体外扩增对脐血细胞造血功能的影响

一、体外扩增对脐血细胞重建造血功能的影响（论文文献综述）

冯悦^[1]（2019）在《UM171类似物体外扩增脐血造血干/祖细胞的效果评价及机制研究》文中进行了进一步梳理目的:造血干细胞（Hematopoietic stem cells,HSCs）是有自我更新潜力,并能够在人的一生中持续多向分化以形成多谱系血液细胞的一种成体干细胞。临床上主要是用造血干细胞移植（Hematopoietic stem cell transplantation,HSCT）治疗多种血液系统疾病如造血系统恶性肿瘤,遗传缺陷和自身免疫性疾病和某些实体瘤。然而,人白细胞抗原（Human leukocyte antigen,HLA）配型困难是限制骨髓或动员外周血HSCT临床应用的最大障碍。脐血来源的HSCs免疫原性低,可降低移植物抗宿主病（Graft versus host disease,GVHD）的发生率,且细胞增殖潜力强,收集方便,具有更广阔的临床应用前景。但是,由于单份脐血细胞量过少,限制了其临床应用,因此可体外扩增脐血HSCs的药物成为研究热点。造血干细胞激动剂UM171是现阶段扩增脐血HSCs最优的小分子化合物。方法:首先,我们使用免疫磁珠法富集脐血中的CD34+细胞,构建含细胞因子组合的体外培养体系,以及以流式细胞术为主要检测手段的药物筛选体系。在此基础上,对合成的37种UM171小分子化合物进行了初筛、复筛,根据它们对脐血CD34+CD38-细胞的扩增效果和生物活性（EC50值）,挑选出最优化合物,并确定佳扩增浓度。之后,使用流式细胞术对扩增效果进行了验证,使用Metho Cult?H4434半固体培养基对培养后的细胞造血功能进行评价。接着,为探索化合物11扩增效果的机制,我们检测了培养后各亚型细胞的凋亡（Annexin-V凋亡检测）,周期（Ki67/7-AAD胞内染色周期检测）和细胞增殖分裂（CFSE）情况,并使用实时荧光定量PCR（Real-time quantitative PCR,RTq PCR）检测了HSCs自我更新相关基因的表达情况。结论:根据初筛结果,我们选出了6个潜力化合物,择其二进行了复筛,根据它们对脐血CD34+CD38-细胞的扩增效果和生物活性（EC50值）,得到化合物11为最优化合物,并确定了其佳扩增浓度为165n M,最佳浓度时的扩增效果显着优于多种HSCs扩增药物（遗憾的是,化合物11的效果未能企及UM171）,扩增后的细胞保持完整的造血集落形成能力。机制研究发现,化合物11对细胞凋亡无显着影响,对长期HSCs（Long termHematopoietic stem cells,LT-HSCs）和造血干祖细胞（Hematopoietic stem/progenitor cell,HSPCs）细胞周期进程也无显着改变。细胞分裂实验发现化合物11会减缓HSPCs的分裂,且化合物11可以保持更高的BMI1基因表达,这对HSCs的自我更新式分裂具有重要意义。总的来说,化合物11生物活性高,扩增效果佳,培养后的细胞保持着完整的多谱系分化潜力。机制研究发现,化合物11可能是通过减缓HSPCs分裂速度,避免耗竭,并促进干细胞自我更新式分裂,从而实现扩增效果。意义:本研究合成了37种新小分子化合物,并对其扩增脐血HSCs的效果进行了检验、筛选,发现了一种具有很好扩增效果的新型小分子化合物11。有望从这一新小分子化合物结构中探寻UM171结构活性关系,为寻找更高效的HSCs扩增剂奠定基础。

苏约翰^[2]（2014）在《骨形成蛋白对造血干细胞体外扩增特性和生理功能的影响》文中认为造血干细胞体外培养是解决造血干细胞临床移植中数量不足的主要途径,但由于体外培养条件与体内造血微环境存在很大差异,扩增后造血干细胞不仅在数量上无法充分满足临床需求,而且其生理功能也可能受到一定的影响。研究造血微环境中的调控因子对造血干细胞生长发育的影响能够为优化体外培养条件提供重要的依据。骨形成蛋白（BMPs）表达于骨髓造血微环境,在造血调控中发挥重要作用。本文以新鲜分离的脐血CD34+细胞为起始,使用含干细胞生长因子（SCF）、血小板生成素（TPO）和Flt-3配体（FL）的无血清培养基,考察了BMP蛋白亚型和浓度对造血干/祖细胞体外扩增特性的影响,并进一步通过NOD/SCID小鼠移植实验,考察了BMPs对扩增后造血细胞生理功能的影响。结果如下：（1）在本文考察的浓度范围内BMP2对总细胞和造血干/祖细胞的扩增倍数、扩增后造血干/祖细胞的集落形成能力以及培养物中各系血细胞的组成均没有影响；（2）在培养体系中添加25ng/ml BMP4和5ng/ml BMP7,对提高总细胞和造血干/祖细胞的扩增倍数有一定的促进作用；（3）采用NOD/SCID小鼠模型评价了培养体系中添加5ng/ml BMP2或BMP7扩增后细胞的生理功能,发现添加5ng/ml BMP7对培养物的体内植入能力和造血重建功能均有促进作用,而添加5ng/ml BMP2对扩增后细胞的生理功能没有影响。以上研究结果为优化脐血造血干细胞体外培养环境,实现干细胞有效扩增,促进其临床应用提供了依据。

刘颖^[3]（2011）在《人脐血基质细胞联合移植促进造血细胞归巢植入及支持造血重建的实验研究》文中研究指明造血微环境（hematopoietic inductive microenvironment,HIM）是支持和调节造血干/祖细胞（haemopoietic stem/progenitor cell,HSPC）生长发育的内环境,其结构和功能的完整统一是维系造血功能正常进行的重要环节。作为造血微环境的重要组成部分,基质细胞可能通过形成造血干细胞（hematopoietic stem cell,HSC）生长的“龛”,分泌造血生长因子（hematopoietic growth factor,HGF）和细胞外基质（extracellular matrix,ECM）等参与造血细胞的自我更新、增殖分化和归巢定位,在免疫调节方面也具有重要的作用。深入探讨基质细胞对骨髓造血功能的影响,从修复或重建骨髓微环境正常功能入手治疗造血功能损伤具有重要的理论价值和实际意义。基质细胞由间充质干细胞（mesenchymal stem cell,MSC）分化而来,是一个包括成纤维细胞、内皮细胞、成骨细胞、脂肪细胞、巨噬细胞和网状细胞等成分复杂的异质细胞群。自1977年Dexter在体外培养出人骨髓基质细胞（human bone marrow stromal cells,hBMSCs）获得成功后,人们对hBMSCs进行了深入的研究。经实验研究和临床实践证实,hBMSCs体外培养扩增联合HSC回输是重建造血功能的有效方法。但hBMSCs来源受限,采集骨髓增加供者痛苦和风险,且细胞数量及增殖分化潜能随供者年龄增加而下降。自体移植中患者自身基质细胞存在异常,而异体移植亦有可能带来移植物抗宿主病（graft-versus-host disease,GVHD）等免疫相关问题,均限制了hBMSCs在临床上的广泛运用。人脐血来源丰富,取材方便,具有未成熟的干/祖细胞比例高且免疫原性较低等特点,在多种造血系统恶性疾病临床治疗中具有潜在的应用价值。本课题组长期从事人脐血源基质细胞（human umbilical cord blood-derived stromal cells,hUCBDSCs）及脐血造血微环境的研究,前期研究通过特定的细胞因子使hUCBDSCs得以有效扩增,扩增后的hUCBDSCs在细胞成分和免疫表型上与hBMSCs相似,能够分泌表达多种细胞因子,具备造血基质细胞的基本特征。以hUCBDSCs为滋养层的培养体系能有效支持脐血CD34+细胞体外扩增,特别对于促巨核细胞集落形成单位（colony forming unit-megakaryocte,CFU-Mk）形成的作用明显优于hBMSCs,提示hUCBDSCs在促进巨核系增殖分化成熟方面可能具有重要的意义。深入探讨hUCBDSCs移植在体内支持和调控造血、重建造血微环境的作用可为造血功能损伤修复治疗提供新的思路。基于上述分析,本课题首先建立两种不同来源基质细胞滋养层（hUCBDSCs和hBMSCs）培养体系,采用CCK-8法和Transwell法分别观察两种基质细胞对脐血单个核细胞（human umbilical cord mononuclear cells,hUCB-MNCs）增殖、粘附和迁移的影响,并采用RT-PCR法检测hUCBDSCs对归巢相关分子mRNA的表达情况。在此基础上建立BABL/c小鼠造血微环境辐照损伤模型,采用hUCB-MNCs单移植,或分别联合两种不同来源基质细胞共移植的方法,比较观察两种基质细胞促进造血细胞体内归巢与植入、重建造血微环境及支持造血重建的作用,为安全有效的临床移植治疗提供新的辅助措施和手段。方法:1.体外构建hUCBDSCs和hBMSCs两种不同来源基质细胞滋养层培养体系。采用CCK-8法和Transwell法分别检测两种基质细胞对hUCB-MNCs体外增殖、粘附和迁移的影响;采用RT-PCR法检测hUCBDSCs对归巢相关因子（SDF-1、CXCR-4、ICAM-1、VCAM-1、HCAM、PECAM-1、Fn）mRNA的表达情况。2.以近交系BABL/c小鼠作为受体鼠,经60COγ射线致死剂量8.5 Gy全身照射预处理后分别接受不同剂量hUCB-MNCs（2、4、6或8×106/只）单移植,或联合hUCBDSCs（2×106/只）共移植,移植后第6周流式细胞仪检测小鼠骨髓人源CD45+细胞植入率。3.采用CM-DiI荧光染料预染hUCB-MNCs,辐照后BABL/c小鼠分别接受hUCB-MNCs（2×106/只）单移植,或联合两种不同来源基质细胞（2×106/只）共移植。激光共聚焦显微镜追踪观察移植后荧光标记hUCB-MNCs在小鼠体内的迁移分布情况,比较各组造血细胞归巢率。4.辐照后小鼠分别接受hUCB-MNCs（2×106/只）单移植,或联合两种不同来源基质细胞（2×106/只）共移植。观察移植后各组小鼠存活情况,记录生存率;动态检测外周血血象恢复情况,骨髓组织病理切片观察骨髓病理变化;不同时相点计数各组小鼠骨髓成纤维细胞集落形成单位（CFU-F）、脾集落形成单位（CFU-S）、粒/巨噬细胞集落形成单位（CFU-GM）和巨核细胞集落形成单位（CFU-Mk）产率。结果:1. hUCBDSCs对脐血单个核细胞体外增殖、粘附和迁移能力的影响同hBMSCs共培养组和hUCB-MNCs单独培养组相比较,hUCB-MNCs在hUCBDSCs共培养条件下增殖能力显着增强。两种基质细胞均能促进hUCB-MNCs的粘附,且共培养后hUCB-MNCs迁移能力也显着（P<0.05）强于无基质细胞支持对照。hUCBDSCs明显表达与造血细胞归巢植入密切相关的粘附分子、细胞因子及受体（SDF-1、CXCR-4、ICAM-1、VCAM-1、HCAM、PECAM-1、Fn）mRNA,揭示其对造血细胞在体内的归巢和植入具有重要作用。2. hUCBDSCs联合移植促进造血细胞归巢和植入辐照后小鼠分别接受不同剂量hUCB-MNCs（2、4、6或8×106/只）单移植,或联合hUCBDSCs（2×106/只）共移植。采用不同剂量的hUCB-MNCs单移植后的植入率随hUCB-MNCs输注量增加而增长。hUCBDSCs联合移植能不同程度提高小鼠骨髓中人CD45+细胞植入比例,尤其当输注低剂量hUCB-MNC（s2×106/只）时,hUCBDSCs共移植较单移植的植入率提高最为显着。激光共聚焦显微镜下观察CM-DiI标记的hUCB-MNCs在移植后2～3天主要归巢至骨髓和脾脏。移植后48小时,hUCBDSCs共移植组归巢率显着（P<0.05）高于hBMSCs共移植组和单移植组,显示移植后早期hUCBDSCs能促进造血细胞向骨髓迁移归巢。3.hUCBDSCs联合移植修复受损微环境,支持造血重建两种基质细胞共移植组在移植后均能促进小鼠存活,血象恢复较快,在移植后28天内恢复至照射前水平。其中,hUCBDSCs共移植组血小板受抑程度较轻,回升也较快,并于移植后21天恢复至照射前水平;h BMSCs共移植组白细胞于移植后10天迅速回升,在此后恢复趋势高于hUCBDSCs共移植组;共移植两组间血红蛋白变化趋势无显着性差异。hUCBDSCs联合移植移植后促进骨髓组织恢复,重建受损微环境,提高CFUs（CFU-F,CFU-S,CFU-GM,CFU-Mk）产率,特别是CHU-Mk数量较h BMSCs联合移植增多,提示hUCBDSCs对于促巨核系增殖分化具有重要作用。结论:1. hUCBDSCs能促进脐血单个核细胞增殖、粘附和迁移,且促增殖能力较h BMSCs强。人脐血源基质细胞显着表达一些归巢相关因子的mRNA。2. hUCBDSCs联合移植能提高移植后小鼠造血植入率,特别当造血细胞输注为低剂量时,这种作用更加显着。3. hUCBDSCs联合移植能促进造血细胞早期迁移归巢至骨髓和脾脏,提高归巢效率。4. hUCBDSCs联合移植能提高小鼠存活,促进移植后造血重建并修复受损微环境。

许力^[4]（2009）在《脐血造血细胞体外扩增的研究进展》文中进行了进一步梳理

袁雅红^[5]（2008）在《人胎盘源间充质干细胞对脐血单个核细胞体外生长的支持作用及体内移植促进造血重建的实验研究》文中认为间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）是目前倍受关注的一类具有多向分化潜能的成体干细胞。在不同的诱导条件下,MSCs可分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞等。MSCs的主要来源为成人骨髓,但成人骨髓源MSCs的细胞数量及增殖分化潜能会随着年龄的增大而下降,且病毒感染率较高,此外供者MSCs的采集需行骨髓穿刺术,因而MSCs的临床应用存在很大的局限。近年的研究表明,从胎盘中可分离出MSCs,它们和骨髓MSCs一样,在合适的培养条件下具有多向分化能力。MSCs作为骨髓造血微环境中的重要组成成分,它通过分泌多种造血生长因子以及细胞与细胞间的直接接触等方式作用于造血干细胞（hematopoietic stem cells,HSCs）,因而在造血调控中发挥重要的作用。目前,MSCs已被用来体外支持HSCs扩增,体内联合HSCs移植促进造血重建。本研究在成功分离培养人胎盘源间充质干细胞（placenta-derived mesenchymal stem cells,PMSCs）的基础上,探讨人PMSCs在体内和体外支持造血的功能效应。本文分为两部分。第一部分阐述了人PMSCs的分离培养和鉴定,并探讨人PMSCs对脐血单个核细胞（MNCs）体外生长的支持作用。将人胎盘组织经胶原酶消化、贴壁和传代培养获得人PMSCs,运用流式细胞仪检测其表面标志,分别联合应用β-甘油磷酸钠、维生素C、地塞米松体系和3-异丁基-1-甲基黄嘌呤、胰岛素、吲哚美辛、地塞米松体系将其诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞,继而采用碱性磷酸酶检测和vonkossa染色对其进行成骨分化鉴定,采用油红染色对其进行脂肪分化鉴定。将用密度梯度离心法分离的脐血MNCs和传代后的PMSCs进行共培养,通过细胞计数和流式细胞仪分别检测造血细胞的生长情况。结果显示:1.从人胎盘组织中成功分离和培养PMSCs,贴壁细胞呈成纤维细胞状,经流式细胞仪检测其表型为CD29+、CD44+、CD105+、CD106+、CD166+、CD34-、CD45-、HLA-DR-;2.PMSCs经成骨诱导3周后,碱性磷酸酶染色呈强阳性,von kossa染色可见明显钙结节。PMSCs经成脂诱导2周后,油红染色呈阳性,有明显的脂滴出现;3.人PMSCs+脐血MNCs共培养组的细胞总数和CD45+细胞数在各培养时间点均明显高于对照组,在培养第7天,CD45+、CD14+及CD19+细胞数共培养组也明显高于对照组。结果表明,人PMSCs可以作为滋养层细胞有效支持脐血MNCs的体外生长。第二部分利用同种异基因小鼠骨髓移植模型,比较经骨髓腔内注射（intra-bonemarrow injection,IBMI）和外周静脉输注（intravenous injection,Ⅳ）两种途径移植小鼠骨髓单个核细胞（BMNCs）后受体早期的造血重建情况,建立了小鼠IBMI技术平台,并利用IBMI技术初步探讨了人PMSCs联合脐血MNCs共移植入SCID鼠体内后的早期造血重建效应。以BALB/c小鼠为供体,通过IBMI和Ⅳ两种途径将其BMNCs移植入经致死量辐照预处理的C57BL/6受鼠体内。60只受鼠随机分为3组:骨髓腔内注射高剂量组1（IBM1组）、骨髓腔内注射低剂量组2（IBM2组）、尾静脉注射组（Ⅳ组）,每组20只。在骨髓移植后1、3、6、9 d分别计数各组受鼠胫骨骨髓腔内细胞总数,并用流式细胞仪检测供体植入水平（供体来源细胞总数、供体来源髓系细胞数）。以人PMSCs和脐血MNCs为供体,通过IBMI方法或结合Ⅳ方法,将两种细胞联合或单独移植入经亚致死量辐照预处理的SCID受鼠体内。9只受鼠随机分为3组:联合移植A组（PMSCs+脐血MNCs,IBMI）、单独移植B组（脐血MNCs,IBMI）、联合移植C组（PMSCs经IBMI,脐血MNCs经Ⅳ）,每组3只。在移植后14 d取各组SCID小鼠注射侧和对侧胫骨腔内骨髓细胞,并用流式细胞仪检测分析人CD34+、CD45+细胞的植入水平。结果显示:1.IBM1组和IBM2组注射侧于移植后6 d胫骨骨髓腔内细胞总数、供体来源细胞总数、供体来源髓系细胞总数均明显高于Ⅳ组;2.SCID小鼠移植后14 d,B组注射侧及对侧胫骨骨髓腔内的人CD34+、CD45+细胞的百分比均明显低于A组小鼠的注射侧和对侧。结果表明,IBMI较Ⅳ更能促进同种异基因骨髓移植后的早期造血功能重建;人PMSCs可以增加脐血MNCs的植入,促进造血重建。综上所述,本实验从人胎盘组织中成功分离培养获得PMSCs,人PMSCs在体外对脐血MNCs的生长有明显的支持作用。通过IBMI技术将人PMSCs与脐血MNCs共移植于SCID小鼠体内,人PMSCs可有效促进脐血MNCs的早期造血重建。这为进一步研究人PMSCs体内和体外支持造血的相关分子机理奠定了实验基础。

许力,林金盈,毛平^[6]（2008）在《白细胞介素6/可溶性白细胞介素6受体对人脐血单个核细胞扩增及归巢能力的影响》文中提出目的:体外扩增脐血造血细胞的目的是促进脐血造血细胞的植入能力,并重建受体的造血功能,而这和脐血造血干/祖细胞的细胞数和体外扩增后细胞的归巢能力密切相关。实验拟观察白细胞介素6/可溶性白细胞介素6受体对人脐血单个核细胞体外扩增及扩增后对归巢有关的CD49d和CXCR4表达的影响。方法:实验于2005-06/2006-03在广州医学院附属广州市第一人民医院血液实验室完成。①实验材料:10份足月顺产健康新生儿脐血标本由广州市第一人民医院妇产科提供,产妇对实验知情同意,实验经医院伦理委员会批准。②实验方法:将由新鲜脐血标本分离的单个核细胞接种于含有不同细胞因子组合的无血清无基质培养体系中培养7d。根据不同细胞因子组合实验分组为:对照组、干细胞因子+FLT3配基+促聚核细胞生成因子组（简称SFT组）、干细胞因子+FLT3配基+促聚核细胞生成因子+白细胞介素6组（简称SFT6组）、干细胞因子+FLT3配基+促聚核细胞生成因子+白细胞介素6/可溶性白细胞介素6受体组（简称SFT6s组）。SFT6s组根据可溶性白细胞介素6受体浓度又分为50,100,500,1000μg/L组。③实验评估:在0,7d检测有核细胞数,CD34+细胞数及CD34+CXCR4+,CD34+CD49d+的细胞数。结果:①培养7d后,SFT、SFT6、SFT6s组有核细胞数及CD34+细胞数扩增效果优于对照组（P<0.05）,SFT、SFT6、SFT6s3组间差异不显着（P>0.05）。②与对照组比较,SFT、SFT6、SFT6s组细胞因子组合均可提高脐血CD34+细胞上CD49d,CXCR4表达,3组间差异不显着（P>0.05）。③500,1000μg/LSFT6s组脐血单个核细胞扩增效果和CD49d和CXCR4表达均优于SFT,SFT6s组和100μg/LSFT6s组（P<0.05）,500,1000μg/LSFT6s组比较差异不显着（P>0.05）。结论:在干细胞因子+FLT3配基+促聚核细胞生成因子组合的基础上,加入白细胞介素6/可溶性白细胞介素6受体后可有效地扩增脐血细胞,并促进CD49d和CXCR4表达,对可溶性白细胞介素6受体浓度有一定的依赖性。

李回军^[7]（2007）在《PCNA-ASODN调节脐血CD34～+造血前体细胞体外扩增和分化的时间效应》文中提出背景与目的：人脐血富含造血干／祖细胞，是骨髓与外周血以外的另一种有效的造血前体细胞来源。近些年来脐血干细胞移植在治疗青少年及成人血液肿瘤和骨髓衰竭综合征方面取得了巨大成就，但由于单份脐血所能获得的有核细胞和CD34+细胞数量有限，限制了脐血干细胞移植在临床的广泛应用。脐血前体细胞的体外扩增是解决这一难题的有效途径之一，造血前体细胞在造血细胞因子的作用下在体外可大量扩增，但扩增的同时不可避免地伴随细胞的分化成熟，从而影响了其长期重建造血的能力。如何在扩增造血前体细胞的同时尽可能的保留其自我更新能力和多向分化潜能，成为当前的另一个研究热点。近年来，国内外主要在如何建立一个能在体外扩增更多的早期造血前体细胞的细胞因子组合方案及模拟骨髓造血微环境方面进行了大量的研究工作，而对于造血前体细胞的细胞周期的调控研究较少。造血细胞增殖分化过程不但受控于细胞因子，同时与细胞周期调控因子密切相关。增殖细胞核抗原（proliferationg cell nuclear antigen，PCNA）是重要的细胞周期调控蛋白，是促进细胞从G1期进入S期的关键因素，其在造血细胞增殖发育过程中也发挥重要作用。在前期研究的基础上，本实验拟于不同时间点通过反义核酸技术调控PCNA在脐血CD34+细胞中的表达，证实增殖细胞核抗原反义寡脱氧核苷酸（proliferating cell nuclear antigen antisense oligodeoxynucleotide，PCNA-ASODN）调节脐血CD34+细胞体外扩增的时间效应，寻找PCNA-ASODN作用的最佳时间点，以探讨造血前体细胞体外扩增时，对细胞周期调控进行干预的正确时机，以期能增加早期造血前体细胞的数量，提高体外扩增的效果；同时也为造血干细胞体外扩增技术提供一条新的途径。方法：采用免疫磁珠分离技术从新鲜脐带血中分离CD34+细胞，培养于含有SCF+IL-6+IL-3+Tpo+FL细胞因子组合的培养体系中。实验分4组：：①对照组：未转染PCNA-ASODN；②实验1组：于第48h转染PCNA-ASODN；③实验2组：于第72h转染PCNA-ASODN；④实验3组：于第96h转染PCNA-ASODN；所有实验组均于培养第3天半量换液，各实验组按预定时间点进行阳离子脂质体介导的PCNA-ASODN转染，在培养第7天收集细胞，显微镜观察并计数扩增情况，应用流式细胞仪技术检测其扩增后各种细胞的比例及细胞周期的变化情况，免疫细胞化学法检测细胞内PCNA表达情况。结果：与对照组相比，转染了PCNA-ASODN的3个实验组，其PCNA表达水平均比对照组低，其下调程度以实验3组最为明显；转染PCNA-ASODN的各实验组和对照组，有核细胞和CD34+细胞均得到了明显扩增，其中实验组有核细胞扩增倍数较对照组低，但CD34+CD38-细胞扩增倍数则较对照组高，尤以实验2组扩增最显着，达（55.1±4.2）倍；各实验组中CD34+细胞占有核细胞数的比例较对照组为高，体外扩增后CD34+CD38-细胞占CD34+细胞的比例也较对照组高，且两者均以实验1组的比例最高，分别为（42.6±2.0）％和（82.4±2.4）％；另外，培养前脐血CD34+细胞（92.6±3.5）％处于G0／G1期，培养后进入S／G2／M期的细胞均明显增多，但各实验组均较对照组进入S／G2／M期的比例少，以实验3组的比例减少最为显着，其S／G2／M期细胞的比例为（38.8±2.7）％。结论：在脐血CD34+细胞体外扩增的同时，于不同时间点转染低浓度的PCNA-ASODN，结果显示PCNA-ASODN对脐血CD34+细胞体外扩增过程的调节作用具有时间效应，不同时间点的PCNA-ASODN作用后获得的G0／G1期细胞比例、CD34+细胞比例以及CD34+CD38-细胞比例均不同，从而证明了在造血前体细胞体外扩增过程中，PCNA-ASODN可以延缓扩增过程中的细胞分化，提高早期造血前体细胞的扩增效果，但对细胞周期调控因子的干预应选择适合的时机，才能获得最佳的造血前体细胞体外扩增效果。

张曦^[8]（2006）在《VCAM-1基因修饰人脐血源基质细胞移植重建造血微环境功能》文中研究指明骨髓造血微环境（hematopoietic inductive microenvironment,HIM）是造血干/祖细胞生长发育的“土壤”,基质细胞作为造血微环境中的重要成分,不仅与造血干/祖细胞的归巢定位、增殖分化和自我更新密切相关,而且在某些血液系统疾病的发生、发展和转归过程中具有非常重要的作用,探讨基质细胞在造血调控中的作用需继续深入。人脐血中的细胞成分丰富且较骨髓和外周血更原始;脐血细胞具有来源广泛、采集方便、GVHD轻和高增殖的特点,临床应用前景广阔。目前对造血基质细胞的研究主要侧重于骨髓基质细胞,而对于脐血中是否存在基质细胞,脐血源基质细胞的生物学特点如何,能否作为一种新型的造血基质细胞来源等问题尚缺乏系统深入的研究;血管细胞粘附分子（vascular cell adhsion molecule-1,VCAM-1）是骨髓基质细胞参与造血调控不可缺少的粘附分子,它与受体整联蛋白（Integrin）家族中的α4β1特异性结合能起到固定造血干细胞于骨髓基质的作用,对造血干/祖细胞的增殖、分化、迁移中发挥重要调控作用。鉴于此,本课题将人脐血CD34+细胞,采用Dexter贴壁细胞培养体系行脐血源基质细胞培养,探讨人脐血细胞体外扩增基质细胞的可行性和有效性;研究人脐血源基质细胞微环境的造血支持作用;构建荧光蛋白标记的VCAM-1腺病毒载体并转染人脐血源基质细胞,移植给造血微环境辐射损伤裸鼠,探讨其对重建造血微环境功能及促进造血损伤修复的作用,为平战条件下造血功能损伤的救治提供新的辅助治疗措施。1.研究内容及方法:1.1分离人脐血CD34+细胞,采用Dexter贴壁细胞培养体系行脐血源基质细胞培养、传代扩增,采用光镜,电镜、组织细胞化学、免疫细胞化学和流式细胞仪等技术对脐血源基质细胞进行鉴定;1.2采用DNA重组技术,将目的基因VCAM-1克隆至含有报告基因EGFP的穿梭质粒;在BJ5183细胞中与腺病毒基因组进行同源重组,产生重组腺病毒;在脂质体介导下,将重组的腺病毒表达质粒转染293细胞,使腺病毒在293细胞中包装复制,并对转染后的293细胞进行荧光观测,检测培养上清目的蛋白的表达;用高效转染载

丁朝霞^[9]（2006）在《脐血用于妇科恶性肿瘤大剂量放化疗支持的基础研究》文中进行了进一步梳理[目的]本论文分为两部分： 第一部分：利用不同细胞因子组合体外扩增脐血单个核细胞（mononuclear cells，MNC）探讨MNC体外增殖作用以及理想的细胞因子组合。 第二部分：通过MNC移植BABL／c小鼠大剂量放疗模型进行体内重建造血及植入的研究，为脐血及其MNC在妇科恶性肿瘤中的应用打下基础。 [方法]第一部分：对同一份脐血采用两种细胞因子组合（TPO+FL+IL-6、TPO+FL+IL-6+IL-3）体外短期扩增9天，采用流式细胞技术检测MNC及CD34+细胞数量变化。 第二部分：把经亚致死量照射后建立的BABL／c小鼠大剂量放疗模型随机分为4组，分别由尾静脉注入脐血、新鲜及扩增后的MNC悬液和生理盐水，同时设空白对照组。比较各组小鼠的存活率及造血恢复情况，并应用多聚酶链式反应（PCR）和免疫组化方法观察小鼠体内人源细胞植入情况。按照扩增时细胞因子组合的不同，将输注扩增MNC组的小鼠分为两个亚组，比较两个亚组之间上述指标的差别。 [结果]第一部分：两种细胞因子组合均对脐血MNC及CD34+细胞有扩增作用，含IL-3的组合对脐血的扩增效果（8.96±0.52倍）优于不含IL-3组（6.28±0.16倍）。两组比较有显着性差异（P＜0.01）。 第二部分：各组小鼠均存活至实验结束；实验组造血恢复情况优于对照组（P＜0.05），脐血输注短期内外周血象恢复较MNC输注快；扩增前后MNC均可在BABL／c小鼠体内植入，形成供-受嵌合体并重建造血功能，植入率无显着性差异（P＞0.05）；输注扩增MNC的两个亚组各项指标无显着性差异（P＞0.05）。 [结论]第一部分：应用细胞因子组合FL+TPO+IL-6能够有效扩增脐血MNC及CD34+细胞数，使单份脐血达到成人移植所需的细胞数，加入IL-3可以大大增强这种扩增效果。 第二部分：体外扩增后的人脐血MNC仍保持其重建造血功能及植入潜能，IL-3加入细胞因子组合在不影响其体内重建造血及植入能力的同时增加了脐血MNC扩增效应。脐血MNC输注可以和脐血输注相结合来解决短期造血恢复延迟的问题。 总之，体外扩增可以有效解决单份脐血MNC含量少的问题，在其应用的细胞因子组合中IL-3具有积极意义，小鼠体内实验的结果为脐血用于妇科恶性肿瘤大剂量放化疗支持提供了依据。

孙元元^[10]（2006）在《体外扩增对脐血CD133～+细胞归巢相关分子表达的影响的研究》文中研究说明目的脐血（UCB）中富含原始造血干/祖细胞（HSPC）,但是由于单份脐血中造血干/祖细胞数量有限,仅适用于儿童或者低体重成年患者造血干细胞移植（HSCT）之需。如何提高造血干/祖细胞重建造血的潜能,使成年患者尤其是较大体重患者同样能受益于脐血移植,已成为近年造血干细胞移植领域研究的热点课题。国内外已有研究显示,细胞因子体外联合刺激脐血造血干/祖细胞扩增是目前应用最多、结果最可靠的方法。有研究证实,脐血体外扩增可以使脐血中CD34+ /CD38-干细胞和LTC-IC细胞数目增加,并具有使之在NOD/SCID小鼠中植入的能力。然而,又有研究显示,这些扩增后的细胞具有植入缺陷,表现为扩增后的HSPC归巢能力受损,从而影响HSPC增殖、分化以及造血和免疫功能的重建。为此,我们探讨了脐血CD133+造血干细胞体外扩增的可行性,以及细胞因子介导的体外扩增对HSPC归巢能力的影响。方法采用免疫磁珠阳性分选（MACS）方法,以分离纯化后的人UCB CD133+干细胞作为靶细胞,以含有SCF、IL-6、TPO及FL造血生长因子（HGF）组合的含血清培养基作为体外扩增培养体系。观察体外扩增中的有核细胞（NC）数和CD133抗原表达的变化,并分别于第4、7、10和14天,检测培养不同时间CD133+细胞表面粘附分子以及趋化因子

二、体外扩增对脐血细胞重建造血功能的影响（论文开题报告）

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、体外扩增对脐血细胞重建造血功能的影响（论文提纲范文）

（1）UM171类似物体外扩增脐血造血干/祖细胞的效果评价及机制研究（论文提纲范文）

（2）骨形成蛋白对造血干细胞体外扩增特性和生理功能的影响（论文提纲范文）

（3）人脐血基质细胞联合移植促进造血细胞归巢植入及支持造血重建的实验研究（论文提纲范文）

（4）脐血造血细胞体外扩增的研究进展（论文提纲范文）

（5）人胎盘源间充质干细胞对脐血单个核细胞体外生长的支持作用及体内移植促进造血重建的实验研究（论文提纲范文）

（6）白细胞介素6/可溶性白细胞介素6受体对人脐血单个核细胞扩增及归巢能力的影响（论文提纲范文）

（7）PCNA-ASODN调节脐血CD34～+造血前体细胞体外扩增和分化的时间效应（论文提纲范文）

（8）VCAM-1基因修饰人脐血源基质细胞移植重建造血微环境功能（论文提纲范文）

（9）脐血用于妇科恶性肿瘤大剂量放化疗支持的基础研究（论文提纲范文）

（10）体外扩增对脐血CD133～+细胞归巢相关分子表达的影响的研究（论文提纲范文）

四、体外扩增对脐血细胞重建造血功能的影响（论文参考文献）

• [1]UM171类似物体外扩增脐血造血干/祖细胞的效果评价及机制研究[D]. 冯悦. 暨南大学, 2019(02)
• [2]骨形成蛋白对造血干细胞体外扩增特性和生理功能的影响[D]. 苏约翰. 华东理工大学, 2014(05)
• [3]人脐血基质细胞联合移植促进造血细胞归巢植入及支持造血重建的实验研究[D]. 刘颖. 第三军医大学, 2011(12)
• [4]脐血造血细胞体外扩增的研究进展[J]. 许力. 内科, 2009(04)
• [5]人胎盘源间充质干细胞对脐血单个核细胞体外生长的支持作用及体内移植促进造血重建的实验研究[D]. 袁雅红. 苏州大学, 2008(11)
• [6]白细胞介素6/可溶性白细胞介素6受体对人脐血单个核细胞扩增及归巢能力的影响[J]. 许力,林金盈,毛平. 中国组织工程研究与临床康复, 2008(16)
• [7]PCNA-ASODN调节脐血CD34～+造血前体细胞体外扩增和分化的时间效应[D]. 李回军. 汕头大学, 2007(02)
• [8]VCAM-1基因修饰人脐血源基质细胞移植重建造血微环境功能[D]. 张曦. 第三军医大学, 2006(11)
• [9]脐血用于妇科恶性肿瘤大剂量放化疗支持的基础研究[D]. 丁朝霞. 青岛大学, 2006(02)
• [10]体外扩增对脐血CD133～+细胞归巢相关分子表达的影响的研究[D]. 孙元元. 苏州大学, 2006(12)

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