一、晕船易感大鼠脑干组织消减cDNA文库的构建(论文文献综述)
卢立志[1](2011)在《鸭卵泡发育差异表达基因抑制性消减文库的构建及分析》文中认为禽类的产蛋率,除了其他方面外,取决于等级前卵泡能被有效地募集进入等级卵泡,即通过卵泡的生长和闭锁建立卵泡等级。随着日龄的老化产蛋率的下降归因于卵泡闭锁的增加以及可供选择进入最后生长阶段(最大等级卵泡/排卵前卵泡)的小/生长卵泡数量减少。对人和哺乳动物巢卵泡发育研究表明,卵泡的生长和分化是多因素调控的复杂的生理生化过程,不仅受生殖轴内分泌激素的调控,而且卵巢中许多局部的生长、分化因子也以自分泌或旁分泌等形式发挥重要作用。目前,对于禽类卵泡发育的研究,虽然已经知道一些基因在不同发育阶段的卵泡中差异表达,但是对于复杂生命体而言,仅仅是其中很小部分,仍然没有合理假说来说明禽类卵泡等级的建立机制。通过筛选鸭卵泡差异表达的基因,比较不同发育阶段卵泡的差异表达基因,可以对这些差异基因在卵泡发育和分化过程中所发挥的作用有更深入的了解。揭示卵泡在不同生理状况下差异基因的表达情况,为进一步研究禽类性成熟、产蛋的启动、产蛋的维持和高产性能的分子生物学机制提供重要资料,并为最终揭示禽类卵泡发育和等级建立的分子机制,从而在基因水平上进行遗传操作,延长产蛋高峰期,提高鸭的产蛋率提供理论依据。本实验以产蛋高峰期绍兴鸭母鸭不同阶段的卵泡为实验材料,采用DSN酶介导的均一化消减杂交方法构建鸭卵泡差异表达基因的消减cDNA文库,以期找到与鸭卵泡发育相关的基因,探索卵泡等级建立与分化的基因表达调控的分子机制。本实验构建了两个鸭卵泡差异表达基因的双向消减文库:以最大等级卵泡和等级前卵泡这两个不同发育阶段的卵泡为实验材料进行消减杂交。其中,以最大等级卵泡为Tester,等级前卵泡为Driver,建立的为正向消减文库;以等级前卵泡为Tester最大等级卵泡为Driver建立的为反向消减文库。实验过程中,总RNA与反转录成的cDNA质量较好,消减产物得到很好的富集。正向消减文库中获得了88条独立的差异表达的基因,BLAST比对结果显示,其中60条具有同源基因,28条相似度极低或无同源性的基因。筛选出与卵泡发育相关基因LHR和EGFR,与细胞增殖和分化有关的基因SLC家族等,影响胚胎发育的NADH1α脱氢酶同源基因NADH1β几个编码激酶或其同源基因如PRKG2、 AKAP2、similar to protein kinase D1。此外,筛选到我们还分离了一些未知功能的基因。反向消减文库中获得了72条独立的差异表达的基因,BLAST比对结果显示,其中51条具有同源基因,21条无相似或者同源性极低的基因。筛选出的基因有RBMII,拼接因子SF2亚单位p32和U2AF35kDa subunit-like, tensin基因,真核生物翻译起始基因EIF3I,微管组分基因α-tubu1in,肠平滑肌肌动蛋白gamma2,含靶蛋白同源基因similar to palladin,免疫反应相关基因CD58,编码微小染色体维持蛋白的基因MCM5, RCC2,参与细胞侵袭和转移的基因Flotillin-2,酶类(包括激酶)及其同源基因AFG3ATPase f ami ly gene3-like2、AK3L2、TAOK3等基因。另外,我们还分离了一些未知功能的新基因。以最大等级卵泡和最小等级卵泡这两个不同发育阶段的卵泡为实验材料进行消减杂交。其中,以最大等级卵泡为Tester,最小等级卵泡为Driver,建立的为正向消减文库;以最小等级卵泡为Tester,最大等级卵泡为Driver建立的为反向消减文库。实验过程中,总RNA与反转录成的cDNA质量较好,消减产物得到很好的富集,正向消减文库中获得了79条独立的差异表达基因,BLAST比对结果显示,其中67条具有同源基因,12条无相似基因或者同源性极低的基因;筛选出与卵泡发育相关基因EGFR,与排卵有关的基因ADAMTS-1影响脑神经系统和胚胎发育的编码钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶基因、免疫相关基因lymphocyte antigen86-like和IL17RA,参与细胞调亡的基因death domain-containing tumor necrosis factor receptor superfamily member23,骨成形蛋白2基因。分离了一些编码通道或转运有关蛋白的基因及其同源基因sodium/myo-inositol cotransporter-like、calcium/calmodulin-dependent serine protein kinase、 SLC9A8、potassium inwardly-rectifying channel, subfamily J, member2、 SLC2A1、PCTP等。除上述基因外,还筛选到RNF14、TTC17、PHF21A、PLEKHB2、 ADD3、RGS12、SVEP1、HDAC4、STOM、SMARCE1、SETD4、CEBPG、STRADA、ZC3H14、 RHOBTB1、ALDH1A2、EXOC2和GAPVD等基因。反向消减文库中获得了37条独立的差异表达的基因,比对结果显示,其中29条具有同源基因,8条无相似或相似度极低的基因。反向文库中筛选出的基因主要包括RBMII、微管组分基因α-tubulin lc、 CD58、真核生物翻译起始基因EIF3I以及编码微小染色体维持蛋白的MCM5基因。
朱广琴[2](2011)在《多羔和单羔奶山羊发情期卵巢组织差异表达基因的筛选、鉴定及分析》文中指出产羔性状是山羊生产中重要的经济性状之一,提高产羔性能直接关系到奶山羊养殖业的生产成本和生产效率的高低。然而,产羔性状是多基因和环境因素互作的结果,目前,对其调控机理还知之甚少。卵巢是动物繁殖中最重要的器官,其内部卵泡在每个发情周期中经历着细胞生长、分化和凋亡。这种规律性的生理变化直接影响或决定着山羊的排卵数、受精率和产羔数的多少。为了深入探索奶山羊卵巢基因的表达模式,本研究以发情期多羔和单羔关中奶山羊卵巢组织为试验材料,利用抑制消减杂交技术构建正反向cDNA消减文库,对其基因的表达谱进行了研究,取得如下结果:1.利用SSH技术构建了多羔和单羔关中奶山羊发情期卵巢组织的正反向cDNA消减文库:M-U(以多羔羊卵巢组织为Tester,单羔羊卵巢组织为Driver)和U-M(以单羔羊卵巢组织为Tester,多羔羊卵巢组织为Driver)cDNA消减文库;用看家基因GAPDH(甘油三磷酸脱氢酶)检测两个cDNA文库的消减效率分别为211和28,表明两个文库中差异表达的基因也富集了211和28倍。2.在利用SSH技术成功构建多羔和单羔关中奶山羊卵巢组织cDNA消减文库的基础上,采用斑点杂交技术对两个文库进行了筛选和鉴定。经测序,在M-U cDNA消减文库中得到77个完全不同的ESTs,其中4个ESTs是山羊的已知序列;53个ESTs是山羊中的未知序列,但与绵羊、牛、猪等其它家畜具有较高的相似性;其余20个ESTs在NCBI数据库中尚未找到其相似性序列。在U-M cDNA消减文库中得到50个ESTs,其中没有山羊的已知序列,30个ESTs是山羊中未知序列,但与绵羊、牛、猪等其它家畜具有较高的相似性;其余20个ESTs在NCBI数据库中尚未找到其相似性序列。得到的77个正库序列共参与了139个不同的生物过程,而反库中的50个序列只参与了22个不同的生物过程;经分析,正库中序列参与的生物过程主要有如下过程被富集:细胞过程、代谢过程、生物调节、应激反应、多细胞协调过程、发育过程、信号转导、细胞定位、细胞原件合成、细胞原件组织、繁殖、细胞增殖、生长、死亡、生物黏附、转运和定位共17个类别;而反库中序列参与的生物过程仅有4个被富集,分别是细胞过程、代谢过程、生物调节和应激反应。3.利用实时定量PCR技术对关中奶山羊卵巢组织抑制消减cDNA文库中筛选出来的12个基因进行检测与分析,结果表明12个基因在多羔奶山羊卵巢组织中的表达丰度较单羔奶山羊卵巢组织分别提高:16.03(DCN)、11.87(OAZ1)、5.28(EPHX1)、5.68(FSHR)、5.36(TIMP1)、9.67(RUNX1)、3.90(ADAMTS1)、7.97(BMP6)、2.91(RPL5)、6.01(VIM)、2.23(ZNF207)和4.91(SF3B5)倍。对基因的相对表达量和产羔数进行相关性分析,发现只有DCN、OAZ1、EPHX1和FSHR与产羔数呈显着正相关(R2=0.9783,0.9747,0.9669和0.902);并对这4个基因进行了克隆,首次从关中奶山羊中获得了相应的CDS全长并提交到GenBank:FSHR(ORF 2055bp,Accession No:HQ326239)、OAZ1(ORF 577bp,Accession No:HQ326240)、EPHX1(ORF 1356bp,Accession No:HQ326238)和DCN(ORF 1083bp,Accession No:HQ326237)。4.本研究利用了多个生物信息学的分析软件,对已经筛选到的差异表达的4个基因DCN、OAZ1、EPHX1和FSHR进行山羊、绵羊、牛、人、鼠和猪物种间的同源性分析、氨基酸结构分析、潜在功能位点预测、蛋白质的二级、三级结构等进行了分析比较,结果发现山羊、绵羊、牛、人、鼠和猪这4个基因的ORF区和氨基酸序列高度同源,所编码蛋白的结构和潜在功能位点基本相同。山羊、绵羊、牛、人、鼠和猪的DCN和FSHR具有信号肽;EPHX1和OAZ1没有信号肽,没有卷曲,因此推断这两个基因没有复杂的空间结构。这4个基因都具有N-糖基化位点。只有OAZ1没有跨膜螺旋。
米拉古丽·加尔恒[3](2010)在《鸡与鹌鹑属间杂交种胚胎肌肉组织发育相关基因的筛选》文中提出脊椎动物肌纤维类型和数量主要由遗传因素决定,肌肉组织中的肌纤维在胚胎期已经形成了,出生后其肌纤维数不再改变,肌肉生长主要依赖肌卫星细胞的增殖分化导致的肌纤维长度增加和周径增大,而非细胞的增生或肌细胞数目的增多。即肌肉的早期发育是动物的产肉潜力及肌肉品质的关键,其发育状况直接决定动物的肉产量和质量。家鸡是研究肌肉发育调控过程中非常好的动物模型,蛋鸡和肉鸡在骨骼肌生长速率上存在显着差异。鸡与鹌鹑属间杂交,其属间杂交种具有双亲的肉品质特点,且基因及相关性状发生分离和重新组合的现象,适合作为肉品质研究的一种生物学模式生物。本研究分别选用肉用种公鸡和蛋用种公鸡当做父本,朝鲜鹌鹁当做母本进行鸡与鹌鹑属间杂交,通过人工受精、孵化、采样等一系列过程,共收集获得了19个13日龄肉用型属间杂交种胚胎肌肉组织和21个13日龄蛋用型属间杂交种胚胎肌肉组织用于抑制性消减杂交实验,其可以明确揭示肌肉发育基本规律。以肉用型公鸡当做父本,鹌鹑当做母本的鸡与鹌鹑属间杂交种胚胎肌肉组织和蛋用型公鸡当做父本,鹌鹑当做母本的鸡与鹌鹑属间杂交种胚胎肌肉组织为实验组和对照组,利用抑制性消减杂交技术,进行了正向抑制性消减杂交,成功构建了肌肉发育相关的消减文库。蓝白斑实验获得180个克隆菌落,利用Nested Primer 2R和Nested Primer 1为引物对每个克隆进行了PCR检测,筛选重组克隆并鉴定插入片段的大小弃阴性克隆和PCR产物为多条带的克隆,最后从消减cDNA质粒文库中筛选到140个有效阳性克隆,插入片段大小主要分布于250-750bp之间,随机选择100个阳性克隆送测序。从中选择40个测序结果进行同源性分析,判断其中4个序列分别与鸡Y-BOX结合蛋白,鸡FK506结合蛋白3,鸡波形蛋白和鸡骨骼肌肌钙蛋白T有高度同源性。其余克隆序列中,24个序列和目前已报道的EST序列存在高度同源性,可能为新基因;4个序列测序结果和已报道基因及EST文库序列均不具有较高的同源性,这部分结果有待于进一步研究去验证。
康波[4](2009)在《籽鹅卵巢组织基因差异表达及产蛋相关基因定量的研究》文中进行了进一步梳理鹅产蛋性能较低是制约我国鹅产业发展的重要因素之一,鹅产蛋性能的改善和提高一直以来都是鹅遗传育种工作的重点。卵巢是雌性鹅的重要生殖器官,鹅产蛋前后卵巢组织中某些基因是否表达(或者表达量的差异)均可能影响鹅的产蛋性能。分子生物学技术的发展为提高鹅产蛋性能的研究提供了新的途径。抑制性消减杂交技术对于基因组信息较少的鹅来说,无疑是一种较好的筛选差异表达基因的技术。目前,已有报道应用抑制性消减杂交技术成功地筛选获得了产蛋前期和产蛋期鹅腺垂体、肝脏组织的差异表达基因。因此,本研究以黑龙江省籽鹅卵巢组织作为研究对象,利用抑制消减杂交技术构建产蛋前期和产蛋期籽鹅卵巢组织消减cDNA文库,采用反向斑点杂交技术对该文库进行了差异表达基因的筛选和鉴定,同时利用实时定量PCR技术检测了部分差异表达基因在产蛋前期和产蛋期卵巢组织中表达量的变化,另外,还对与生殖相关的激素受体ESR1、ESR2、FSHR和PRLR进行了表达模式的研究。从而获得了产蛋前期与产蛋期籽鹅卵巢组织基因表达变化的信息,为从分子水平上探讨鹅产蛋分子调控机理的研究以及今后采用遗传手段改良和选育高产蛋性能籽鹅的研究奠定基础。
雷思勤[5](2009)在《氧硫化碳在检疫处理梨黑斑病菌中的应用及其分子机理研究》文中认为作为溴甲烷的潜在替代熏蒸剂,氧硫化碳以其杀虫效果好,穿透能力强,低残留,天然环保等优点在仓储害虫熏蒸方面受到广泛关注,但是氧硫化碳对鲜活农产品及其真菌病害的熏蒸效果研究还相对较少,氧硫化碳的毒理机理研究方面目前则更是空白。本研究针对梨黑斑病病原菌链格孢菌(Alternaria.Alternata(Fr.)Keissler),在不同熏蒸温度和时间条件下进行了室内毒力测定,结果表明,温度越高,氧硫化碳对链格孢菌的抑制效果越好,氧硫化碳链格孢菌处理在15℃以上较为适宜;随着熏蒸时间的延长,氧硫化碳对链格孢菌的毒力显着提高,说明长时间熏蒸有助于提高处理效果。对人工接种伤梨的熏蒸试验表明,氧硫化碳熏蒸对梨黑斑病的发病有明显的抑制作用,梨黑斑病的发病率随着熏蒸剂量升高而降低。装载量50%左右剂量为200g/m3COS熏蒸4h,几乎可以完全抑制梨黑斑病的发病。氧硫化碳熏蒸对鸭梨品质的影响同样是我们的关注点,为此本文开展了25℃不同剂量氧硫化碳熏蒸对鸭梨失重,硬度,可溶性糖含量,总酸含量以及呼吸强度的影响的研究。试验结果表明,氧硫化碳熏蒸对鸭梨处理期间的呼吸作用有一定程度的增强,可以抑制鸭梨在贮藏中的失重,对储藏期间水果硬度、可溶性糖和总酸度均无明显影响,但是装载量50%左右剂量60g/m3以上COS熏蒸4h处理会使鸭梨表皮出现药害。为了探明氧硫化碳熏蒸杀灭链格孢菌的分子机理,本研究采用了抑制消减杂交技术(Suppression subtractive hybridization,SSH)成功构建了处理前后的cDNA差异表达文库,寻找到了氧硫化碳熏蒸后差异表达的基因。序列分析表明,链格孢菌中几个参与蛋白磷酸化,钙离子应答等与信号转导过程相关的基因,其表达量在处理0.5h后迅速升高,几个参与细胞蛋白合成,分裂增殖过程相关的基因,其表达量在1至2h后降低;说明COS可能通过迅速激活一系列信号转导过程抑制了链格孢菌的蛋白合成,细胞分裂和增殖,进而达到杀灭效果;另一方面,几个参与硫化氢和半胱氨酸代谢的基因表达量也在处理0.5h后迅速升高,说明COS还可能同时直接侵入细胞并代谢为硫化氢进而达到杀灭效果。
周利梅,郭俊生,李敏[6](2008)在《与晕船有关的铁蛋白基因的表达变化》文中研究表明目的探讨铁蛋白基因的表达变化与晕船发生的可能关系。方法分别给予大鼠模拟晕船刺激3d和21d,运用实时荧光定量聚合酶链反应技术检测铁蛋白基因在晕船差异个体脑干中的表达量。结果模拟晕船刺激3d,铁蛋白基因的表达量在各组大鼠脑干组织中的表达量差异不显着;模拟晕船刺激21d,铁蛋白基因在晕船易感大鼠脑干组织中的表达量显着低于对照组、晕船适应组和不晕船组大鼠(P<0.05或P<0.01);在不晕船大鼠脑干组织中的表达量与对照组比较差异无显着性。结论机体接受模拟晕船刺激后发生晕船,可能与其脑干组织中铁蛋白基因的表达量下降有关。
陶金忠,张勇,杨永新,张进隆,赵兴绪[7](2007)在《抑制性消减杂交技术及其在动物基因研究中的应用》文中提出抑制性消减杂交(SSH)是结合抑制性PCR和消减杂交技术发展起来的一种高效分离差异表达基因的方法,具有特异性高、假阳性率低、操作简便、灵敏度高等特点。在两种状态下基因的表达变化、差异基因的克隆和鉴定对基因表达调控有着重要意义。SSH在动物抗病、抗应激及药物的靶基因等方面的研究中取得了重要的进展。
袁晓萌[8](2007)在《甘蓝型油菜小核糖核蛋白BnSmD1全长cDNA的克隆与表达分析》文中研究表明通过筛选甘蓝型油菜(Pet33-10)与无花瓣油菜(Apet33-10)反向消减文库(SSH)和RACE-PCR技术,获得了甘蓝型油菜小核糖核蛋白BnSmD1的全长cDNA(GenBank登陆号DQ298446)。该基因全长484bp并包含一个长354bp的阅读框。BnSmD1在N端拥有两个高度保守的结构域(Sm-1和Sm-2),羧基段则含有一个RG重复序列。由于BnSmD1编码的蛋白质与其在拟南芥中在对叶片形成起重要作用的特异小核糖核蛋白StuD1(蛋白质序列号NP1874161)具有高度的同源性(93.22%)。功能预测显示BnSmD1是非球状蛋白,并且值得注意的是该蛋白没有色氨酸成分。Northern blot表达结果显示:BnSmD1在甘蓝型油菜的各个组织均有表达,但是它在早期花蕾中的表达明显高于同期的叶和茎。根据这一情况,通过对BnSmD1在Apet33-10无花瓣品种与野生型Pet33-10中各组织的表达差异进行比较,发现该基因在Apet33-10的早期花蕾中表达明显下降。因此,BnSmD1可能对植物的早期花发育起到了重要的作用,并很有可能影响花瓣的形成。
李宜谦,蔡懿灵,郭俊生[9](2006)在《晕船及适应过程中大鼠血浆及脑氨基酸含量变化》文中研究指明目的:通过观察模拟晕船及适应后大鼠血浆及脑内游离氨基酸含量变化,为进一步研究防治晕船的营养干预措施提供实验依据。方法:采用Crampton模型模拟晕船刺激,以异嗜高岭土行为作为判定大鼠晕船及晕船适应的指标,运用高效液相色谱法测定晕船及晕船适应过程中大鼠血浆及脑内游离氨基酸含量变化。结果:模拟晕船刺激1d后,血浆胱氨酸和异亮氨酸含量显着升高,Gly、Pro含量显着下降,BCAA/AAA的比值升高;脑内Ala、Cys+Met、Tyr、His以及总氨基酸含量显着下降;模拟晕船刺激21d后血浆及脑内游离氨基酸无明显变化,脑内Glu/GABA显着升高。晕船耐受与晕船易感大鼠血浆及脑内游离氨基酸含量、血浆BCAA/AAA比值及脑内Glu/GABA比值均无显着差异。结论:晕船刺激使实验大鼠血浆和脑内氨基酸含量发生明显改变,其中有些与神经递质合成有关的氨基酸改变较显着。
邱志鹏,王翀[10](2006)在《抑制消减杂交及其应用》文中认为抑制消减杂交(Suppressionsubtractivehybridization,SSH)是以消减杂交为基础结合抑制PCR方法发展起来的分离克隆差异表达基因的一种策略。该方法具有简便易行、特异性高、背景低、重复性好、能分离出丰度较低的特异性片段等特点。主要介绍其原理、方法及其应用,并对方法的优缺点和应用前景作分析。
二、晕船易感大鼠脑干组织消减cDNA文库的构建(论文开题报告)
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、晕船易感大鼠脑干组织消减cDNA文库的构建(论文提纲范文)
(1)鸭卵泡发育差异表达基因抑制性消减文库的构建及分析(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
第一部分 文献综述 |
第一章 差异表达基因的研究方法及应用 |
1 抑制性消减杂交技术在动物生殖与发育学上的应用 |
1.1 SSH的原理 |
1.2 SSH技术路线 |
1.3 SSH的优缺点 |
1.4 SSH技术在动物繁育研究中的应用 |
2 mRNA差异显示技术及其在动物生殖生理研究中的应用 |
2.1 DDRT-PCR技术原理 |
2.2 DDRT-PCR技术的优点 |
2.3 DDRT-PCR技术的缺点及其改进 |
2.4 DDRT-PCR技术在动物发育研究中的应用 |
3 基因表达系列分析及其在动物科学研究中的应用 |
3.1 SAGE原理及操作步骤 |
3.2 SAGE技术的优势,存在的问题及改进 |
3.3 SAGE在动物科学研究中的应用 |
4 基因芯片及其在动物基因研究中的应用 |
4.1 基因芯片概述 |
4.2 基因芯片主要技术流程 |
4.3 基因芯片的改进 |
4.4 基因芯片的应用 |
第二章 禽类卵泡发育调节的研究进展 |
1 禽类卵巢及卵泡发育的结构特点 |
2 禽类卵泡生长发育的调节 |
2.1 促性腺激素释放激素(GnRH)对卵泡发育的调节 |
2.2 促卵泡素(FSH)对卵泡发育的调节 |
2.3 促黄体素(LH)对卵泡发育的调节 |
2.4 雌激素对卵泡发育的调节 |
2.5 孕激素对卵泡发育的调节 |
2.6 促乳素(Prolactin,PRL)对卵泡发育的调节 |
2.7 抑制素(INH)对卵泡发育的调节 |
2.8 前列腺素(PG)对卵泡发育的调节 |
2.9 8-精催产素对卵泡发育的调节 |
2.10 细胞因子对卵泡发育的调节 |
2.11 褪黑素(MLT)对卵泡发育的调节 |
2.12 肾上腺皮质激素对卵泡发育的调节 |
3 卵泡闭锁的调节 |
4 禽类卵巢卵泡与产蛋 |
第二部分 实验研究 |
第三章 鸭最大等级卵泡与等级前卵泡正反消减文库的构建 |
1 材料与方法 |
1.1 实验材料 |
1.2 实验试剂 |
1.3 主要试剂的配制 |
1.4 实验仪器 |
1.5 样品总RNA提取 |
1.6 DSN介导的消减杂交 |
2 结果与分析 |
2.1 总RNA的结果检测 |
2.2 cDNA的合成质量检测 |
2.3 消减产物的PCR扩增结果 |
2.4 消减效率检测 |
2.5 消减文库cDNA的检测 |
2.6 测序与序列分析 |
3 讨论 |
3.1 关于抑制消减杂交技术 |
3.2 关于引物的设计 |
3.3 关于差异表达的基因 |
4 小结 |
第四章 鸭最大与最小等级卵泡正反消减文库的构建 |
1 材料与方法 |
1.1 实验材料 |
1.2 实验试剂 |
1.3 主要试剂的配制 |
1.4 实验仪器 |
1.5 样品总RNA提取 |
1.6 DSN介导的消减杂交 |
2 结果与分析 |
2.1 总RNA的结果检测 |
2.2 cDNA的合成质量检测 |
2.3 消减产物的PCR扩增结果 |
2.4 消减效率检测 |
2.5 消减文库cDNA的检测 |
2.6 测序与序列分析 |
3 讨论 |
3.1 文库消减文库中重要的差异表达基因 |
3.2 文库间差异基因的比较 |
4 小结 |
第六章 创新点 |
参考文献 |
致谢 |
缩略词表 |
攻读博士学位期间发表的论文 |
(2)多羔和单羔奶山羊发情期卵巢组织差异表达基因的筛选、鉴定及分析(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
第一篇 文献综述 |
第一章 调控雌性动物生殖机能的主要激素及因子 |
1.1 主要激素 |
1.1.1 促性腺激素释放激素(Gonadatropin Releasing Hormone, GnRH) |
1.1.2 卵泡刺激素(Folliele Stimulating Hormone, FSH) |
1.1.3 促黄体素(Luteinizing Hormone, LH) |
1.1.4 雌激素(Estrogen) |
1.1.5 孕激素(Progesterone) |
1.1.6 抑制素(Inhibin) |
1.1.7 卵泡抑制素(Folliculostatin) |
1.1.8 活化素(Activins) |
1.1.9 卵母细胞成熟抑制因子(Oocyte Maturation Inhibitor) |
1.2 神经递质 |
1.3 细胞因子 |
1.3.1 TGF-β超家族对卵泡发育的调节 |
1.3.2 卵泡发育中IGF 系统的调节 |
1.3.3 卵泡发育调节中的其它因子 |
第二章 差异表达基因的研究方法 |
2.1 差别杂交法(DH/DS) |
2.2 扣除杂交(SH) |
2.3 mRNA 差异显示技术(DDRT-PCR) |
2.4 代表性差异显示(RDA) |
2.5 基因表达系列分析(SAGE) |
2.6 抑制消减杂交(SSH) |
2.7 交互扣除RNA 差别显示技术(RSDD) |
2.8 差异消减展示技术(DSD) |
2.9 表达序列标签串联排列连接(TALEST) |
2.10 GeneCalling?技术 |
2.11 基因鉴定集成法(IPGI) |
2.12 高通量克隆和高通量筛选技术 |
2.13 高通量平行标记测序技术(MPSS) |
2.14 基因芯片技术 |
第三章 SSH 技术及其在动物基因研究中的应用 |
3.1 抑制消减杂交技术的产生及发展 |
3.2 SSH 技术的原理和基本步骤 |
3.3 SSH 技术的优缺点 |
3.3.1 SSH 的优点 |
3.3.2 SSH 技术的不足之处及对策 |
3.4 SSH 技术在动物基因研究中的应用 |
3.4.1 SSH 在动物发育生物学研究中的应用 |
3.4.2 SSH 在动物繁殖研究中的应用 |
3.4.3 SSH 在动物疾病研究中的应用 |
3.4.4 SSH 在动物营养研究中的应用 |
3.4.5 SSH 在动物应激研究中的应用 |
3.4.6 SSH 在动物生产性能研究中的应用 |
3.5 本研究的目的及意义 |
第二篇 试验研究 |
第四章 多羔和单羔关中奶山羊发情期卵巢组织差异表达基因的筛选、鉴定和测序分析 |
4.1 材料与方法 |
4.1.1 试验材料 |
4.1.2 试验方法 |
4.2 结果与分析 |
4.2.1 多羔和单羔关中奶山羊卵巢组织中总RNA 的提取 |
4.2.2 多羔和单羔关中奶山羊卵巢组织中mRNA 的纯化与浓缩 |
4.2.3 消减效率的检测 |
4.2.4 鉴定文库质量 |
4.2.5 斑点杂交筛选结果 |
4.2.6 cDNA 消减文库的测序和分析 |
4.2.7 所得序列参与生物过程的分析结果 |
4.3 讨论 |
4.3.1 SSH 技术 |
4.3.2 卵巢差异基因 |
4.4 小结 |
第五章 筛选的12 个基因实时定量检测、与产羔数相关性分析和克隆鉴定 |
5.1 材料与方法 |
5.1.1 试验材料 |
5.1.2 试验方法 |
5.2 基因表达量与产羔数相关性分析 |
5.3 目的基因克隆 |
5.3.1 引物设计 |
5.3.2 目的片段的PCR 扩增 |
5.3.3 纯化回收 |
5.3.4 连接转化 |
5.3.5 菌落PCR 检测和测序 |
5.3.6 序列注册 |
5.4 结果与分析 |
5.4.1 实时定量PCR 检测差异表达基因 |
5.4.2 差异表达基因与产羔数的相关性 |
5.4.3 目的基因CDS 区的克隆 |
5.5 讨论 |
5.5.1 引物设计要领 |
5.5.2 PCR 条件的优化 |
5.5.2 PCR 条件的优化 |
5.5.4 与产羔数成正相关基因的作用 |
5.6 小结 |
第六章 DCN、OAZ1、EPHX1 和FSHR 的生物信息学分析 |
6.1 分析方法 |
6.2 结果与分析 |
6.2.1 DCN 基因的生物信息学分析 |
6.2.2 OAZ1 基因的生物信息学分析 |
6.2.3 EPHX1 基因的生物信息学分析 |
6.2.4 FSHR 的生物信息学分析 |
6.3 讨论 |
6.4 小结 |
主要结论 |
本研究的创新点 |
进一步研究的问题 |
参考文献 |
附录 |
致谢 |
作者简介 |
(3)鸡与鹌鹑属间杂交种胚胎肌肉组织发育相关基因的筛选(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
本文缩写的中英文对照 |
目录 |
引言 |
第一章 文献综述 |
1 鸡与鹌鹑远缘杂交研究进展 |
2 肌肉发生机制的研究进展 |
2.1 胚胎肌肉发育 |
2.2 肌肉发育相关基因及其作用 |
2.2.1 肌肉调节因子(MRFs)在肌肉发育中的功能 |
2.2.2 Pax基因 |
2.2.3 成纤维细胞生长因子(Fibroblast growth factor Fgf) |
3 抑制性消减杂交的研究进展 |
第二章 鸡与鹌鹑属间杂交种胚胎肌肉组织发育相关基因的筛选 |
1 实验材料与方法 |
1.1 实验材料 |
1.2 实验方法 |
2 结果与分析 |
2.1 蛋用属间杂交种胚胎和肉用属间杂交种胚胎的总RNA提取 |
2.2 mRNA的完整性和均一性 |
2.3 Driver和Tester cDNA的制备 |
2.4 两轮PCR对消减杂交产物的特异性扩增结果 |
2.5 消减杂交、抑制性PCR和消减效率检测 |
2.6 差异表达基因消减cDNA文库的构建结果 |
2.7 测序结果 |
2.8 同源性分析结果 |
3 讨论 |
4 结论 |
5 创新点 |
6 展望 |
参考文献 |
附录 |
作者简介 |
发表论文情况 |
致谢 |
导师评阅表 |
(4)籽鹅卵巢组织基因差异表达及产蛋相关基因定量的研究(论文提纲范文)
内容提要 |
前言 |
第一篇 文献综述 |
第1章 鹅产蛋性能的研究进展 |
1.1 通过遗传育种提高鹅的产蛋性能 |
1.2 鹅产蛋性能候选基因的研究 |
1.3 基因重组技术提高鹅的产蛋性能 |
1.4 光照周期的调控提高鹅产蛋性能 |
1.5 营养调控提高鹅的产蛋性能 |
1.6 添加外源激素提高鹅的产蛋性能 |
第2章 差异表达基因的研究方法 |
2.1 差别筛选 |
2.2 消减杂交 |
2.3 mRNA 差异显示技术 |
2.4 代表性差异分析 |
2.5 基因表达系列分析 |
2.6 抑制性消减杂交 |
2.7 基因芯片技术 |
2.8 交互扣除RNA 差别显示技术 |
2.9 差异消减展示 |
2.10 表达序列标签串联排列连接 |
2.11 GeneCalling 技术 |
2.12 基因鉴定集成法 |
2.13 高通量克隆和高通量筛选技术 |
2.14 高通量平行标记测序技术 |
第3章 抑制性消减杂交技术及其在动物基因研究中的应用 |
3.1 抑制性消减杂交技术的产生和发展 |
3.2 抑制性消减杂交技术的基本原理 |
3.3 抑制性消减杂交技术的方法流程 |
3.4 抑制性消减杂交技术的评价 |
3.5 抑制性消减杂交技术在动物基因研究中的应用 |
第4章 实时定量PCR 技术及其在动物研究中的应用 |
4.1 实时定量PCR 技术的背景 |
4.2 实时定量PCR 技术原理 |
4.3 实时定量PCR 技术的荧光标记方法 |
4.4 实时定量PCR 技术的应用 |
第二篇 研究内容 |
第1章 产蛋前期和产蛋期籽鹅卵巢组织消减cDNA文库的构建 |
1.1 材料与方法 |
1.2 结果 |
1.3 讨论 |
1.4 小结 |
第2章 籽鹅卵巢组织差异表达基因的筛选、鉴定及序列分析 |
2.1 材料与方法 |
2.2 结果 |
2.3 讨论 |
2.4 小结 |
第3章 籽鹅卵巢组织中部分差异表达基因的定量研究 |
3.1 材料与方法 |
3.2 结果 |
3.3 讨论 |
3.4 小结 |
第4章 籽鹅卵巢组织 ESR、FSHR 和 PRLR 基因表达的定量研究 |
4.1 材料与方法 |
4.2 结果 |
4.3 讨论 |
4.4 小结 |
结论 |
1 消减 cDNA 文库的构建 |
2 反向斑点杂交筛选差异表达基因 |
3 FTH 和 8 个未知基因的实时定量 PCR 检测 |
4 ESR、FSHR 和 PRLR 表达模式的研究 |
参考文献 |
攻读博士期间发表的学术论文 |
致谢 |
中文摘要 |
Abstract |
(5)氧硫化碳在检疫处理梨黑斑病菌中的应用及其分子机理研究(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
第一章 前言 |
1.鸭梨及梨黑斑病 |
1.1 鸭梨及梨黑斑病简介 |
1.2 链格孢菌(Alternariaalternata(Fr.)keissle) |
2.植物检疫除害处理 |
2.1 植物检疫除害处理简介 |
2.2 熏蒸及主要熏蒸剂简介 |
2.2.1 溴甲烷 |
2.2.2 磷化氢 |
2.3 氧硫化碳 |
2.3.1 氧硫化碳物理性质 |
2.3.2 氧硫化碳对有害生物熏蒸效果 |
2.3.3 氧硫化碳对鲜活植物产品的影响 |
2.3.4 氧硫化碳对人畜的毒性 |
3.差异表达基因研究 |
3.1 抑制性消减杂交技术产生的背景 |
3.2 抑制消减杂交的原理 |
3.3 SSH在研究生物体应答外界刺激中的应用 |
3.4 SSH优点及前景 |
4.本研究目的及意义 |
第二章 氧硫化碳对链格孢菌(A.Alternata(Fr.)Keissler)的熏蒸毒性研究 |
1.试验材料与方法 |
1.1 试验材料 |
1.1.1 主要药品 |
1.1.2 研究对象 |
1.1.3 培养基 |
1.1.4 主要仪器设备 |
1.2 试验方法 |
1.2.1 氧硫化碳标准曲线制备 |
1.2.2 供试菌的准备 |
1.2.3 菌的熏蒸供试菌样的熏蒸 |
1.2.4 鸭梨的接种 |
1.2.5 数据分析 |
2.结果与分析 |
2.1 不同温度下氧硫化碳对病原真菌的毒力 |
2.2 氧硫化碳杀灭病原真菌的CT值 |
2.3 氧硫化碳熏蒸对梨黑斑病发病率的影响 |
3.讨论 |
第三章 氧硫化碳熏蒸对鸭梨品质影响 |
1.试验材料与方法 |
1.1 试验材料 |
1.1.1 研究对象 |
1.1.2 主要药品 |
1.1.3 主要仪器设备 |
1.2 试验方法 |
1.2.1 氧硫化碳和二氧化碳标准曲线制备 |
1.2.2 熏蒸处理及气体浓度检测 |
1.2.3 水果呼吸强度的测定 |
1.2.4 水果失重率的测定 |
1.2.5 水果硬度的测定 |
1.2.6 水果可溶性糖的测定 |
1.2.7 水果总酸度的测定 |
1.2.8 果表药害指数测定 |
1.2.9 数据处理 |
2.结果与分析 |
2.1 熏蒸过程中的气体浓度检测 |
2.2 氧硫化碳熏蒸对水果成熟度的影响 |
2.2.1 氧硫化碳熏蒸对水果呼吸强度的影响 |
2.2.2 氧硫化碳熏蒸对水果硬度的影响 |
2.3 氧硫化碳熏蒸对水果失重率的影响 |
2.4 氧硫化碳熏蒸对水果可溶性糖的影响 |
2.5 氧硫化碳熏蒸对水果总酸度的影响 |
2.6 氧硫化碳熏蒸对水果的药害 |
3.讨论 |
第四章 氧硫化碳杀灭梨黑斑病菌的分子机理 |
1.试验材料及方法 |
1.1 试验材料 |
1.1.1 研究对象 |
1.1.2 主要药品 |
1.1.3 培养基 |
1.1.4 主要仪器设备 |
1.1.5 主要试剂 |
1.1.6 寡聚核苷酸序列和引物 |
1.2 试验方法 |
1.2.1 技术路线 |
1.2.2 供试菌准备 |
1.2.3 琼脂糖胶电泳所用溶液 |
1.2.4 LB培养基 |
1.2.5 制备含Amp/X-gal/IPTG的LB筛选平板 |
1.2.6 总RNA提取与mRNA的分离纯化 |
1.2.7 SSH文库构建 |
1.2.8 PCR扩增 |
1.2.9 DNA印记的杂交分析 |
1.2.10 cDNA差减文库的构建 |
1.2.11 SSH文库插入片段检测 |
1.2.12 阳性克隆测序 |
1.2.13 半定量的RT—PCR验证 |
2.结果 |
2.1 总RNA与mRNA的提取 |
2.2 消减杂交 |
2.3 cDNA消减文库的杂交验证 |
2.4 消减文库插入片段的PCR鉴定 |
2.5 差异表达基因的半定量RT-PCR分析 |
3.讨论 |
3.1 与细胞生长增殖相关 |
3.1.1 60S核糖体蛋白 |
3.1.2 细胞分裂蛋白 |
3.1.3 几丁质合成酶 |
3.2 与信号传导相关 |
3.2.1 酪氨酸蛋白磷酸酶 |
3.2.2 液泡钙氢离子泵 |
3.3 与氧化还原相关 |
3.3.1 硫化物-辅酶Q氧化还原酶 |
3.3.2 半胱氨酸双加氧酶 |
参考文献 |
致谢 |
附录 |
(8)甘蓝型油菜小核糖核蛋白BnSmD1全长cDNA的克隆与表达分析(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
1 引言 |
2 材料与方法 |
2.1 材料 |
2.1.1 植物材料 |
2.1.2 菌种及载体 |
2.1.3 培养基 |
2.1.4 工具酶和试剂 |
2.1.5 引物与接头 |
2.2 实验方法和步骤 |
2.2.1 总RNA的提取和mRNA的纯化 |
2.2.2 双链cDNA的合成 |
2.2.3 双链cDNA与接头引物的连接 |
2.2.4 5′-cDNA的钓取 |
2.2.5 扩增产物的回收、克隆和测序 |
2.2.6 cDNAs的全长克隆: |
2.2.7 测序及序列分析 |
2.2.8 Northern blot分析 |
3 结果与分析 |
3.1 叶片总RNA和mRNA的质量分析 |
3.2 BnSmD1 cDNA 5′-RACE |
3.3 BnSmD1cDNA全长克隆 |
3.4 BnSmD1基因cDNA全序列与拟南芥,水稻,酵母以及人类中同源序列的比较 |
3.5 BnSmD1基因编码的蛋白质序列与结构分析 |
3.5.1 氨基酸序列分析 |
3.5.2 氨基酸序列同源分析 |
3.5.3 蛋白质二级结构分析及功能预测 |
3.6 Northern blot检测BnSmD1在甘蓝型天然无花瓣突变体Apet33-10及其野生型Pet33-10不同组织中的表达 |
4 讨论 |
5 小结 |
参考文献 |
文章综述 运用RACE技术和抑制性消减杂交技术研究未知功能基因 |
1 抑制性消减杂交技术 |
1.1 抑制性消减杂交简介及产生背景 |
1.2 抑制消减杂交的原理及步骤 |
1.2.1 分别抽提检测组(Tester)和对照组(Driver)m RNA并反转录为双链cDNA同时补平cDNA的末端 |
1.2.2 碱基限制酶酶切tester和driver |
1.2.3 接头(adaptor)的设计与连接 |
1.2.4 两次消减杂交 |
1.2.5 两轮抑制PCR |
1.2.6 建立消减文库 |
1.3 SSH技术与其他基因功能表达分析技术的比较 |
1.4 几种主要基因差异表达分析方法的优缺点比较 |
1.4.1 DDRT-PCR |
1.4.2 RDA |
1.4.3 DSD |
1.4.4 SAGE |
1.4.5 GEF |
1.4.6 cDNA3′端限制酶切片段显示 |
1.4.7 M1 |
1.5 抑制消减杂交的应用 |
1.5.1 抑制消减杂交技术在植物基因克隆上的应用 |
1.5.2 抑制消减杂交技术与基因芯片技术的结合 |
1.5.3 抑制消减杂交技术在免疫,疾病方面的应用 |
1.5.4 抑制消减杂交技术在发育的基因调控方面的研究应用 |
1.5.5 抑制消减杂交技术在研究应激对生命体影响方面的应用 |
1.5.6 抑制消减杂交技术用于分析微生物的基因组差异 |
1.6 展望 |
2 RACE-cDNA末端快速扩增技术——Rapid Amplification of cDNA Ends |
2.1 RACE技术简介 |
2.1.1 RACE技术产诞生的技术背景 |
2.1.2 RACE技术基本原理 |
2.1.3 RACE技术的优点 |
2.2 RACE技术的缺点及改进 |
2.2.1 克隆效率受反转录效率的限制 |
2.2.2 克隆效率受PCR反应效率的限制 |
2.3 PCR反应特异性差带来扩增背景 |
2.3.1 TdT酶加尾的局限性及改进方法 |
2.3.2 SLIC-PCR |
2.3.3 LA-PCR |
2.3.4 Marathon PCR |
2.3.5 SMART-RACE |
2.3.6 RLM-RACE |
2.4 RACE技术在其他方面的应用 |
2.4.1 用于构建cDNA文库 |
2.4.2 用于筛选cDNA文库 |
2.4.3 用于克隆已知片段的旁侧序列 |
2.4.4 用于定点删除序列 |
2.4.5 用于同源基因克隆 |
2.4.6 与生物信息学相结合 |
3 小结 |
参考文献 |
在读硕士期间发表论文情况 |
致谢 |
(9)晕船及适应过程中大鼠血浆及脑氨基酸含量变化(论文提纲范文)
1 材料与方法 |
1.1 动物模型及分组 |
1.2 实验方法 |
1.3 试剂与仪器 |
1.4 统计学方法 |
2 结果 |
2.1 模拟晕船刺激大鼠的高岭土摄入量的变化(表1) |
2.2模拟晕船刺激大鼠血浆及脑组织氨基酸变化 |
2.2.1血浆游离氨基酸变化 (表2) : |
2.2.2 脑游离氨基酸变化(表3): |
2.2.3 血浆内支链氨基酸/芳香族氨基酸 (BCAA/AAA) 、必需氨基酸/游离氨基酸总量 (EAA/TAA) 比值的变化: |
2.2.4 脑内谷氨酸/γ-氨基丁酸 (Glu/GABA) 的比值变化: |
3 讨论 |
(10)抑制消减杂交及其应用(论文提纲范文)
1 抑制消减杂交的原理及步骤 |
1.1 |
1.2 四碱基限制酶酶切tester 和driver。 |
1.3 接头 (adaptor) 的设计与连接 |
1.4 两次消减杂交 |
1.5 两轮抑制PCR |
1.6 建立消减文库 |
2 SSH的应用 |
2.1 SSH在免疫、疾病方面的应用 |
2.2 发育的基因调控方面的研究应用 |
2.3 SSH在研究应激对生命体影响方面的应用 |
2.4 SSH用于分析微生物的基因组差异 |
2.5 SSH在肉质相关性状研究中的应用 |
3 SSH的优缺点和展望 |
四、晕船易感大鼠脑干组织消减cDNA文库的构建(论文参考文献)
- [1]鸭卵泡发育差异表达基因抑制性消减文库的构建及分析[D]. 卢立志. 浙江大学, 2011(12)
- [2]多羔和单羔奶山羊发情期卵巢组织差异表达基因的筛选、鉴定及分析[D]. 朱广琴. 西北农林科技大学, 2011(03)
- [3]鸡与鹌鹑属间杂交种胚胎肌肉组织发育相关基因的筛选[D]. 米拉古丽·加尔恒. 石河子大学, 2010(03)
- [4]籽鹅卵巢组织基因差异表达及产蛋相关基因定量的研究[D]. 康波. 吉林大学, 2009(08)
- [5]氧硫化碳在检疫处理梨黑斑病菌中的应用及其分子机理研究[D]. 雷思勤. 四川农业大学, 2009(07)
- [6]与晕船有关的铁蛋白基因的表达变化[J]. 周利梅,郭俊生,李敏. 中国职业医学, 2008(01)
- [7]抑制性消减杂交技术及其在动物基因研究中的应用[J]. 陶金忠,张勇,杨永新,张进隆,赵兴绪. 动物医学进展, 2007(05)
- [8]甘蓝型油菜小核糖核蛋白BnSmD1全长cDNA的克隆与表达分析[D]. 袁晓萌. 四川大学, 2007(05)
- [9]晕船及适应过程中大鼠血浆及脑氨基酸含量变化[J]. 李宜谦,蔡懿灵,郭俊生. 营养学报, 2006(06)
- [10]抑制消减杂交及其应用[J]. 邱志鹏,王翀. 生物技术通报, 2006(S1)