNA无显着影响,可降低肿瘤组织中P62 m RNA的表达。结论:（1）耐药细胞BEL-7402/5-FU中AMPK含量及AMPK m RNA呈高表达,美洲大蠊多肽PAE2可降低细胞中AMPK的含量及AMPK m RNA的表达。（2）肝癌BEL-7402/5-FU细胞比BEL-7402细胞具有更强的侵袭转移及自噬能力。（3）美洲大蠊多肽PAE2可抑制耐药细胞的侵袭转移及自噬的发生,且这种抑制作用可通过联用AICAR后部分抵消。（4）美洲大蠊多肽PAE2体外对肝癌细胞侵袭转移、自噬的作用可能是通过AMPK来实现的。自噬是个极其复杂的过程,美洲大蠊多肽PAE2可能只影响其中部分过程。（5）美洲大蠊多肽PAE2对裸鼠肿瘤具有很好的抑制性;接种肿瘤对裸鼠肝脏组织影响极为严重,但短期给予美洲大蠊多肽PAE2对这种损伤无明显效果。（6）接种肝癌肿瘤细胞对裸鼠的肝脏损伤较为明显,化疗药物索拉非尼对肝脏具有一定的保护作用;而化疗药物和多肽PAE2均会增加裸鼠的肾脏负担。（7）裸鼠皮下接种肿瘤后对肝功能具有损伤作用,美洲大蠊多肽PAE2则会增加裸鼠的肾脏负担,（8）在裸鼠皮下移植瘤模型中,美洲大蠊多肽PAE2对侵袭转移及自噬相关因子的影响呈现一定趋势但并不如在细胞中明显。
王芝蕾[5]（2020）在《咖啡因协同促进5-氟尿嘧啶的抗肝癌作用及机制研究》文中研究指明【背景】原发性肝细胞癌是全球普遍存在的恶性肿瘤,因其起病急、诊断率低,手术治疗有极大的局限性。药物治疗是肝癌晚期患者治疗的主要手段,临床各项研究表明多药物的联合治疗对肝癌具有一定的疗效。5-氟尿嘧啶是一种经典的抗癌药物,然而临床应用发现其存在耐药性和细胞毒性等问题,使得其抗癌功效有限。近年来,5-FU（5-fluorouracil）与其他药物联合使用已被广泛用于各种癌症的临床治疗。咖啡因是一种结构明确,作用广泛的甲基黄嘌呤类精神药物,近年来越来越多的报道表明,咖啡因除了传统意义上的致兴奋作用,还能降低各类癌症的风险,如胶质母细胞瘤、结肠直肠癌、肝癌等。有研究表明,咖啡因联合顺铂及阿糖胞苷不仅能显着抑制裸鼠皮下成瘤模型中胰腺肿瘤的生长,还能增加顺铂对肝癌细胞的抑增殖和促凋亡作用,该实验证实咖啡因可以通过促进肿瘤对化疗药物的敏感性而改善患者的耐受性、延长生存期。以上研究为5-FU和咖啡因的新组合提供了理论依据。因此,我们研究5-FU和咖啡因联合应用协同抗肝癌作用和机制。【目的】探讨咖啡因和5-氟尿嘧啶联合应用的抗肝癌作用及分子机制。【研究方法】1.MTS实验检测咖啡因和5-FU单独处理对肝癌细胞增殖作用的影响。2.MTS实验检测咖啡因和5-FU联合用药OD值、计算联合指数CI值,采用平板克隆实验评价咖啡因联合5-FU对肝癌细胞增殖抑制的协同效应。3.采用TUNEL/DAPI染色法评价咖啡因联合5-FU对肝癌细胞凋亡的影响。4.采用Western Blot实验检测药物作用对肝癌细胞凋亡、周期相关蛋白表达的影响。5.采用Transwell实验观察咖啡因联合5-FU对肝癌细胞侵袭、迁移的影响。6.采用DCFH-DA（2,7-Dichlorodi-hydrofluorescein diacetate）流式细胞技术评价咖啡因联合5-FU对肝癌细胞活性氧（ROS,Reactive oxygen species）生成的影响。7.采用Western Blot实验方法评价咖啡因联合5-FU对MAPK（Mitogen-activat ed protein kinase）通路的影响。8.采用裸鼠皮下成瘤方法评价咖啡因联合5-FU对体内肝癌细胞增殖、凋亡作用的影响。【结果】1.咖啡因能抑制肝癌细胞SMMC-7721、Hep3B的活性,具有剂量依赖性,随着浓度增加,抑制增殖能力增强,其IC50分别为2.211mM、2.026mM。5-FU剂量依赖性地抑制肝癌细胞SMMC-7721、Hep3B的增殖作用,其IC50分别为135.2μM、158μM。2.咖啡因（0,0.5,1mM）和5-FU（0,25,50μM）联合应用后,能抑制肝癌细胞的增殖能力,联合组克隆形成率明显减少,联合指数CI值均<1,差异有统计学意义。选择联合应用抑制率约为50%且CI值<1的1mM咖啡因和25μM 5-FU联合应用进行后续研究。3.TUNEL/DAPI双染检测结果显示,咖啡因联合5-FU可明显诱导肝癌细胞的凋亡发生,差异有统计学意义。4.Western Blot实验结果显示咖啡因联合5-FU后凋亡蛋白明显高于对照组、单药组,并且能下调周期蛋白。5.Transwell实验结果显示咖啡因联合5-FU可抑制肝癌细胞的侵袭和迁移,差异有统计学意义。6.咖啡因联合5-FU作用ROS生成明显高于对照组、单药组,差异有统计学意义。7.咖啡因联合5-FU可以影响MAPK信号通路蛋白。8.咖啡因与5-FU联合用药可抑制裸鼠皮下瘤的生长。【结论】1.咖啡因和5-FU联合使用抑制肝癌细胞的增殖作用具有剂量依赖性和时间依赖性。2.咖啡因与5-FU联合使用可通过抑制肝癌细胞的增殖、侵袭、迁移和诱导凋亡发挥协同抗肝癌作用。3.咖啡因与5-FU联合使用发挥协同抗癌作用可能与诱导ROS生成及影响MAPK信号通路有关。
贺彬楠[6]（2020）在《介孔材料在靶向GSH的癌症诊断与治疗中的应用研究》文中认为介孔材料是孔径介于2～50 nm之间的一种多孔材料,拥有较高的表面积和大孔容、孔径分布窄且可连续调节、化学和热稳定性高、表面易修饰和生物相容性好等许多优良特点。近年来,介孔纳米材料的发展和生物医学诊疗技术深度融合,尤其为癌症的诊断和治疗提供了新的途经和策略,在生物医学领域具有较大的应用前景。介孔材料为癌症的诊疗提供两方面的解决策略:其一,设计检测肿瘤标志物的生物传感器应用于癌症的早期诊断;其二,作为载体应用于药物递送系统（nanoparticulate drug delivery system,NDDS）,凭借其特异的肿瘤组织的EPR效应（enhanced permeability and retention effect）达到肿瘤组织靶向、增加癌细胞中抗肿瘤药物的浓度、减少副作用和逆转多药耐药的目的。本论文利用介孔Mn O2的氧化性来构建简单快速的谷胱甘肽（GSH）检测的生物传感器,以评价正常细胞与癌细胞中GSH水平差异;以此为根据,设计基于介孔硅的靶向癌细胞GSH响应性释放药物的NDDS逆转耐药。第一部分基于介孔Mn O2的细胞内GSH含量检测的比色传感器的研究目的:设计一种基于介孔Mn O2的氧化酶活性的比色法来检测细胞内GSH水平的生物传感器,对癌细胞和正常细胞内GSH水平进行比较,为生物医学诊断中识别癌细胞以及针对癌细胞中GSH水平设计NDDS提供依据。方法:以Mn Cl2.4H2O和（NH4）6Mo7O24.4H2O为原料,采用无机均相法合成介孔Mn O2。利用扫描电镜（SEM）、透射电镜（TEM）、Zeta电位、红外光谱（FT-IR）、X-ray粉末衍射（XRD）、氮气吸脱附（BET）和X射线光电子能谱（XPS）对介孔Mn O2进行表征。其次,将催化底物3,3’,5,5’-四甲基联苯胺（TMB）与介孔Mn O2反应来探讨介孔Mn O2作为模拟酶的催化活性,优化p H、TMB浓度、温度、反应时间对介孔Mn O2催化活性的影响。随后,对GSH抑制介孔Mn O2酶活性进行实验验证,以GSH浓度（C）对652 nm处的吸光度（A）进行线性回归去测定GSH线性范围及检测限。用GSH选择性实验来排除细胞内其它物质干扰。用反复冻融法处理肝癌细胞Bel-7402和人脐静脉内皮细胞HUVEC得到细胞裂解液,检测其GSH的含量,将肿瘤细胞和正常细胞GSH含量作比较。最后,采用Bel-7402细胞作为模型,以标准加入法进行回收率试验,评测该方法在复杂的生物样品分析中的可行性。结果:介孔Mn O2呈球形,直径50 nm左右,孔径分布在3～4 nm左右,呈介孔模式。晶态为α-Mn O2。FT-IR、Zeta电位和XPS均表明介孔Mn O2的成功合成。介孔Mn O2催化氧化TMB的最佳反应条件是:p H=4的Na Ac缓冲液、200μM TMB、在25℃下反应5 min。GSH可以有效抑制氧化酶底物TMB氧化生成蓝色产物ox TMB。在最优条件下,该GSH生物传感器线性范围为0.1～10μM,检测限为55 n M。选择性检测显示,细胞内其它物质对该方法的影响可以忽略,该方法具有特异性。通过检测细胞内GSH浓度,得出肿瘤细胞GSH水平比正常细胞高,为以简单的方式识别癌细胞提供了依据。结论:基于介孔Mn O2氧化酶活性的GSH传感器具有简便、灵活等优点,其检测限和检测范围较其它基于纳米材料比色法的生物传感器具有优势。采用基于介孔Mn O2新型GSH检测的生物传感器,应用简单的紫外比色法验证了肿瘤细胞中的GSH水平高于正常细胞,为癌症诊断、药物运输及其它生物医学应用开拓了思路。第二部分:基于介孔硅的双载药纳米平台的构建及逆转癌细胞多药耐药的研究目的:基于氨基化介孔硅（MSN）材料,设计GSH和p H响应、叶酸靶向、同时负载顺铂（CDDP）和5-氟尿嘧啶（5-FU）的双载药NDDS抗肿瘤平台,以期达到肿瘤细胞靶向性、肿瘤细胞微环境响应性释放药物、CDDP和5-FU贯序释放的目的,逆转细胞多药耐药。方法:采用溶剂凝胶法合成氨基修饰的MSN（MSN-NH2）。利用氧化和缩合反应合成CDDP前药单羧酸链的氧化顺铂（MDDP）和叶酸修饰的聚乙二醇（PEG-FA）。通过酰胺缩合将二者修饰在MSN-NH2外层,孔内部包封5-FU,制备得MDDP-MSN（5-FU）@PEG-FA双载药NDDS。应用TEM、小角X射线衍射（SAXS）、BET、Zeta电位、热重分析（TGA）、FT-IR、紫外可见光谱（UV-Vis）、核磁共振氢谱（1H-NMR）、电喷雾电离质谱（ESI-MS）、液质联用（HPLC-MS）等表征手段对材料和化合物进行表征和验证。5-FU载药量由UV-Vis法测定,MDDP含量由电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）测定。采用透析法评价和模拟NDDS的GSH和PH依赖性的药物体外释放。以人肝癌细胞敏感株Bel-7402和耐药株Bel-7402/5-FU为模型,采用MTT法进行细胞毒性评价,荧光显微镜观测细胞摄取情况。结果:MSN纳米颗粒的粒径为140 nm,球形,比表面积为813 m2/g,孔径分布在2.28 nm左右。ESI-MS和1H-NMR验证前药MDDP合成成功。HPLC-MS验证表明MDDP在GSH存在下被有效的还原成活性CDDP。1H-NMR和UV-Vis分析均提示PEG-FA成功合成。紫外测定5-FU载药量为78.26μg/mg,ICP-MS测定CDDP载药量为5.83μg/mg。在p H=5和GSH的作用下,CDDP 24 h的模拟释药量3.00μg/mg。采用Bel-7402细胞作为模型,将合成的MSN（Rhb）@PEG和MSN（Rhb）@PEG-FA样品进行细胞摄取并用荧光显微镜观察,显示材料可快速被癌细胞吞摄,MSN（Rhb）@PEG-FA样品因叶酸靶向癌细胞表面的叶酸受体作用,显示了更强的内吞作用。MSN@PEG纳米颗粒的细胞毒性结果显示具有良好的生物相容性。六组样品5-FU、CDDP、5-FU+CDDP、MSN（5-FU）、MDDP-MSN（5-FU）和MDDP-MSN（5-FU）@PEG-FA的细胞毒性实验结果显示,5-FU和CDDP联用可对抗细胞耐药性及增强细胞毒性,共载于MDDP-MSN（5-FU）@PEG-FA体系中的5-FU和CDDP相对于自由的二者的混合物耐药指数更低。结论:基于介孔硅材料设计了5-FU和CDDP的双载药NDDS,该NDDS进入肿瘤细胞后,外层的顺铂前药在肿瘤细胞高GSH浓度下被还原成顺铂,随着外层的顺铂释放,内孔中的5-FU得以缓慢释放,这种5-FU联合小剂量顺铂的贯序给药模式对Bel-7402/5-FU耐药株表现出较高的抑制率,具有显着的逆转耐药作用。介孔硅材料以其介孔良好的载药功能和外层可修饰性为基于肿瘤治疗的NDDS的设计提供了多种创新的解决策略。
李建旺[7]（2019）在《Six2介导E-cadherin导致肝癌细胞5-氟尿嘧啶耐药的机制研究》文中研究指明背景与目的:肝细胞癌（HCC）是全球恶性肿瘤中最为常见之一,也是全球第二大癌症死亡原因,每年约有745,500人死亡。肝癌侵袭性强,复发率高,预后极差。肝癌易发生化疗耐药,常规化疗在晚期肝癌患者中疗效不佳。化疗耐药已然成为肝癌治疗失败的主因之一。因此,能否揭开肝癌化疗耐药的分子机制的谜团,从而有效解决化疗的耐药困境,已成为肝癌治疗成功与否的关键。Six2是Six同源框家族成员之一,参与间充质-上皮转化,参与肾脏的发育过程,起到促进肾间质细胞增殖,抑制细胞凋亡的作用。Six2缺乏导致间质祖细胞缺失、分化失调和严重肾发育不全。此外,Six2可以在哺乳动物肾脏发育过程中标记和调节多能自我更新的肾单位祖细胞。既往有研究表明,Six2促进乳腺癌的转移。KM plotter在线分析显示肝癌患者Six2表达水平与其总生存负相关。由于作用于胚胎发生的基因表达程序和细胞过程常在肿瘤中再现,尤其肿瘤干细胞可能导致细胞转移。而上皮-间充质转换（EMT）过程可能赋予了肿瘤细胞干性特征。肿瘤细胞干性和EMT与肿瘤化疗耐药及转移密切相关。因此,我们推测Six2基因的异常表达与肝癌细胞EMT的发生及干细胞表型的获得相关。E-cadherin是EMT的上皮标记物,作为肿瘤抑制基因参与肿瘤的转移和细胞干性的调节。然而,E-cadherin在肝癌中的调控机制仍不甚明了。并且,Six2在肝癌化疗敏感性中的作用也尚不清楚。为了明确Six2在肝癌的预后生存及化疗耐药中是否起作用及其可能的机制?本课题做了如下研究:材料与方法:1、采用免疫组织化学法、qRT-PCR和Western blot等技术检测Six2蛋白在肝细胞癌组织、配对癌旁正常组织以及肝癌细胞系中的表达情况,基于利用KM plotter在线工具对364例肝癌患者进行Six2表达程度与总生存率的相关性分析。2、应用干扰技术有效敲低Six2表达,利用5-氟尿嘧啶（5-FU）诱导肝癌细胞凋亡,采用CCK8法和细胞凋亡检测Six2干扰与否对经5-FU处理后肝癌细胞活性和细胞凋亡的影响;并采用Western blot技术检测凋亡相关蛋白的表达。并进一步采用Spheroid成球实验、ALDH活性检测观察Six2干扰与否对肝癌细胞“干性”特征的影响,利用qRT-PCR技术检测Six2干扰与否对肝癌细胞中干细胞标志物基因的影响。3、建立过表达Six2和E-cadherin肝癌细胞,利用qRT-PCR和Western blot技术检测肝癌细胞中Six2不同表达对应E-cadherin的表达情况。利用5-FU诱导肝癌细胞凋亡,利用CCK8和Western blot技术分别检测细胞活性和凋亡相关蛋白的表达来验证E-cadherin表达与Six2介导的5-FU敏感性的关系。并进一步采用Spheroid成球实验、ALDH活性检测和干细胞标志物基因mRNA水平的检测验证E-cadherin表达与Six2介导肝癌细胞干性特征的关系。4、利用qRT-PCR和Western blot技术检测DNA甲基转移酶抑制剂地西他滨5 uM处理Six2过表达与否的肝癌细胞中E-cadherin表达情况,采用甲基化特异性PCR检测Six2过表达与否的肝癌细胞中E-cadherin基因启动子CpG岛甲基化状态,以及L02,HepG2和Huh7细胞株中E-cadherin甲基化水平的差异,qRT-PCR验证肝癌组织中Six2和E-cadherin表达相关性。结果:1、HCC组织和细胞中Six2表达增高且与预后不良相关41例肝癌组织中Six2蛋白阳性表达率达39.0%,41例配对癌旁正常组织中Six2蛋白阳性表达率达12.2%（P<0.01）;肝癌组织中Six2的mRNA和蛋白水平均高于正常组织（P<0.01）,Six2的表达量与AFP值相关,而与年龄、性别、HBsAG、肿瘤大小,分化程度及临床分期无关。在肝癌细胞中Six2的表达均高于正常肝细胞（L02细胞株）,尤其在HepG2和Huh7细胞株中（P<0.01）。KM分析显示,高表达Six2的HCC患者为45.1%（164/364）,总体生存率明显低于低表达的HCC患者,有统计学差异（P<0.05）。2、Six2对肝癌细胞5-FU敏感性的负调控作用并增强肝癌细胞干性特征肝癌细胞株经有效敲低Six2表达后,与对照组比较,Six2-shRNA处理可增加5-FU诱导产生的凋亡率,使细胞活性下降（P<0.01）;并使得细胞中凋亡相关蛋白cleaved caspase-3和cleaved PARP的蛋白表达增高。有效敲低Six2与5-FU具有协同作用。Six2敲低可使肝癌细胞Spheroid成球能力、ALDH1活性均显着下降（P<0.01）;干细胞标志物蛋白Nanog和ALDH1表达下调。3、Six2通过调节E-cadherin表达控制肝癌细胞对5-FU敏感性和干性特征在Six2过表达或敲低的细胞中,E-cadherin的表达分别降低或增加（P<0.01）,在Six2过表达的细胞中转染E-cadherin过表达病毒,E-cadherin的表达恢复,我们观察到E-cadherin的重新表达挽救了 Six2过表达细胞对5-FU的敏感性（P<0.01）,足以恢复Six2过表达细胞中5-FU诱导的细胞凋亡。此外,恢复E-cadherin的表达减弱了 Six2过表达介导的肝癌干细胞的上调,其特征是干细胞标记物（ALDH 1和Nanog）表达减少,细胞球大小和数量减少,ALDH 1活性降低（均P<0.01）。4、Six2通过激活E-cadherin启动子甲基化抑制其表达使用5 μM甲基转移酶抑制剂Decitabine处理Six2过表达的肝癌细胞后,E-cadherin表达部分恢复（P<0.01）,而对照组细胞E-cadherin表达无进一步增加（P>0.05）。E-cadherin启动子甲基化分析表明,Six2过表达的肝癌细胞E-cadherin CpG岛甲基化显着增加（P<0.01）,表达高水平Six2和低水平E-cadherin的肝癌细胞呈现出高表达的E-cadherin启动子甲基化。而表达低水平的Six2和高水平的E-cadherin的正常肝细胞L02则相应地则呈现低表达的E-cadherin启动子甲基化（P<0.01）。相对应的,41例肝癌组织中Six2和E-cadherin的表达呈负相关（R2=0.4167,P<0.01）。结论:1、Six2可能参与HCC的进展;2、Six2可通过增强肝癌细胞的干细胞来降低肝癌细胞的化疗敏感性;3、Six2通过调节E-cadherin的表达,调节5-FU的敏感性和肝癌细胞干性;4、Six2可通过改变E-cadherin启动子的甲基化状态来抑制其表达。
鲁倩倩[8]（2019）在《褪黑素对肝癌细胞5-氟尿嘧啶耐药的影响及其机制研究》文中提出研究背景原发性肝癌发生率在肿瘤中排第六,肿瘤相关死亡率中排第四,原发性肝癌中大部分的类型是肝细胞肝癌（HCC）。肝癌患者的急剧增加以及临床上肝癌患者的复发已经产生世界范围内的大流行。迄今为止,很少有有效的化疗药物治疗这种高度恶性的肿瘤,尤其是近年来肝癌细胞对化疗和放射治疗产生抵抗,肝癌给全世界都带来巨大的健康以及经济的负担。虽然5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）是治疗晚期HCC的首选药物之一,但它同样也存在各种获得性和内在性药物抵抗。褪黑素（melatonin,MLT）主要由人的松果体分泌,进入人体循环,有调节昼夜节律的活性。过去二十年中,越来越多的学者发现褪黑素的多功能潜能,如抗炎、抗肿瘤、抗氧化活性、内分泌节律调节作用等。在文献中报道褪黑素通过抗增殖和促凋亡作用显示出抗肿瘤作用。此外,据报道,褪黑素联合化疗药物可增强该种化疗诱导的细胞凋亡。大量临床样本和体外研究的数据表明,异常激活的PI3K/AKT通路与肿瘤的5-FU药物化疗耐药相关,而褪黑素与该通路亦具有相关性;此外该通路的抑制剂与5-FU共同作用在肝癌的治疗中具有协同作用。在我们之前的研究中,褪黑素也被发现可以增加阿霉素在肝癌细胞中的敏感性。这些研究证据提示我们褪黑素可能会增强肝癌细胞对5-FU的敏感性,将会为晚期HCC患者带来巨大的益处。肝细胞肝癌通常对抗肿瘤药物不敏感,肝细胞肝癌患者应用化疗药物治疗会迅速出现获得性耐药。多药耐药（MDR）是一种现象,是指暴露于一种药物的细胞对具有不同结构和功能的其他药物交叉耐药的现象。MDR的主要机制之一是肿瘤细胞主动泵出化疗药物的能力增强,导致细胞内化疗药物积累量低于有效水平剂量。P-糖蛋白（P-gp）隶属于ATP结合盒（ABC）蛋白超家族,并且是MDR表型中最具有代表性的分子,是介导MDR的最典型的外排泵之一。P-gp抑制剂可通过抑制细胞内药物泵出以增加细胞内药物积累浓度,从而改善细胞对化疗药物的反应并改善患者的预后。尽管在早期研究中取得了一些成功,但大多数包括P-gp抑制剂的临床试验,甚至是第三代抑制剂的临床试验,都没有证实其临床效益。考虑到化疗耐药性对肝癌的进展至关重要,因此寻找能够替代P-gp抑制剂的药物是重要且紧迫的。目的通过将5-FU、褪黑素以及5-FU联合褪黑素作用于BEL-7402/5-FU细胞,观察褪黑素是否具有逆转5-FU耐药的作用,了解褪黑素对人肝癌细胞增殖、凋亡以及P-gp表达的影响以及可能的机制。通过对PI3K/AKT信号途径的研究,进一步探讨褪黑素逆转BEL-7402/5-FU肝癌细胞5-FU抵抗性的可能的机制。方法（1）使用12个浓度梯度的（0-3200 ug/ml）的5-FU作用于人肝癌细胞BEL-7402以及人耐药肝癌细胞BEL-7402/5-FU细胞,MTT法检测各个浓度对细胞的抑制率,计算用5-FU化疗药物处理的两种肝癌细胞的IC50值和耐药指数,明确BEL-7402/5-FU细胞是否对5-FU存在耐药性;Western-Blot法检测两种细胞PI3K/AKT通路主要蛋白以及P-gp的表达情况。（2）8个浓度（0-2mM）的褪黑素作用于BEL-7402/5-FU细胞以及人正常肝细胞L02,MTT法检测其对细胞的抑制率,并筛选出褪黑素的无毒剂量用于后续研究。（3）BEL-7402/5-FU细胞与褪黑素、5-FU单药或联合培养48h后,MTT法计算IC50、逆转倍数;FCS检测各组细胞凋亡率的高低;克隆形成实验检测细胞增殖;Western-Blot法检测PI3K/AKT通路主要蛋白以及P-gp的表达情况。（4）BEL-7402/5-FU细胞分别与褪黑素,5-FU,5-FU联合褪黑素或5-FU联合维拉帕米作用48h后,ICC法观察分析细胞内P-gp的表达变化情况;流式细胞仪检测Rh123外排情况。（5）加入PI3K蛋白抑制剂LY294002,流式细胞仪检测5-FU,褪黑素、5-FU联合褪黑素或褪黑素、5-FU联合LY294002对细胞凋亡率的影响;Western-Blot法检测PI3K/AKT通路蛋白以及P-gp的表达情况。结果（1）MTT实验显示BEL-7402/5-FU的耐药性是BEL-7402的280倍。Western-Blot实验显示BEL-7402/5-FU细胞P-gp以及PI3K/AKT通路的主要蛋白高表达。（2）随着时间和剂量的增加,褪黑素对肝癌耐药BEL-7402/5-FU细胞的抑制不断加强;MTT法计算出褪黑素对正常肝细胞L02的IC10值为0.84mM,小于该剂量即为无毒剂量。（3）5-FU单独作用于BEL-7402/5-FU细胞的IC50值为1455.59 ug/mL,与褪黑素（0.5mM）联合使用时其IC50值为328.23 ug/mL,逆转倍数为4.33倍。（4）褪黑素联合5-FU作用于BEL-7402/5-FU细胞,可显着增加5-FU诱导的凋亡;减少克隆形成;Western-Blot显示5-FU处理细胞后会显着增加P-gp、PI3K、p-AKT的表达,而褪黑素加入后可以中和这种增加,降低其表达。（5）PI3K抑制剂LY294002使用后,FCS检测结果表明,添加抑制剂后可以进一步地提高细胞凋亡率,降低P-gp、PI3K、p-AKT表达水平以及增强PTEN蛋白的表达。结论（1）BEL-7402/5-FU细胞是研究P-gp介导的肝细胞肝癌5-FU耐药的较为合适的细胞系。（2）褪黑素（0.5mM）可以逆转BEL-7402/5-FU肝癌细胞对5-FU的抵抗性。（3）褪黑素联合5-FU可以增加BEL-7402/5-FU细胞的凋亡率,减少其克隆形成能力。（4）褪黑素通过抑制PI3K/AKT途径,从而逆转P-gp介导的BEL-7402/5-FU细胞5-FU耐药。
陈涛[9]（2018）在《阿帕替尼对人肝癌耐药细胞株BEL-7402/5-FU的作用及其作用机制》文中认为目的:探讨阿帕替尼对人肝癌多药耐药细胞株BEL-7402/5-FU的作用及其可能的作用机制。方法:（1）采用氟尿嘧啶浓度梯度递增法诱导建立人肝癌耐药细胞株BEL-7402/5-FU,并观察人肝癌细胞株BEL-7402与人肝癌耐药细胞株BEL-7402/5-FU形态的区别。（2）选取不同浓度的氟尿嘧啶、阿霉素、顺铂作用于BEL-7402及BEL-7402/5-FU细胞24h、48h及72h,MTT法测定上述药物对两种细胞的增殖抑制率,计算药物作用于细胞48h后的半数抑制量值(IC50值)及耐药株细胞对药物的耐药指数（RI）;MTT法检测阿帕替尼作用于耐药株细胞24h、48h、72h后细胞增殖抑制率的改变,并检测阿帕替尼作用于BEL-7402细胞48h的增殖抑制率,计算其IC50值及BEL-7402/5-FU细胞对阿帕替尼的耐药指数;选取氟尿嘧啶、阿霉素及顺铂对BEL-7402/5-FU细胞的IC50值,并与阿帕替尼的IC50值联合作用于BEL-7402/5-FU细胞24h、48h、72h,MTT法检测联合用药对细胞的增殖抑制率。（3）选取阿帕替尼的IC50值作用于BEL-7402/5-FU细胞48h,观察细胞形态变化。（4）Transwell实验检测不同浓度的阿帕替尼对BEL-7402/5-FU细胞迁移及侵袭能力的影响;（5）不同浓度的阿帕替尼作用于BEL-7402/5-FU细胞48h后,使用流式细胞仪（FCM）检测药物对细胞凋亡率及细胞周期改变的影响;（6）蛋白免疫印迹法（Western blot）检测BEL-7402细胞和BEL-7402/5-FU细胞耐药蛋白MRP1、BCRP及P-gp表达的差异,并检测不同浓度的阿帕替尼干预BEL-7402/5-FU细胞48h后,Bcl-2、Bax、Caspase-3、MRP1、BCRP及P-gp蛋白量表达的改变。结果:（1）BEL-7402/5-FU细胞与BEL-7402细胞形态有略微差别,BEL-7402/5-FU细胞呈长轴略短的梭形或三角形;（2）MTT法显示BEL-7402/5-FU细胞对氟尿嘧啶、阿霉素、顺铂都表现出了不同程度的耐药性,其对氟尿嘧啶的耐药指数最高,约为10.715±1.363,而BEL-7402/5-FU细胞对阿帕替尼未表现出明显的耐药性;氟尿嘧啶（40ug/ml、80ug/ml、160ug/ml、320ug/ml、640ug/ml）、阿霉素（0.5ug/ml、1ug/ml、2ug/ml、4ug/ml、8ug/ml）、顺铂（0.5ug/ml、1ug/ml、2ug/ml、4ug/ml、8ug/ml）、阿帕替尼（2.5ug/ml、5ug/ml、10ug/ml、20ug/ml、25ug/ml）分别作用于BEL-7402/5-FU细胞24h、48h、72h均表现出了不同程度的细胞增殖抑制作用（P<0.05）,在上述浓度范围内及72h内有量-效及时-效依赖关系;MTT结果显示,氟尿嘧啶、阿霉素、顺铂与阿帕替尼联合作用细胞24h、48h、72h后,联合用药后表现出了明显的协同增强效应（P<0.05）,并呈时-效及量-效依赖关系。（3）20ug/ml的阿帕替尼作用于BEL-7402/5-FU细胞48h后细胞形态发生了改变:细胞数量减少,细胞形态不规则,细胞碎片增多;（4）Transwell实验结果显示阿帕替尼对BEL-7402/5-FU细胞的迁移及侵袭能力都有所抑制,且随着浓度的增加阿帕替尼对BEL-7402/5-FU细胞的迁移及侵袭能力抑制作用明显增强（P<0.05）;（5）流式细胞凋亡实验显示,与对照组相比实验组细胞凋亡率增加（P<0.05）,且随着阿帕替尼浓度的增加BEL-7402/5-FU细胞凋亡率增加（P<0.05）;流式细胞周期实验显示,阿帕替尼引起BEL-7402/5-FU细胞处于G1期比例明显增高（P<0.05）,且随着阿帕替尼的浓度增加处于G1期细胞比例明显增多（P<0.05）;（6）蛋白免疫印迹法结果显示:耐药株与敏感株细胞相比MRP1、BCRP及P-gp蛋白量表达增加（P<0.05）,阿帕替尼作用于耐药株细胞48h后,随着阿帕替尼浓度的增加MRP1、BCRP、P-gp及Bcl-2蛋白表达降低（P<0.05）,而Bax、Caspase-3蛋白量表达增加（P<0.05）。结论:通过氟尿嘧啶浓度梯度递增法建立的耐药细胞株,对多种化疗药物表现出了高度耐药和多药耐药性,而其对阿帕替尼未表现出明显的耐药性;阿帕替尼具有抑制肝癌细胞生长的作用,并且与多种化疗药物联合使用,具有协同增强作用;阿帕替尼能抑制耐药株细胞的迁移及侵袭能力,诱导细胞凋亡,其机制可能与上调Bax、Caspase-3蛋白,下调Bcl-2蛋白以及逆转耐药蛋白MRP1、BCRP及P-gp的表达有关。
王瑶,李婷,乔婷婷,刘俊勇,沈琦,彭芳[10]（2017）在《美洲大蠊提取物逆转BEL-7402/5-Fu多药耐药性的作用及机制研究》文中研究指明目的探讨美洲大蠊提取物CⅡ-3和脱脂膏逆转耐5-氟尿嘧啶人肝癌细胞BEL-7402（BEL-7402/5-Fu）细胞多药耐药性的作用及可能的作用机制。方法通过测定耐5-氟尿嘧啶人肝癌细胞BEL-7402细胞生长曲线和细胞凋亡率,以及P-糖蛋白（P-gp）的摄取情况,探索美洲大蠊提取物体外逆转耐5-氟尿嘧啶人肝癌细胞BEL-7402的作用。结果 CⅡ-3和脱脂膏对耐5-氟尿嘧啶人肝癌细胞BEL-7402的抑制率、逆转倍数及细胞凋亡率随浓度增加逐渐增大,且差异无统计学意义,说明CⅡ-3与脱脂膏对耐药细胞的逆转效果及诱导凋亡作用相当。CⅡ-3和脱脂膏能减弱P-糖蛋白的外排功能,且脱脂膏较CⅡ-3作用强,细胞内药物蓄积量较多。结论美洲大蠊提取物CⅡ-3和脱脂膏能够有效逆转人肝癌耐5-氟尿嘧啶人肝癌细胞BEL-7402细胞的多药耐药性,其逆转作用机制主要通过诱导耐药细胞凋亡和抑制P-糖蛋白蛋白的表达。
二、Studies on the resistance mechanism of a 5-fluorouracil resistant human hepatocellular carcinoma cell line Bel/5-FU（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、Studies on the resistance mechanism of a 5-fluorouracil resistant human hepatocellular carcinoma cell line Bel/5-FU（论文提纲范文）
（1）消瘤胶囊对人肝癌耐药细胞株Bel/Fu化疗敏感性的影响（论文提纲范文）
| 1 材料 |
| 1.1 细胞 |
| 1.2 药物与试剂 |
| 1.3 仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 细胞培养 |
| 2.2 观察细胞形态 |
| 2.3 MTT法检测细胞增殖抑制率 |
| 2.4 检测细胞凋亡率 |
| 2.5 RT-PCR法检测细胞GST-π mRNA、p-gpmRNA水平 |
| 2.6 Western Blot法检测细胞GST-π、p-gp、gp蛋白表达 |
| 2.7 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 对人肝癌耐药细胞株Bel/Fu形态学的影响 |
| 3.2 对细胞增殖抑制率的影响 |
| 3.3 对细胞凋亡率的影响 |
| 3.4 对细胞GST-π mRNA、p-gp mRNA水平的影响 |
| 3.5 对细胞GST-π、p-gp、gp蛋白表达的影响 |
| 4 讨论 |
（2）通过核糖核苷酸还原酶M2逆转肝癌细胞对5-氟尿嘧啶耐药（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 细胞株 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 仪器 |
| 1.4 细胞培养 |
| 1.5 细胞转染 |
| 1.6 Western blot检测RRM2蛋白表达 |
| 1.7 CCK-8检测细胞存活率 |
| 1.8 细胞克隆形成实验 |
| 1.9 高内涵成像系统检测细胞凋亡 |
| 1.10 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 RRM2蛋白在BEL/5-FU细胞中高表达 |
| 2.2 RRM2的下调降低了BEL/5-FU细胞对5-FU的耐药性 |
| 2.3 RRM2对BEL/5-FU细胞集落形成能力的影响 |
| 2.4 RRM2的抑制剂3-AP增强BEL/5-FU细胞对5-FU的敏感性 |
| 2.5 3-AP与5-FU联合使用减弱肝癌细胞集落形成能力 |
| 2.6 3-AP与5-FU联合使用促进肝癌细胞凋亡 |
| 3 讨论 |
（3）肝龙胶囊对肝细胞癌增殖及缺氧微环境的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略表 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验细胞株及实验动物 |
| 2.1.2 实验药品、样品来源及其制备 |
| 2.1.3 主要试剂及溶液 |
| 2.1.4 主要仪器及设备 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 试剂配制 |
| 2.2.2 肿瘤细胞培养 |
| 2.2.3 实验分组 |
| 2.2.4 体外MTT法检测肝龙胶囊对BEL-7402肝癌细胞株增殖能力的影响 |
| 2.2.5 体外肝龙胶囊对BEL-7402肝癌细胞株生长形态的影响 |
| 2.2.6 体外克隆集落形成实验检测肝龙胶囊干预后BEL-7402肝癌细胞株的克隆能力 |
| 2.2.7 体外激光共聚焦显微镜下观察肝龙胶囊对BEL-7402肝癌细胞株凋亡能力的影响 |
| 2.2.8 体外流式细胞术检测肝龙胶囊对BEL-7402肝癌细胞株凋亡能力的影响 |
| 2.2.9 体外RT-PCR检测肝龙胶囊对缺氧微环境相关蛋白HIF-1α、VEGF、VEGFR2 mRNA表达水平的影响 |
| 2.2.10 体内构建Balb/c-nude裸小鼠肝癌腋下移植瘤模型 |
| 2.2.11 Balb/c-nude裸小鼠瘤块及脏器取材 |
| 2.2.12 Balb/c-nude裸小鼠的抑瘤率及脏器指数计算 |
| 2.2.13 Balb/c-nude裸小鼠的病理学HE染色 |
| 2.2.14 Balb/c-nude裸小鼠的肌酐清除率检测 |
| 2.2.15 Balb/c-nude裸小鼠的尿素氮生成量检测 |
| 2.2.16 Balb/c-nude裸小鼠的转氨酶的检测 |
| 2.2.17 Balb/c-nude裸小鼠的超氧化物歧化酶(SOD)活性的检测 |
| 2.2.18 RT-qRCP检测肝龙胶囊对Balb/c-nude裸小鼠腋下移植瘤缺氧微环境相关蛋白HIF-1α、VEGF、VEGFR2mRNA表达水平的影响 |
| 2.2.19 免疫组织化学染色法检测肝龙胶囊对Balb/c-nude裸小鼠腋下移植瘤缺氧微环境相关蛋白表达水平的影响 |
| 2.2.20 统计学处理 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 肝龙胶囊对BEL-7402肝癌细胞株抑制率的检测 |
| 3.2 肝龙胶囊对BEL-7402肝癌细胞株生长形态的影响 |
| 3.3 肝龙胶囊对BEL-7402肝癌细胞克隆集落生成能力的影响 |
| 3.4 肝龙胶囊对BEL-7402肝癌细胞株凋亡能力的检测 |
| 3.5 流式细胞术检测肝龙胶囊对肝癌细胞株凋亡的影响 |
| 3.6 RT-PCR检测BEL-7402肝癌细胞中缺氧微环境蛋白HIF-1α、VEGF及VEGFR2 mRNA水平的变化 |
| 3.7 肝龙胶囊对Balb/c-nude裸小鼠腋下移植瘤生长能力的影响 |
| 3.8 肝龙胶囊对Balb/c-nude裸小鼠腋下移植瘤肿瘤质量的影响 |
| 3.9 肝龙胶囊对Balb/c-nude裸小鼠腋下移植瘤病理学HE染色 |
| 3.10 肝龙胶囊对Balb/c-nude裸小鼠脏器指数的影响 |
| 3.11 肝龙胶囊对Balb/c-nude裸小鼠肌酐生成的影响 |
| 3.12 肝龙胶囊对Balb/c-nude裸小鼠尿素氮含量的影响 |
| 3.13 肝龙胶囊对Balb/c-nude裸小鼠超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响 |
| 3.14 肝龙胶囊对Balb/c-nude裸小鼠转氨酶含量的影响 |
| 3.15 肝龙胶囊对Balb/c-nude裸小鼠腋下移植瘤缺氧微环境相关蛋白mRNA表达水平的影响 |
| 3.16 肝龙胶囊对Balb/c-nude裸小鼠腋下移植瘤缺氧微环境相关蛋白表达水平的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 6 参考文献 |
| 7 致谢 |
| 8 攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 |
| 附录 |
（4）基于AMPK为靶点的美洲大蠊多肽PAE2逆转肝癌多药耐药作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一章 美洲大蠊多肽PAE_2对细胞侵袭转移及自噬影响体外研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 细胞株及实验动物 |
| 1.2 实验药品、样品来源及其制备 |
| 1.3 试剂和溶液 |
| 1.4 主要仪器与设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 肿瘤细胞培养 |
| 2.2 试验试剂配制 |
| 2.3 试验分组 |
| 2.4 AMPK生物信息学分析 |
| 2.5 美洲大蠊多肽PAE_2对细胞中AMPK的影响 |
| 2.6 AMPK激活剂AICAR作用时间及浓度测定 |
| 2.7 划痕试验检测美洲大蠊多肽PAE_2对细胞侵袭转移的影响7 |
| 2.8 RT-qPCR法检测美洲大蠊多肽PAE_2对侵袭转移相关mRNA的影响 |
| 2.8.1 美洲大蠊多肽PAE_2对侵袭转移相关mRNA的影响 |
| 2.8.2 侵袭转移相关因子引物验证 |
| 2.9 激光共聚焦显微镜观察美洲大蠊多肽PAE_2对细胞中LC3蛋白的影响9 |
| 2.10 免疫细胞化学法检测美洲大蠊多肽PAE_2对细胞中P62蛋白的影响10 |
| 2.11 美洲大蠊多肽PAE_2对自噬相关mRNA的影响 |
| 2.11.1 美洲大蠊多肽PAE_2对自噬相关mRNA的影响 |
| 2.11.2 自噬相关因子引物验证 |
| 2.12 统计学处理 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 肝癌细胞中AMPK的表达 |
| 3.2 美洲大蠊多肽PAE_2对细胞内AMPK含量的影响 |
| 3.3 AMPK激活剂AICAR作用时间及作用浓度测定 |
| 3.4 划痕试验检测美洲大蠊多肽PAE_2对细胞划痕愈合率的影响 |
| 3.5 美洲大蠊多肽PAE_2对细胞侵袭转移相关因子的影响 |
| 3.5.1 RT-PCR检测美洲大蠊多肽PAE_2对细胞侵袭转移相关因子的影响 |
| 3.5.2 RT-PCR检测侵袭转移相关因子引物特异性验证 |
| 3.6 .激光共聚焦观察美洲大蠊多肽PAE_2对细胞自噬的影响(LC3 蛋白的形成).. |
| 3.7 免疫细胞化学法化观察美洲大蠊多肽PAE_2对细胞自噬的影响(P62 蛋白) |
| 3.8 美洲大蠊多肽PAE_2对细胞自噬相关因子mRNA表达的影响 |
| 3.8.1 美洲大蠊多肽PAE_2对细胞自噬相关因子mRNA表达的影响 |
| 3.8.2 自噬相关因子mRNA引物验证 |
| 第二章 美洲大蠊多肽PAE_2对裸鼠皮下移植瘤侵袭转移及自噬影响体内研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药品、实验试剂 |
| 1.3 主要仪器与设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 肿瘤细胞培养 |
| 2.2 试验试剂配制 |
| 2.3 试验分组 |
| 2.4 Balb/c-nude裸鼠皮下移植瘤模型建立 |
| 2.5 美洲大蠊多肽PAE_2对裸鼠的影响 |
| 2.6 美洲大蠊多肽PAE_2对裸鼠生化指标的影响 |
| 2.7 HE染色法检测美洲大蠊多肽PAE_2对移植瘤裸鼠肿瘤组织、肝脏组织病理影响 |
| 2.8 美洲大蠊多肽PAE_2对移植瘤裸裸鼠侵袭转移相关因子mRNA的影响 |
| 2.8.1 美洲大蠊多肽PAE_2对移植瘤裸裸鼠侵袭转移相关因子mRNA的影响 |
| 2.8.2 移植瘤裸裸鼠肿瘤组织中侵袭转移相关因子引物验证 |
| 2.9 美洲大蠊多肽PAE_2对移植瘤裸裸鼠侵袭自噬 |
| 2.9.1 美洲大蠊多肽PAE_2对移植瘤裸裸鼠自噬相关因子mRNA的影响 |
| 2.9.2 移植瘤裸裸鼠肿瘤组织侵袭转移相关因子引物验证 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 裸鼠一般状态观察 |
| 3.2 美洲大蠊多肽PAE_2对移植瘤裸鼠相关脏器的影响 |
| 3.3 美洲大蠊多肽PAE_2对移植瘤裸鼠血清生化指标的影响 |
| 3.4 美洲大蠊多肽PAE_2对移植瘤裸鼠肿瘤及肝脏组织病理学的影响 |
| 3.5 美洲大蠊多肽PAE_2对裸鼠皮下移植瘤侵袭转移相关因子mRNA的影响 |
| 3.5.1 美洲大蠊多肽PAE_2对裸鼠皮下移植瘤侵袭转移相关因子mRNA的影响 |
| 3.5.2 侵袭转移相关因子引物验证 |
| 3.6 美洲大蠊多肽PAE_2对裸鼠皮下移植瘤自噬相关因子mRNA的影响 |
| 3.6.1 美洲大蠊多肽PAE_2对裸鼠皮下移植瘤自噬相关因子mRNA的影响 |
| 3.6.2 裸鼠皮下移植瘤自噬相关因子验证 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 6 参考文献 |
| 7 致谢 |
| 8 攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 |
| 9 附录 |
（5）咖啡因协同促进5-氟尿嘧啶的抗肝癌作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 攻读学位期间的获得奖励 |
| 致谢 |
（6）介孔材料在靶向GSH的癌症诊断与治疗中的应用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 引言 |
| 第一部分 基于介孔MnO_2的细胞内的GSH含量检测的比色传感器的研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 基于介孔硅的双载药纳米平台的构建及逆转癌细胞多药耐药的研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 介孔材料在癌症诊断和治疗中的应用 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）Six2介导E-cadherin导致肝癌细胞5-氟尿嘧啶耐药的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 SIX2在肝癌中的表达及与预后的关系 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 小结和讨论 |
| 第二章 SIX2蛋白在肝癌细胞中的作用 |
| 第一节 有效敲低SIX2可增加肝癌细胞对5-FU的敏感性 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 小结和讨论 |
| 第二节 有效敲低SIX2可减弱肝癌细胞干性特征 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 小结和讨论 |
| 第三章 SIX2调控E-CADHERIN在肝癌中的表达及其作用 |
| 第一节 SIX2调节E-CADHERIN表达控制肝癌细胞对5-FU敏感性 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 小结和讨论 |
| 第二节 SIX2下调E-CADHERIN表达增强肝癌细胞干性特征 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 小结和讨论 |
| 第四章 SIX2通过刺激启动子甲基化抑制E-CADHERIN表达 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 小结和讨论 |
| 全文小结与结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 缩写词简表 |
| 攻读学位期间成果 |
| 致谢 |
（8）褪黑素对肝癌细胞5-氟尿嘧啶耐药的影响及其机制研究（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 引言 |
| 2 材料 |
| 2.1 细胞株 |
| 2.2 药物及试剂 |
| 2.3 仪器与设备 |
| 2.4 常用液的配制 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 细胞培养 |
| 3.1.1 细胞传代与培养 |
| 3.1.2 细胞计数 |
| 3.1.3 细胞冻存 |
| 3.1.4 细胞复苏 |
| 3.2 Western-Blot检测 |
| 3.2.1 蛋白质的样品制备 |
| 3.2.2 蛋白定量 |
| 3.2.3 蛋白电泳 |
| 3.2.4 转膜 |
| 3.2.5 封闭 |
| 3.2.6 一抗孵育 |
| 3.2.7 二抗孵育 |
| 3.2.8 显影 |
| 3.3 MTT法测定细胞抑制率 |
| 3.3.1 BEL-7402/5-FU细胞耐药性的测定 |
| 3.3.2 褪黑素的无毒剂量筛选 |
| 3.3.3 褪黑素的逆转作用测定 |
| 3.4 流式细胞仪测取细胞凋亡率 |
| 3.5 克隆形成实验 |
| 3.6 罗丹明123法 |
| 3.7 免疫细胞化学法测定褪黑素及5-FU处理后细胞内P-gp的表达情况 |
| 3.8 PI3K抑制剂对细胞凋亡率及P-gp蛋白的影响 |
| 3.9 统计学方法 |
| 4 结果 |
| 4.1 BEL7402/5-FU对5-氟尿嘧啶抵抗的鉴定 |
| 4.2 BEL-7402/5-FU细胞活化的PI3K/AKT信号通路和P-糖蛋白的检测 |
| 4.3 褪黑素的无毒剂量筛选以及抑制BEL-7402/5-FU细胞增殖 |
| 4.4 褪黑素逆转BEL-7402/5-FU细胞5-FU耐药 |
| 4.5 褪黑素增加5-氟尿嘧啶诱导的细胞凋亡 |
| 4.6 褪黑素和5-FU联合使用对抑制BEL-7402/5-FU细胞集落形成有协同作用 |
| 4.7 褪黑素抑制BEL-7402/5-FU细胞中P-糖蛋白的功能和表达 |
| 4.8 褪黑素对P-糖蛋白和PI3K/AKT通路的影响 |
| 4.9 抑制PI3K/AKT通路可增强褪黑素和5-FU诱导的细胞凋亡 |
| 4.10 褪黑素通过抑制PI3K/AKT途径主要蛋白降低P-gp的表达 |
| 5 讨论 |
| 6 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（9）阿帕替尼对人肝癌耐药细胞株BEL-7402/5-FU的作用及其作用机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 英汉缩略词对照表 |
| 致谢 |
| 原发性肝癌临床诊疗进展(综述) |
| 参考文献 |
（10）美洲大蠊提取物逆转BEL-7402/5-Fu多药耐药性的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 细胞株 |
| 1.2 药物 |
| 1.3 主要试剂及仪器 |
| 1.4 方法 |
| 1.4.1 BEL-7402和BEL-7402/5-Fu细胞培养及生长曲线测定 |
| 1.4.2 美洲大蠊提取物CⅡ-3和脱脂膏对BEL-7402/5-Fu细胞体外逆转情况的检测 |
| 1.4.3 美洲大蠊提取物CⅡ-3及脱脂膏对BEL-7402/5-Fu细胞凋亡的影响 |
| 1.4.4 美洲大蠊提取物CⅡ-3及脱脂膏对BEL-7402/5-Fu细胞中P-糖蛋白 (P-gp) 的影响 |
| 1.4.5 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 BEL-7402和BEL-7402/5-Fu细胞生长曲线和倍增时间 |
| 2.2 美洲大蠊提取物CⅡ-3和脱脂膏对BEL-7402/5-Fu细胞的逆转倍数检测 |
| 2.3 美洲大蠊提取物CⅡ-3及脱脂膏对BEL-7402/5-Fu细胞凋亡率检测 |
| 2.4 美洲大蠊提取物CⅡ-3和脱脂膏对BEL-7402/5-Fu细胞中P-gp的作用 |
| 3 讨论 |
四、Studies on the resistance mechanism of a 5-fluorouracil resistant human hepatocellular carcinoma cell line Bel/5-FU（论文参考文献）
- [1]消瘤胶囊对人肝癌耐药细胞株Bel/Fu化疗敏感性的影响[J]. 林小玲,柯维强,唐文军,闫其星. 中医学报, 2022
- [2]通过核糖核苷酸还原酶M2逆转肝癌细胞对5-氟尿嘧啶耐药[J]. 余赛红,郑晓亮,蒲依依,颜冬梅,王孝举,于洁. 中国临床药理学与治疗学, 2021
- [3]肝龙胶囊对肝细胞癌增殖及缺氧微环境的影响[D]. 王彦权. 大理大学, 2021(09)
- [4]基于AMPK为靶点的美洲大蠊多肽PAE2逆转肝癌多药耐药作用及机制研究[D]. 李彩琳. 大理大学, 2021(09)
- [5]咖啡因协同促进5-氟尿嘧啶的抗肝癌作用及机制研究[D]. 王芝蕾. 广州医科大学, 2020(01)
- [6]介孔材料在靶向GSH的癌症诊断与治疗中的应用研究[D]. 贺彬楠. 河北医科大学, 2020(02)
- [7]Six2介导E-cadherin导致肝癌细胞5-氟尿嘧啶耐药的机制研究[D]. 李建旺. 南方医科大学, 2019(02)
- [8]褪黑素对肝癌细胞5-氟尿嘧啶耐药的影响及其机制研究[D]. 鲁倩倩. 安徽医科大学, 2019(09)
- [9]阿帕替尼对人肝癌耐药细胞株BEL-7402/5-FU的作用及其作用机制[D]. 陈涛. 西南医科大学, 2018(01)
- [10]美洲大蠊提取物逆转BEL-7402/5-Fu多药耐药性的作用及机制研究[J]. 王瑶,李婷,乔婷婷,刘俊勇,沈琦,彭芳. 药学研究, 2017(06)