一、局灶性脑缺血后鼠脑组织tPA基因表达及其与细胞凋亡（论文文献综述）
陈丽斌[1]（2021）在《基于“脉腑”与“脾脉相关”理论探讨中风病脑脉燥变机制及健脾益智法调节MCAO大鼠内皮功能的研究》文中提出理论研究部分目的:旨在从脑脉的部位和生理特点的角度探讨缺血性脑卒中（ischemic stroke,IS）脑脉燥变的机制及防治方法。通过梳理中医脉腑理论,探讨脾脉相关的内涵,分析IS的病位特点,提出中风“燥”之因机说,阐明IS的基本病理与脾关系密切,确立脾虚而脉燥在IS病理变化中的主导地位,总结出健脾益智法可以通过健脾润脉祛燥改善脑脉燥变,达到治疗IS目的的理论依据。方法:梳理中医脉腑理论以及脾脉相关的理论认识,分析脑脉的部位和生理特点,利用“取象比类”这一中医学原创思维,从“诸涩枯涸,干劲皴揭,皆属于燥”的内燥病机理论深入探讨以脾虚为主导的脑脉燥变与IS的内在联系,结合健脾益智汤的组分、组方分析和导师团队的前期研究基础,为健脾益智法从健脾润脉祛燥角度治疗IS提供理论依据。结果:1.脉腑有常与变的生理特性。2.脾脉之间有着“以营为基、以濡为性、摄血纳津、以脾统脉”的相关深层内涵。3.脑脉因其独特的部位及生理特点,存在着易燥易变的局部病变机制,以脾虚为主导的脑脉燥变是中风病的基本病理和深危病机特点。无论是从脾之太阴濡脉、脾之藏营养脉、脾之散精通脉的机理,还是现代的临床和实验研究,都可为健脾润脉祛燥论治IS提供充分的依据。健脾益智汤的药物组分含有对IS有效的成分,在临床和实验研究中都有良好收效。实验研究部分目的:通过复制SD大鼠MCAO模型,采用神经功能受损评分、硝酸还原酶法、免疫组织化学法、酶联免疫分析、聚合酶链式反应、Western印迹杂交法,旨在观察血管内皮生物活性物质、生长因子、相关基因蛋白的表达,探讨健脾益智法对改善内皮功能以及模型大鼠神经功能的作用及可能机制。方法:雄性SPF级SD大鼠,随机分为空白组（Blank）、模型组（Model）、盐酸法舒地尔组（Hydrochloride fasudil,HF）、健脾益智组（JPYZ）,采用Zea Longa法复制大鼠MCAO模型。Blank组给予标准饲料和自主饮水,其余各组术后清醒即开始给药,分别持续3天、7天、14天,14.4m L/kg/d,每日1次。HF组腹腔注射盐酸法舒地尔混悬液（14.4m L/kg/d）,JPYZ组灌胃健脾益智汤（14.4m L/kg/d）,Model组给予等剂量生理盐水。采用硝酸还原酶法观察和分析各组大鼠脑内NO含量,免疫组织化学法检测eNOS、VEGF表达水平,ELISA检测VEGF含量,从内皮功能角度探讨健脾益智汤改善模型大鼠内皮功能的可能机制。采用实时荧光定量PCR法检测RhoA mRNA基因表达情况,Western Blot法检测ROCK2蛋白含量,从RhoA/ROCK2通路探讨健脾益智汤对模型大鼠内皮功能的可能调节机制。采用神经功能受损评分评价大鼠的神经功能,采用Western Blot法检测各组大鼠脑内Caspase-3的表达,从神经功能受损及细胞凋亡角度探讨健脾益智汤改善模型大鼠神经功能的可能机制。结果:1.NO、eNOS、VEGF检测:与Blank组比较,Model组的NO、e NOS、VEGF水平升高,差异显着（P<0.01）;与Model组比较,HF组、JPYZ组的NO、eNOS、VEGF（免疫组化法）的水平升高显着,差异有统计学意义（P<0.01）。HF组和JPYZ组对NO、eNOS、VEGF的影响趋势大致相同,随着干预时间的延长,疗效越好。2.RhoA mRNA、ROCK2检测:与Blank组比较,Model组的Rho A m RNA、ROCK2水平升高,差异显着（P<0.01）;与Model组比较,HF组、JPYZ组的Rho A mRNA、ROCK2水平降低显着,差异有统计学意义（P<0.01）。HF组和JPYZ组对Rho A、ROCK2均有抑制作用。3.神经功能受损评分和Caspase-3检测:与Blank组比较,Model组的神经功能受损评分、Caspase-3水平升高,差异显着（P<0.01）;与Model组比较,HF组、JPYZ组的神经功能受损评分、Caspase-3水平均有降低,在14d时间点降低最为显着,差异有统计学意义（P<0.01）。HF组和JPYZ组对神经功能受损评分和Caspase-3的影响趋势大致相同,随着干预时间的延长,表现出更好的保护作用。结论:1.脉腑有常与变的生理特性。2.脾脉之间有着“以营为基、以濡为性、摄血纳津、以脾统脉”的相关深层内涵。3.脑脉因其独特的部位及生理特点,存在着易燥易变的局部病变机制,与心肾之水火不交、脾肺之燥湿不济皆有关系,但脾虚湿不济燥是其根本原因,以脾虚为主导的脑脉燥变是中风病的基本病理和深危病机特点。脑脉燥变可认为是血管内皮功能障碍的一种病理状态,脾之太阴濡脉、脾之藏营养脉、脾之散精通脉可达到脑脉祛燥防变的目的,从脾论治IS有理据可依。兼之健脾益智汤中的各个组分药物含有对IS有效的成分,其配伍应用能健脾润脉祛燥,改善内皮功能障碍,改善IS脑脉燥变的病理状态,减轻诸多病理因素的损害,同时调动脾气的作用以主动修复脑脉燥变的损伤,防止突发风症,对IS发挥整体的治疗作用。4.SD大鼠大脑中动脉栓塞造模方式成功复制了MCAO模型,健脾益智汤可有效改善MCAO大鼠的神经功能受损症状。5.健脾益智汤可能通过升高NO、eNOS、VEGF的水平,抑制RhoA、ROCK2和Caspase-3的活化,使血管内皮功能障碍得以改善,达到保护作用。
王福星[2]（2021）在《青年缺血性脑卒中后海马齿状回神经分化及紫杉叶素干预缺血性脑卒中的作用及机制研究》文中指出第一章青年缺血性卒中后海马齿状回神经分化机制研究目的:观测缺血性卒中后青年及老年沙鼠神经功能康复、DG区细胞增殖、神经母细胞分化及神经再生差异,探讨青年缺血性卒中后神经再生的调节机制,为青年缺血性卒中提供治疗靶点。方法:实验设有青年与老年组,并利用沙鼠构建短暂性前脑缺血模型。通过Morris水迷宫及神经功能评分检测缺血性卒中后沙鼠神经、认知及运动功能康复情况;免疫组织化学染色观察缺血损伤后,海马CA1区神经元损伤、DG区细胞增殖、神经母细胞分化情况;免疫荧光NeuN/BrdU共定位检测神经元再生情况,Western blot检测Erk信号通路及自噬相关蛋白表达水平。并借用Erk抑制剂（U0126）及自噬抑制剂（3MA）观察青年缺血性卒中后DG区细胞增殖、神经母细胞分化及神经再生情况。结果:1.水迷宫及神经功能评分显示:缺血性卒中后,青年沙鼠认知及运动功能康复能力优于老年沙鼠。2.免疫组织化学结果显示:青年沙鼠DG区细胞增殖、神经母细胞分化及缺血·性卒中后28天DG区神经再生数量均显着高于老年沙鼠。3.Western blot结果显示:缺血性卒中后,青年沙鼠海马区Erk信号通路及自噬相关蛋白表达高于老年沙鼠。4.Erik或自噬抑制剂处理后,青年沙鼠认知、运动功能、神经母细胞分化、神经再生能力下降。结论:短暂性前脑缺血后,青年沙鼠通过调控Erk信号通路及自噬相关蛋白水平的表达促进细胞增殖、神经母细胞分化、神经再生,最终改善了认知功能缺失,促进了神经功能康复。第二章紫杉叶素抗缺血性卒中的保护作用及分子机制目的:研究紫杉叶素（Taxifolin,Tax）抗缺血性卒中损伤的保护作用及分子机制。方法:选取青年沙鼠和ICR小鼠随机分为假手术组（Sham）,模型（Isch）组,20mg/kg Tax+Isch组和40mg/kg Tax+Isch组。按照分组要求分别选取沙鼠通过双侧颈总动脉夹闭术构建短暂性前脑缺血模型,ICR小鼠通过大脑中动脉栓塞法构建局灶性缺血性卒中模型。采用CV染色对沙鼠海马CA1区细胞形态及数量进行评估。采用免疫组织化学染色观察小鼠及沙鼠NeuN、Iba1、GFAP、ZO-1、PECAM-1、DCX。采用Western Blot法观察Erk和Nrf2信号通路相关蛋白表达情况。结果:1.Tax干预明显改善了青年沙鼠前脑缺血性卒中后神经功能康复,减少海马CA1区神经元死亡,促进了 DG区神经分化;同时抑制胶质细胞的活化;增强了 ZO-1、PECAM-1的免疫表达;Tax处理明显提高缺血性卒中后海马区Erk信号通路的蛋白表达。2.Tax处理组明显减轻ICR小鼠局灶性脑缺血性卒中后神经损伤症状、减少脑梗死体积及减少海马CA1区及皮质区神经元死亡;同时抑制星形胶质细胞及小胶质细胞的活化;并且Tax处理明显提高半暗带Nrf2和HO-1的蛋白表达,减轻了缺血再灌注损伤诱导的凋亡。结论:1.Tax显着改善了前脑及局灶性脑卒中所致的神经元死亡,神经功能缺失;2.Tax显着降低了前脑及局灶性脑卒中后胶质细胞的活化;3.Tax显着改善前脑性脑卒中所致血脑屏障损伤且激活了 Erk信号通路关键蛋白的表达与其保护作用密切相关;4.Tax在局灶性脑卒中后通过激活Nrf2信号通路发挥了神经保护作用。
刘佳佳[3]（2021）在《活血凉血中药入脑有效成分抗缺血性脑卒中的作用及机制研究》文中研究表明第一章探讨活血祛瘀药丹参入脑有效成分丹参酮I对缺血性脑卒中的神经保护作用及机制目的:探讨丹参酮I（TSNI）对缺血性脑卒中（Cerebral ischemicstroke,CIS）的神经保护作用及其分子机制。方法:本研究通过网络药理学方法筛选出TSNI抗CIS的关键候选靶点,并对这些靶点进行富集分析和分子对接,以确定TSNI抗CIS的可能机制。接着,通过实验进一步验证了 TSNI抗CIS的作用机制。分别用2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色法和Longa法评估梗死体积和神经功能缺损症状。采用免疫组织化学染色方法检测NeuN的免疫活性,观察海马及皮层神经元的死亡情况。利用Western blot技术对预测的信号通路转导相关蛋白在体内外实验中进行了验证。结果:1.网络药理学研究获得TSNI治疗CIS的125个候选靶点;KEGG富集分析结果显示TSNI可能通过调控PI3K/AKT信号通路在CIS中发挥神经保护作用;分子对接结果显示TSNI分别与AKT及MAPK有较好结合力。2.体内实验结果表明,TSNI可显着地减小tMCAO诱导的小鼠脑梗死体积,减少神经元的死亡,改善神经功能缺损症状,并呈剂量依赖性。体外实验结果表明,TSNI预处理明显提高氧糖剥夺/复糖复氧（OGD/R）后HT-22细胞的细胞活力。3.TSNI干预可以明显激活CIS后小鼠海马区AKT和MAPK信号通路相关蛋白的表达水平。此外,抑制MAPK信号通路可以部分抵消TSNI在CIS中的神经保护作用,抑制AKT信号通路可以明显抑制TSNI在OGD/R中的增强细胞活力作用。结论:1.TSNI在tMCAO诱导的局灶性缺血性脑卒中及OGD/R诱导的体外模型中具有神经保护作用。2.TSNI通过多靶点、多途径在CIS中发挥神经保护作用,TSNI通过调控AKT和MAPK信号通路发挥抗CIS作用。本研究为TSNI的进一步开发利用提供了理论依据。第二章探讨凉血药紫草入脑有效成分紫草素对缺血性脑卒中的保护作用及机制目的:探讨紫草素（Shikonin,Ski）对缺血性脑卒中（Cerebral ischemic stroke,CIS）的神经保护作用及其作用机制。方法:将实验小鼠随机分为假手术组、给药组、I/R组和I/R术前给药组。采用短暂性大脑中动脉闭塞（transientmiddle cerebral occlusion,tMCAO）法制备急性缺血性脑卒中模型。Ski用含有1%DMSO的0.9%生理盐水稀释配置,按照25 mg/kg的浓度于术前3天开始灌胃给药,每天1次,末次给药30min后行tMCAO手术,假手术组则给予相同剂量的生理盐水。分别采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色法和Longa法评估小鼠脑梗死体积及神经功能缺损症状;利用免疫组织化学染色法观测缺血侧海马CA1区神经元的死亡情况;利用TUNEL染色法观察缺血侧海马CA1区细胞凋亡的情况;利用Western blot法检测缺血侧海马线粒体自噬相关蛋白,线粒体动力学相关蛋白以及凋亡相关蛋白的表达变化情况。结果:1.Ski可显着地减小tMCAO诱导的小鼠脑梗死体积,减少海马CA1区神经元的死亡以及TUNEL阳性细胞数,改善神经功能缺损症状。2.Ski干预可以显着提高CIS后小鼠海马区Mfn2和OPA1的蛋白表达水平,降低MUL1及Drp1的蛋白表达水平。3.Ski干预可以显着提高CIS后小鼠海马区BNIP3、NIX、PINK1、Parkin等线粒体自噬相关蛋白的表达水平。4.Ski干预可以显着降低CIS后小鼠海马区Cyt C、Caspase8、Cleaved-Caspase9、Caspase3等凋亡相关蛋白的表达水平。结论:1.Ski在tMCAO诱导的局灶性缺血性脑卒中中具有神经保护作用。2.Ski可以激活CIS后线粒体融合相关蛋白的表达,维持线粒体动力学的相对平衡。3.Ski通过启动CIS后线粒体自噬及抑制细胞凋亡,进而发挥抗CIS作用。本研究为进一步探讨Ski抗缺血性脑卒中的分子机制提供了理论依据。
张智慧[4]（2021）在《针刺调控神经细胞自噬与凋亡以延长脑梗死溶栓时间窗的研究》文中提出目的:明确针刺早期干预对延长脑梗死溶栓时间窗的效应,基于“自噬凋亡共同影响缺血半暗带神经细胞死亡进程”理论,探讨针刺延长脑梗死溶栓时间窗的作用机制。方法:采用SPF级SD大鼠,以改良的自体血栓栓塞模型作为脑梗死研究对象,使用rtPA为静脉溶栓药物,“醒脑开窍”针刺法为干预手段。分为实验一与实验二两部分。实验一、针刺延长脑梗死溶栓时间窗的效应研究:将80只SD大鼠随机分组为假手术组、模型组、4.5h溶栓组组、6h溶栓组、7.5h溶栓组、针刺+4.5h溶栓组、针刺+6h溶栓组、针刺+7.5h溶栓组。观察早期针刺干预对各组大鼠脑梗死体积、神经行为学评分、颅内溶栓出血性转化及脑水肿的影响,以明确针刺延长脑梗死溶栓时间窗的效应。实验二、针刺调控自噬凋亡交互作用延长脑梗死溶栓时间窗的机制研究:在明确针刺延长脑梗死溶栓时间窗效应后,将50只SD大鼠随机分组为假手术组、模型组、6h溶栓组组、针刺+6h溶栓组;采用Western blot、Real time-PCR检测不同组间自噬标志蛋白LC3、Beclin1及p62的表达情况。分组不变,采用Western blot观察不同组别抗凋亡蛋白Bcl2和促凋亡蛋白Bax的表达情况,并观察Bc12/Beclin1、Bcl2/Bax 比值变化,以明确针刺延长脑梗死溶栓时间窗的作用机制。结果:（1）各组大鼠神经行为学评分:治疗后24h评分,与模型组比较,4.5h溶栓组神经行为学评分降低（P<0.05）,而时间窗外溶栓组,6h溶栓组、7.5h溶栓组行为学评分差异无统计学意义（P>0.05）。与模型组、6h溶栓组相比,针刺+6h溶栓组神经行为学评分均降低（P<0.05）。但针刺+7.5h溶栓组与模型组、7.5h溶栓组相比,神经行为学评分均差异无统计学意义（P>0.05）。表明针刺可以改善溶栓时间窗外（6h）溶栓大鼠的神经行为学评分。（2）各组大鼠脑梗死体积百分比:与模型组相比,4.5h溶栓组、针刺+4.5 h溶栓组、针刺+6h溶栓组脑梗死体积缩小（P<0.05）。针刺+6h溶栓组与6h溶栓组比,梗死体积缩小（P<0.05）。表明针刺可减少时间窗外（6h）溶栓大鼠的脑梗死体积。（3）各组大鼠脑出血性转化:与模型组相比,6h溶栓组、7.5h溶栓组、针刺+7.5h溶栓组血红蛋白含量均升高（P<0.05）,说明超时间窗外溶栓会增加出血性转化风险。针刺+6h溶栓与6h溶栓比,血红蛋白含量降低（P<0.05）。表明针刺可降低时间窗外（6h）溶栓大鼠的脑出血性转化。（4）各组大鼠脑含水量:与模型组相比,4.5h溶栓组、针刺+4.5h溶栓组、针刺+6h溶栓组脑含水量均降低（P<0.05）;而时间窗外6h溶栓组、7.5溶栓组脑含水量均增加（P<0.05）。针刺+6h溶栓组与6h溶栓组比,脑含水量降低（P<0.05）。表明针刺可降低时间窗外（6h）溶栓大鼠的脑含水量。（5）各组大鼠神经细胞自噬水平的表达:①WB结果显示:与假手术组比,各组Beclin1、LC3蛋白表达水平上升（P<0.05）,而p62各组蛋白表达水平下降（P<0.05）。与模型组相比,6h溶栓组Beclin1、LC3、p62表达无统计学差异（P>0.05）,针刺+6h溶栓组Beclin1、LC3表达上升,p62表达下降（p<0.05）。与6h溶栓组相比,针刺+6h溶栓组Beclin1、LC3表达上升,p62表达下降（p<0.05）。②RT-PCR结果显示:与假手术组相比,各组Beclin1、LC3 mRNA的表达水平上升,p62 mRNA表达下降（p<0.05）。与模型组相比,6h溶栓组和针刺+6h溶栓组Beclin1、LC3 mRNA的表达上升,针刺+6h溶栓组p62 mRNA的表达下降（p<0.05）。与6h溶栓组相比,针刺+6h溶栓组Beclin1、LC3 mRNA的表达上升,p62表达下降（p<0.05）。表明针刺可上调时间窗外溶栓大鼠自噬标志物Beclin1、LC3,并下调溶酶体标志物p62的蛋白和mRNA表达水平,进而适度激活细胞自噬。（6）各组大鼠神经细胞凋亡水平的表达:①WB结果显示:与假手术组相比,模型组、6h溶栓组、针刺+6h溶栓组Bc12、Bax表达均上升（p<0.05）。与模型组相比,6h溶栓组Bcl2、Bax表达无统计学差异（p>0.05）,但针刺+6h溶栓组Bcl2表达上升,Bax表达下降（p<0.05）。与6h溶栓组相比,针刺+6h溶栓组Bcl2表达上升,Bax表达下降（p<0.05）。②RT-PCR结果显示:与假手术组相比,模型组、6h溶栓组、针刺+6h溶栓组Bcl2、Bax mRNA表达均上升（p<0.05）。与模型组相比,6h溶栓组Bcl2、Bax表达无统计学差异（p>0.05）,但针刺+6h溶栓组Bcl2表达上升,Bax表达下降（p<0.05）。与6h溶栓组相比,针刺+6h溶栓组Bcl2表达上升,Bax表达下降（p<0.05）,表明针刺可上调时间窗外溶栓大鼠抗凋亡Bcl2蛋白和mRNA表达水平,下调促凋亡Bax蛋白和mRNA表达水平,进而抑制凋亡。（7）各组大鼠神经细胞中Bcl2/Beclin1和Bcl2/Bax 比值的表达:通过比值比较,与假手术组相比,模型组Bc12/Beclin1比值上调、Bcl2/Bax比值下调,6h溶栓组、针刺+6h溶栓组Bc12/Beclin1 比值下调、Bcl2/Bax比值上调（p<0.05）;与模型组相比,6h溶栓组、针刺+6h溶栓组Bc12/Beclin1 比值下调,Bcl2/Bax比值上调（p<0.05）。与6h溶栓组相比,针刺+6h溶栓组Bc12/Beclin1 比值下调、Bcl2/Bax比值上调（p<0.05）。结论:（1）针刺及时介入可减轻脑梗死溶栓并发症,并延长安全溶栓时间窗至6h;（2）针刺延长脑梗死溶栓时间窗的作用是通过适度激活脑梗死溶栓后缺血半暗带神经细胞自噬并抑制凋亡的机制而实现。
刘博文[5]（2021）在《三七皂苷R1对局灶性脑缺血损伤大鼠急性期保护作用的研究》文中研究表明目的:通过动物及细胞实验探讨三七皂苷R1对局灶性脑缺血大鼠急性期的保护作用与主要机制。方法:1.健康清洁级雄性SD大鼠（260-280g）随机分为6组,即假手术组,模型组,低、中、高剂量三七皂苷R1干预组及正丁基苯酞阳性对照组。模型组、三七皂苷R1干预组及阳性药对照组大鼠行永久性大脑中动脉闭塞模型（MCAo）的制备,假手术组大鼠只行切口并分离动脉后缝合。所有大鼠回笼饲养,假手术组不予治疗,三七皂苷R1干预组及阳性药对照组大鼠在插线后立即分别给予低（10mg/kg/d）、中（20mg/kg/d）、高（40mg/kg/d）剂量的三七皂苷R1及20mg/kg/d正丁基苯酞腹腔注射,模型组大鼠术后给予等量PBS腹腔注射,术后24小时前（包括24小时）每6小时给药一次,24小时后每天给药两次。2.术后12、24及72小时,大鼠分别进行如下处理:12小时后,各组大鼠测评Bederson神经功能,而后,经颈静脉注射4%Evans Blue溶液并循环1小时后取脑,借助小动物活体成像系统检测大鼠血脑屏障的渗漏情况;脑冰冻切片原位酶谱检测脑内MMPs活性及分布;脑缺血半暗带组织蛋白质免疫印迹检测MMP2/9及紧密连接蛋白的表达。术后24小时,大鼠脑切片TTC染色观察梗死体积变化;同时在各组脑组织中检测葡萄糖转运体、乳酸转运体、柠檬酸合成酶的表达以及ATP含量,以评估脑内能量代谢水平。术后72小时,通过Garcia JH大鼠神经功能评分详细了解各组大鼠的运动和感觉功能变化;脑冰冻切片免疫荧光染色观察缺血侧海马区神经再生;并将假手术组,模型组,高剂量三七皂苷R1干预组和正丁基苯酞阳性药对照组的大鼠脑组织送检蛋白质组学。3.体外以氧糖剥夺刺激的脑内皮bEnd.3细胞及神经元N2a细胞模型为研究对象,分别用三七皂苷R1及正丁基苯酞进行干预。bEnd.3细胞体外构建内皮屏障transwell模型,以葡聚糖渗漏程度确定氧糖剥夺的干预时间及药物的起效浓度。干预结束后,各组细胞分离提取亚细胞组分蛋白,并通过蛋白质免疫印迹检测各组分紧密连接蛋白和小窝蛋白的表达;以提高细胞活力为参考,筛选N2a细胞在氧糖剥夺刺激下三七皂苷R1和正丁基苯酞的干预浓度,通过活细胞成像观察其线粒体形态,流式细胞术检测线粒体荧光表达及膜电位。分别提取N2a细胞DNA和RNA,应用Real-Time PCR检测细胞线粒体DNA拷贝数及与线粒体能量代谢相关的mRNA阵列表达,找到差异基因并回归脑组织验证。4.对脑组织蛋白质组学结果进行归纳分析,重点解读蛋白功能注释、蛋白差异分析、以及差异蛋白的功能分析,找到缺血性脑损伤发生后,以及三七皂苷R1和正丁基苯酞抗脑缺血可能涉及到的通路机制。结果:1.三七皂苷R1显着降低脑缺血损伤急性期大鼠Bederson神经功能评分及血脑屏障渗漏,减少梗死侧纹状体及皮质区MMPs的激活,降低缺血半暗带MMP2/9并提高紧密连接蛋白Zo1、Claudin5的表达。体外实验表明,三七皂苷R1降低氧糖剥夺处理的脑内皮细胞渗漏,增加Zo1、Claudin5表达,同时激活由小窝蛋白cav1介导的Occludin胞膜再分布。2.三七皂苷R1显着缩小缺血性脑损伤大鼠的梗死体积,上调半暗带的葡萄糖转运体1、3,乳酸转运体1及柠檬酸合成酶的表达,并提高脑组织ATP含量。体外实验证明,三七皂苷R1增加氧糖剥夺刺激的N2a细胞活力,改善其线粒体形态,增加线粒体表达和线粒体DNA拷贝数,并提升线粒体膜电位。对线粒体能量代谢相关mRNA阵列表达进行分析,与氧糖剥夺组相比,三七皂苷R1组有3个显着性上调基因和11个显着性下调基因,并在缺血半暗带脑组织中回归验证了atp12a及atp6v1g3两个显着性上调基因的表达。3.三七皂苷R1显着改善脑缺血损伤72小时后大鼠的运动和感觉功能,增加梗死侧海马区GFAP+/Nestin+神经干细胞的表达,并促进DCX+神经前体细胞向NeuN+成熟细胞转化。4.脑组织蛋白组学分析结果表明,永久性MCAo模型72小时后可激活凝血级联反应,可能发挥促凝血和抗纤溶的作用,并通过铁死亡通路诱导细胞产生ROS参与铁死亡;三七皂苷R1可能通过松弛素信号,抑制PI3K/AKT/Erk级联反应,从而降低缺血性中风后MMP2/9及NO的产生,同时激活JNK发挥一定的神经调节作用;正丁基苯酞干预的靶点通路较多,其抗脑缺血的机制还可能涉及提升细胞无氧糖酵解能力,和IL-4、COX2参与的抗炎抗凋亡作用。结论:本研究证实了三七皂苷R1对局灶性脑缺血损伤大鼠急性期有较好的保护作用,其机理可能通过Cav1/MMP2/9途径干预了紧密连接蛋白的再分布与降解,从而降低血脑屏障渗漏;同时促进脑内葡萄糖代谢以及线粒体能量代谢相关基因atp12a和atp6v1g3的表达,增进能量代谢,并提高海马区神经再生。
王玉[6]（2021）在《电针联合丰富康复训练干预局灶性脑缺血大鼠HIF-1α及其下游因子表达介导血管新生的机制研究》文中提出目的:研究在不同干预手段（电针、丰富康复训练、电针联合丰富康复训练）、不同治疗时程（3 d、7 d、14 d）下,对局灶性大脑中动脉缺血（middle cerebral artery occlusion,MCAO）大鼠脑皮质区缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）及其下游因子血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和促红细胞生成素（erythropoietin,EPO）表达的影响,探讨缺血侧神经结构和功能恢复与血管新生的关系,探究其脑保护作用的可能机制,为临床治疗缺血性脑卒中提供理论基础和借鉴。方法:1.购入SPF级雄性SD大鼠200只,按照随机数字表法进行编号,随机选取36只为假手术组,其余大鼠参照Longa等改良线栓法制备MCAO模型,将造模成功的大鼠144只,按随机数字表随机分为模型组、电针组、丰富康复组、电针联合丰富康复组（简称针康组）,每组36只。根据治疗时程的长短,将上述五组大鼠再分为3 d、7 d、14 d三个亚组,每个亚组12只。2.治疗组（电针组、丰富康复组、针康组）大鼠于造模麻醉清醒后（约术后4 h）进行干预治疗,1次/d,分别连续治疗3 d、7 d、14 d。电针组大鼠选取“百会”“水沟”穴和左侧“后三里”“曲池”穴进行电针刺激;丰富康复组大鼠置于丰富康复环境,并辅以康复训练;针康组大鼠先进行丰富康复训练,完成后休息10 min,电针“百会”“水沟”穴和左侧“后三里”“曲池”穴。假手术组与模型组大鼠常规饲养,只进行同等条件下抓取、固定,不进行任何干预治疗。3.分别于4 h、3 d、7 d、14 d运用改良神经功能缺损评分（modified neurological severity scores,m NSS）测定各亚组大鼠神经功能缺损体征;于5 min、3 d、7 d、14 d采用激光多普勒血流仪测定各亚组大鼠局部脑血流量（regional cerebral blood flow,r CBF）变化;苏木精-伊红染色（hematoxylin-eosin staining,HE）观察各亚组缺血侧大鼠脑皮质区病理学改变;免疫组织化学染色法测定各亚组大鼠缺血侧脑皮质区CD34+阳性细胞数,用Weidner法计算缺血侧脑皮质区微血管密度（microvessel density,MVD）,Western Blot、RT-q PCR检测各亚组大鼠缺血侧脑皮质区HIF-1α、VEGF、EPO蛋白和基因的表达情况。结果:1.改良神经功能缺损体征评分在术后四个不同时程（4 h、3 d、7 d、14 d）下,假手术组大鼠评分均为0分;模型组大鼠较假手术组术后四个同时程下评分均显着增高（P<0.01）,且随着治疗时程的延长,评分逐渐呈降低趋势;与模型组比较,电针组、丰富康复组在4 h、3 d时评分差异无统计学意义（P>0.05）,治疗7 d、14 d后评分均显着降低（P<0.01）,针康组治疗3 d、7 d、14 d后评分均低于模型组,差异具有极显着性（P<0.01）;与电针组、丰富康复组比较,针康组术后4 h、3 d差异无统计学意义（P>0.05）,在治疗7 d、14 d后,针康组评分显着低于电针组与丰富康复组,有显着性差异（P<0.05）;电针组与丰富康复组比较,在上述四个时程差异均无统计学意义（P>0.05）。2.缺血侧局部脑血流量假手术组大鼠术后四个时程（5 min、3 d、7 d、14 d）r CBF正常且平稳;模型组大鼠与假手术组相比,术后四个时程r CBF均显着降低（P<0.01）,并且随着治疗时程延长,r CBF逐渐呈上升趋势;与模型组比较,电针组、丰富康复组在5min、3 d时r CBF差异无显着性（P>0.05）,治疗7 d、14 d后r CBF均高于模型组,差异具有极显着性（P<0.01）,针康组在3 d、7 d、14 d三个时程r CBF均明显高于模型组（P<0.01）;与电针组、丰富康复组比较,针康组术后5 min r CBF差异无统计学意义（P>0.05）,在时程为3 d、7 d、14 d时,针康组r CBF均显着高于电针组、丰富康复组,有极显着性差异（P<0.01）;电针组与丰富康复组大鼠在上述四个相同时程（4 h、3 d、7 d、14 d）比较,r CBF差异均无统计学意义（P>0.05）。3.缺血侧皮质区脑组织病理学改变假手术组大鼠于术后3 d、7 d、14 d缺血侧皮质区神经细胞形态正常,结构完整,排列整齐且紧密,细胞周围间隙无水肿,无炎症细胞浸润现象。四组（模型组、电针组、丰富康复组、针康组）于术后3 d均表现为细胞结构疏松呈网状,排列紊乱稀疏,大量神经细胞固缩、变性坏死,间质水肿明显。毛细血管肿胀变形明显,胶质细胞增生,核仁深染等情况,且四组在光镜下脑病理学表现未见明显差异;较术后3 d比,四组（模型组、电针组、丰富康复组、针康组）于术后7 d均有所改善。与模型组相比,三组治疗组（电针组、丰富康复组、针康组）脑组织间质水肿、细胞结构、排列情况均明显减轻,修复较好,针康组改善最为显着;较术后3 d、7 d比,四组（模型组、电针组、丰富康复组、针康组）于术后14 d脑组织损伤程度显着减轻。与模型组比,治疗组的缺血皮质区内细胞结构较清晰,形状较规则,排列较有序,间质水肿减轻明显,其中针康组改善情况最为明显。4.缺血皮质区微血管密度假手术组大鼠在术后三个不同治疗时程（3 d、7 d、14 d）缺血侧皮质区MVD未有显着变化,均仅有少量表达;模型组大鼠术后三个时程较同时程假手术组大鼠缺血侧脑皮质区MVD均明显增高（P<0.01）;与模型组比较,电针组、丰富康复组、针康组治疗3 d、7 d、14 d后缺血侧皮质区MVD均增高,差异具有显着性（P<0.05或P<0.01）;与电针组、丰富康复组比较,针康组治疗3 d、7 d、14 d后MVD增高,有显着性差异（P<0.05）;电针组与丰富康复组比,上述三个时程差异均无统计学意义（P>0.05）。5.缺血皮质区HIF-1α、VEGF、EPO蛋白表达假手术组在三个时程下（3 d、7 d、14 d）大鼠脑缺血皮质区HIF-1α、VEGF、EPO蛋白表达未见明显改变;与假手术组比较,模型组大鼠术后三个时程缺血皮质区HIF-1α、VEGF、EPO蛋白表达量均增高,差异具有极显着性（P<0.01）;与模型组比较,电针组、丰富康复组、针康组大鼠三个相同时程缺血皮质区HIF-1α、VEGF、EPO蛋白表达量均显着增高（P<0.01）;与电针组、丰富康复组比较,针康组治疗3 d、7 d、14 d后HIF-1α、VEGF、EPO表达量明显增高（P<0.01）;电针组与丰富康复组比较,在3 d、7 d、14 d三个时程下HIF-1α、VEGF蛋白表达量差异均无统计学意义（P>0.05）,在3 d、14 d两个时程下,电针组与丰富康复组比较,EPO蛋白表达量未见明显差异,但在治疗时程为7 d时,丰富康复训练组EPO蛋白表达量明显高于电针组（P<0.01）。6.缺血皮质区HIF-1αmRNA、VEGFmRNA、EPOmRNA表达假手术组大鼠在术后三个时程（3 d、7 d、14 d）缺血皮质区HIF-1αmRNA、VEGFmRNA、EPOmRNA表达未见明显改变,仅有少量表达;模型组大鼠与假手术组比较,在术后三个相同时程缺血皮质区HIF-1αmRNA、VEGFmRNA、EPOmRNA表达量均增高,差异具有极显着性（P<0.01）;与模型组比较,电针组、丰富康复组、针康组大鼠在三个时程缺血皮质区HIF-1αmRNA、VEGFmRNA、EPOmRNA表达量均显着增高（P<0.01）;与电针组、丰富康复组比较,针康组治疗3 d、7 d、14 d后HIF-1αmRNA、VEGFmRNA、EPOmRNA表达量均增高,差异具有极显着性（P<0.01）;电针组与丰富康复组比较,在3 d、7 d、14 d三个时程下HIF-1αmRNA、VEGFmRNA、EPOmRNA表达量差异均无统计学意义（P>0.05）。结论:1.电针、丰富康复训练、电针联合丰富康复训练均是有效的缺血性脑卒中治疗手段,能有效改善MCAO大鼠神经功能缺损体征,增加局部脑血流量,促进神经细胞结构的恢复,使新生毛细血管数目增多。与电针、丰富康复训练单一疗法比较,电针联合丰富康复训练疗法效果更为显着,且在14天内,治疗时程与治疗效果呈正相关。2.电针联合丰富康复训练对MCAO大鼠治疗作用的可能机制是早期介入进一步激活了HIF-1α蛋白和基因表达,进而激活了HIF-1α下游因子VEGF、EPO的表达,介导内皮细胞血管新生,发挥着脑保护作用。
张华朋[7]（2020）在《PI3K/Akt通道在七氟烷后处理脑缺血糖尿病大鼠神经保护作用的研究》文中认为研究背景脑卒中（cerebral stroke）是各种诱发因素导致脑内动脉闭塞、破裂而造成脑部血液循环障碍而引起脑组织损伤的一组疾病,分为缺血性、出血性两种。脑卒中作为世界上致死率最高的疾病之一,全球每年新发病例高达1030万,且近来有年轻化的趋势,给社会、家庭和患者带来极大的负担。更严重的是,许多其他疾病会直接或间接导致脑卒中的发生。例如糖尿病就是引起脑血管疾病的独立危险因素,据国外资料显示,有糖尿病史患者同时患脑血管疾病的概率达到了 30～40%,而且糖尿病合并脑卒中的患者已经达到非糖尿病患者的2倍以上。临床上糖尿病合并脑卒中的患者中缺血性脑卒中占到了 80%,糖尿病并发卒中的发病率快速上升。因此如何设计和开发安全有效的脑卒中治疗药物,尤其是糖尿病脑卒中是一个亟待解决的问题。众多研究资料表明,吸入性麻醉药预处理或后处理可以保护神经系统减轻缺血性损伤。有学者发现七氟烷预处理能够减少动脉阻塞导致的脑梗死体积和凋亡细胞。许多脑缺血再灌注损伤动物模型实验证明,七氟烷预处理可以有效减少神经细胞的凋亡、一定程度改善脑梗死体积、神经功能评分、炎性反应等方面从而保护脑神经。但我们并不清楚糖尿病是否会影响七氟烷后处理的神经保护作用,且七氟烷发挥作用的机制也有待研究。有学者发现糖尿病大鼠通过恢复海马突触功能和Na+,K+-ATP酶的活性提高学习和记忆能力,机制可能与PI3K/Akt信号通道有关;Yang和同事发现利拉鲁肽可以激活糖尿病大鼠PI3K/Akt信号通道,促进自噬,最终对慢性2型糖尿病相关的学习记忆障碍提供保护;另有研究已经证实糖尿病大鼠大脑皮层细胞中PI3K/Akt信号通道相关蛋白的表达量明显下降。因此,有必要进行七氟烷对糖尿病大鼠脑缺血后神经损伤影响的研究,以期发现七氟烷后处理对脑缺血再灌注糖尿病大鼠神经功能损害是否有效,以及PI3K/Akt信号通道在七氟烷后处理中的作用机制,为后期降低糖尿病人群脑缺血后神经功能损害及促进脑卒中后神经功能恢复提供理论依据。研究目的本文通过构建脑缺血合并糖尿病大鼠模型,评估七氟烷后处理对合并糖尿病的大鼠在脑缺血再灌注后,脑组织损伤程度及氧化应激和细胞凋亡的影响,以及PI3K/Akt信号通道在七氟烷后处理中的作用机制做初步探究。研究方法1.研究对象及分组:健康Wistar大鼠288只,体重（260±30）g。大鼠饲养于室温20±2℃,相对湿度50%～70%的清洁环境中,自由摄食、摄水,适应性饲养一周后,进行实验分组和脑缺血糖尿病模型制备。首先取其中240只大鼠随机分为6组（每组40只）,正常组（Control）:不做处理;糖尿病组（DM）:选取糖尿病造模成功后大鼠;脑缺血模型组（CI）:采用线栓法将健康大鼠大脑中动脉血流阻断2h后恢复灌注;糖尿病脑缺血模型组（DMCI）:阻断糖尿病大鼠大脑中动脉血流2h后恢复灌注;七氟烷后处理组（SCI）:健康大鼠缺血再灌注开始时立即给予大鼠2.6%的七氟烷吸入,持续30min;糖尿病七氟烷后处理组（SDMCI）:糖尿病大鼠缺血再灌注开始时立即给予大鼠2.6%的七氟烷吸入,持续30min。Control、DM、CI和DMCI组大鼠均在再灌注开始时给予100%氧气,持续30 min,大鼠再灌注24h后进行相应指标检测。2.建立糖尿病和脑缺血大鼠模型:大鼠高脂高糖饮食,喂养5周后,腹腔注射STZ（链脲佐菌素,Streptozotocin,溶解于柠檬酸缓冲液中,25mg/kg）每天一次,连续2d。72h后尾静脉采血测空腹血糖,以血糖≥16.7mmol/L,并出现多食、多尿、多饮为大鼠糖尿病模型成立。脑缺血大鼠模型构建方法:大鼠术前12h禁食。腹腔内注射10%水合氯醛麻醉大鼠,仰卧位固定,手术暴露右颈总动脉,在分叉处分离颈内动脉和颈外动脉,用4/0尼龙线阻断大脑中动脉,2h后抽出尼龙线,开放大脑中动脉,恢复缺血区灌注。模型成功建立的标志是:大鼠手术后清醒,左侧肢体出现偏瘫,以左上肢较为明显;提尾悬挂时左上肢呈现蜷缩屈曲;下地行走时向左侧转圈跌倒,不能正常直行。3.LY294002脑室内注射给药:为了研究七氟烷治疗脑缺血再灌注中PI3K/Akt通道的作用,用PI3K/Akt特异性抑制剂LY294002预处理七氟烷治疗组大鼠。取其余48只大鼠,将大鼠分为6组（每组8只）,分别构建正常脑缺血加生理盐水组（NS-CI）、糖尿病合并脑缺血加生理盐水组（NS-DMCI）,七氟烷后处理脑缺血加生理盐水组（NS-SCI）、七氟烷后处理糖尿病脑缺血加生理盐水组（NS-SDMCI）、七氟烷后处理脑缺血加抑制剂组（LY-SCI）、七氟烷后处理糖尿病脑缺血加抑制剂组（LY-SDMCI）大鼠模型。术前将LY294002溶于二甲基亚砜（DMSO）和乙醇中,终浓度为10mM。将大鼠用10%水合氯醛（350mg/kg,腹腔给药）麻醉。LY-SCI组和LY-SDMCI组在建立缺血模型术前30min,在缺血侧脑室注射10μl LY294002溶液,其他组大鼠麻醉后侧脑室注射10μl生理盐水作为对照。NS-SCI组、NS-SDMCI组、LY-SCI组、LY-SDMCI组缺血2h后恢复灌注时给予给予大鼠2.6%的七氟烷吸入,持续30min:NS-CI组、NS-DMCI组再灌注开始时给予100%氧气,持续30min。4.指标检测:对于神经功能评估,采用Longa的5级4分法,在动物麻醉清醒后24h进行评分并记录神经功能缺失症状;对于脑梗塞体积评估,采用TTC染色法并利用ImageJ软件进行计算;通过计算脑组织干/湿重比值评估大鼠脑水肿程度;对于大鼠大脑组织形态学变化,采用HE染色在光学显微镜下进行观察;对于大鼠神经学习能力的检测,采用Morris水迷宫实验进行测定;对于大鼠血清中的 S100B、Bcl-2、Bax、GSH-PX、Caspase-3 和 SOD 的含量,采用 ELISA试剂盒进行检测;对于大鼠血清中NOS活性和NO含量,采用比色法进行检测;western blot检测脑组织中PI3K/Akt通道相关蛋白的磷酸化水平。5.统计学方法分析:应用SPSS19.0统计学软件对各项检测数据进行数据分析,所有分析数据结果均以均数±标准差（mean±SD）表示,两组间数据分析采用t检验,多组间数据分析采用单因素方差分析（ANOVA）,事后分析采用LSD-t检验,两组间数据采用双变量Pearson进行相关性分析,以P<0.05表示差异具有统计学意义。研究结果1.七氟烷后处理可以减弱大鼠缺血性脑损伤。各脑缺血组大鼠与Control组相比脑梗死体积、Longa神经缺陷评分和脑含水量均增加（P<0.05）,且DMCI组大鼠的上述指标较CI和DM组大鼠有进一步增加（P<0.05）。七氟烷治疗降低了 SCI和SDMCI组的脑梗死体积、Longa分值和脑含水量（P<0.05）。结果表明七氟烷后处理减弱了 SCI和SDMCI组大鼠的缺血性脑损伤,对神经系统有保护作用。2.七氟烷后处理能改善脑缺血糖尿病大鼠的空间学习和记忆能力。利用Morris水迷宫来评估大鼠的空间学习和记忆功能,结果显示与Control组相比,其他脑缺血组别的大鼠逃避潜伏期时间明显延长,穿越平台次数显着降低（P<0.05）。而相比于CI和DMCI组,再灌注开始时吸入七氟烷的大鼠（SCI组和SDMCI组）逃避潜伏期时间明显减少,穿越平台次数显着增加（P<0.05）,并且可以在更短的时间内在导航测试中找到平台（P<0.05）。这些结果表明:七氟烷后处理改善了脑缺血糖尿病大鼠的空间学习和记忆能力。3.七氟烷后处理减轻了脑缺血糖尿病大鼠的脑组织形态学损伤。HE染色结果显示,对照组的大鼠脑组织由健康神经细胞组成,没有细胞肿胀、膜起泡、核浓缩、破碎溶解。与Control组和DM组相比,CI组的大鼠脑组织切片显示出坏死,神经元丢失,核固缩,神经元收缩和星形细胞肿胀。此外,与CI组相比,DMCI组显示出更严重的损伤。经过七氟烷后处理后,SCI组和SDMCI组的大鼠的组织损伤有明显的改善。4.七氟烷后处理减少脑缺血糖尿病大鼠的氧化应激反应。为了探究七氟烷的神经保护作用是否与其抗氧化特性有关,我们检测了内源性抗氧化酶SOD和GSH-PX的活性,以及NOS和NO的水平。与Control组相比,CI组的SOD和GSH-PX水平降低（P<0.05）,而DMCI组中二者表达水平进一步降低（P<0.05）。与CI和DMCI组相比,SCI和SDMCI组中SOD和GSH-PX含量明显增加（P<0.05）。七氟烷可以显着增加SCI和SDMCI组的大鼠的SOD和GSH-PX的表达。另一方面,NOS和NO的表达水平在CI组中有所增加（P<0.05）,并在DMCI组中进一步增加（P<0.05）,但经七氟烷后处理二者的表达水平显着降低（P<0.05）,这些结果表明七氟烷可以防御SCI和SDMCI组中大鼠的氧化损伤。5.七氟烷后处理可减弱脑缺血糖尿病大鼠脑组织的细胞凋亡。缺血再灌注后,血清中促凋亡因子Bax和Caspase-3在CI和DMCI组中的表达上调（P<0.05）,但在七氟烷治疗组中表达下调（P<0.05）。另一方面,抗凋亡因子Bcl-2的表达水平在CI组相比于Control组有所降低（P<0.05）,在DMCI组中Bcl-2的表达水平进一步降低（P<0.05）。与CI和DMCI组相比,七氟烷可以显着提高Bcl-2的表达（P<0.05）。这些结果表明:七氟烷通过在脑缺血大鼠脑组织中抑制细胞凋亡来减轻缺血性脑损伤。6.七氟烷后处理组大鼠的S100B蛋白水平显着降低。相比与对照组,各脑缺血组大鼠血清中S100B的浓度显着升高（P<0.05）,且DMCI组S100B的含量高于CI组和DM两组（P<0.05）,表明合并糖尿病可以加重大鼠缺血后再灌注造成的脑损伤。经七氟烷吸入治疗后,与CI和DMCI组相比,SCI和SDMCI组的S100B水平明显降低（P<0.05）。7.S100B蛋白水平与氧化损伤指标的相关性分析显示:S100B蛋白表达量与Longa神经功能缺陷评分、脑梗死体积、含水量、NOS、NO、Bax和Caspase-3呈正相关（P<0.01）,与SOD、GSH-PX和Bcl-2呈负相关（P<0.01）。说明血清S100B可以作为评价大鼠脑缺血损伤的可靠指标,提示七氟烷后处理可以减轻大鼠脑缺血引起的脑损伤程度。8.七氟烷后处理显着增加PI3K/Akt通道活性。Western blot实验结果显示脑缺血大鼠中PI3K和Akt蛋白的磷酸化水平与Control组相比明显降低（P<0.05）,DMCI组大鼠p-PI3K、p-Akt的含量低于CI组和DM组（P<0.05）。而与CI和DMCI组相比,用七氟烷后处理后,p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt的比例明显增加（P<0.05）。表明七氟烷可能通过PI3K/Akt信号通道的激活来发挥作用。9.阻断PI3K/Akt信号通道可以减弱七氟烷对氧化应激和凋亡的保护作用。用PI3K/Akt通道抑制剂LY294002注射大鼠,检测血清中氧化应激和细胞凋亡相关因子水平的变化。七氟烷可以使脑缺血和糖尿病合并脑缺血的大鼠血清促凋亡因子Bax、Caspase-3水平降低（P<0.05）,并可以使凋亡抑制因子Bcl-2的蛋白含量升高（P<0.05）;当同时用LY294002处理大鼠后,七氟烷的作用变得不明显,血清Bax、Caspase-3、Bcl-2的含量与处理前变化不大（P<0.05）。类似地,脑缺血与糖尿病合并脑缺血的大鼠再灌注开始时吸入七氟烷可以改善缺血引起的抗氧化因子SOD和GSH-PX水平下降（P<0.05）,使它们的表达量大幅度升高;且代表氧化程度的NOS和NO水平与未经七氟烷处理的大鼠相比较也有所下降（P<0.05）。而LY294002的引入减弱了七氟烷的这种治疗效果,使血清SOD、GSH-PX、NOS和NO的含量均接近未吸入七氟烷治疗的缺血再灌注大鼠（P<0.05）。说明阻断PI3K/Akt信号通道可以抑制七氟烷的治疗效果,进一步验证了七氟烷是通过激活PI3K/Akt通道发挥保护作用。结论七氟烷后处理可显着改善糖尿病大鼠缺血再灌注时造成的脑损伤并很可能通过激活PI3K/Akt信号通道,抑制脑神经元细胞内的氧化应激反应和细胞凋亡从而发挥对大鼠脑缺血性神经损伤的保护作用。
向昱臻[8]（2020）在《清脑益元汤对局灶性脑缺血损伤大鼠NPY、CGRP表达水平的影响》文中研究说明目的:研究清脑益元汤对大鼠局灶性脑缺血损伤后神经肽NPY、CGRP表达的影响,探讨清脑益元汤防治局灶性脑缺血损伤的部分作用机制。方法:将240只SD大鼠按照体重大小分层,再分成A、B两大组,每大组120只大鼠,每大组用随机数字表法再将大鼠分为4组:空白组组、假手术组、模型组、清脑益元汤组。除空白组外,各组大鼠参照Longa线栓法,制作大鼠大脑中动脉栓塞模型。其中,假手术组在大鼠颈内动脉插入线栓8-10mm,此深度不足以阻断大脑中动脉血流,其余步骤与手术组相同。参考Longa的5分制法对大鼠进行神经功能缺损评分,并按照MCAO术后1d、3d、7d、14d、28d五个处死时间点分为5个亚组,每个亚组6只大鼠。空白组正常饲养,灌胃等体积蒸馏水。假手术组、模型组大鼠术后灌胃等体积蒸馏水、清脑益元汤组术后灌胃等体积清脑益元汤,持续至各个取材时间点。应用HE染色法检测大鼠神经细胞形态学变化;免疫组织化学法检测各组大鼠缺血侧脑组织切片NPY免疫阳性细胞的表达水平;Western blot法检测各组大鼠缺血侧脑组织CGRP蛋白含量,并用SPSS24.0统计软件包进行数据处理。结果:（1）神经功能缺损评分:（1）假手术组大鼠在各个时间点均无神经功能缺损表现。（2）与假手术组相比较,模型组及清脑益元组大鼠神经功能缺损评分显着增高,差异均有统计学意义（P<0.01）。（3）在相同取材时间点,清脑益元组大鼠神经功能缺损症状与模型组大鼠相比较,均有不同程度的改善,差异有统计学意义（P<0.01）。（2）HE染色:（1）空白组、假手术组:脑组织无水肿,细胞排列整齐,形态结构基本正常。（2）模型组:大鼠神经元皱缩变形,呈三角形松散排列,大范围散在坏死的红色神经元,大部分神经元变性、坏死,细胞周围间隙增大,细胞胞体变形缩小,细胞核固缩浓染,炎性细胞浸润、坏死,细胞溶解消失或见少量固核残留。（3）清脑益元汤组:给予药物后,脑组织梗死区可见少量神经元坏死、核固缩浓染等病理特征,较模型组有显着改善,皮质区域的神经元细胞排列紧密,呈类球形,细胞排列趋于正常,偶见部分细胞变形。表明清脑益元汤能够促使神经元细胞修复,或具有使神经细胞再生,修复神经损伤的作用。（3）免疫组化法检测NPY:（1）在各个取材时间点,空白组及假手术大鼠脑组织中观察到少量NPY免疫阳性细胞表达,同时间点两组比较差异无统计学意义（P>0.05）。（2）在同一时间点,与假手术组比较,模型组和清脑益元汤组大鼠NPY阳性细胞数明显增多,差异具有统计学意义（P<0.01）。（3）在同一时间点,与模型组相比,清脑益元汤组NPY免疫阳性细胞数明显低于模型组,差异有统计学意义（P<0.01）。（4）Western blot法检测CGRP:（1）CGRP在空白组和假手术组的脑组织中均有少量表达,两者比较,差异无统计学意义（P>0.05）。（2）在同一时间点,与假手术组相比,模型组和清脑益元汤组CGRP蛋白表达均升高（P<0.01）,差异有统计学意义。（3）与模型组相比,清脑益元汤组大鼠脑组织内的CGRP蛋白相对表达量明显高于模型组,差异有统计学意义（P<0.01）。结论:清脑益元汤可改善大鼠脑缺血组织的损伤,其作用机制可能与其减少脑缺血损伤后NPY阳性细胞数、增加CGRP蛋白表达,进而调控脑血管的舒缩状态,改善缺血区域的脑血流有关。
王艳秋[9]（2020）在《川芎嗪联合神经干细胞移植干预局灶性脑缺血大鼠的作用机制研究》文中研究表明研究目的:前期实验研究发现,脑缺血后可以一定程度的刺激脑内内源性神经发生,参与缺血后的自发性修复,但是内源性神经发生并不能产生足够数量的成熟神经元和神经胶质细胞,因此对神经干细胞（NSCs）移植的关注与研究逐渐增多。课题组前期研究表明川芎嗪（TMP）对大脑中动脉阻塞（MCAO）模型大鼠神经发生及NSCs向缺血损伤区定向迁移有明显促进作用。SDF-1/CXCR4是经典的促进干细胞迁移的调控通路,Nrf2作为正性调节因子能够促进SDF-1的受体CXCR4的转录来促进骨髓干细胞迁移。本研究通过观察TMP联合移植NSCs对MCAO模型大鼠的干预作用,并基于干细胞生物学行为调控探讨TMP联合移植NSCs对缺血性脑卒中的作用机制。研究方法:使用线栓法建立大鼠MCAO模型,缺血后90min后再灌注。造模成功的大鼠按照神经功能评分随机分层分为模型组（Model）、川芎嗪（TMP）组、神经干细胞（NSCs）移植组、TMP联合NSCs移植组。同时设立伪手术（Sham）组做为对照。TMP及TMP+NSCs移植组术后次日进行腹腔注射给药TMP 40mg/kg,1次/d;NSCs移植组及TMP+NSCs移植组术后3天向缺血侧纹状体移植NSCs 3*107个/只。术后3d及取材前3d连续腹腔注射50 mg/kg BrdU。进行神经功能评分（mNSS）、肌力测验、网格行走、旷场实验及强迫游泳实验来考察TMP对大鼠神经功能和行动能力的改善;免疫荧光法检测 BrdU+、BrdU+/DCX+、BrdU+/NeuN+、BrdU+/GFAP+细胞分布情况观察NSCs的增殖、迁移、分化情况;PKH26+染色检测移植的NSCs的存活及迁移情况。Western blot检测SDF-1、CXCR4的蛋白表达及信号通路Nrf2、KEAP1、HO-1、NQO1的蛋白表达,实时荧光定量PCR检测CXCR4、SDF-1、VEGF和NGF基因的mRNA水平,研究NSCs发生迁移的作用机制。研究结果:1.TMP联合NSCs移植对MCAO模型大鼠神经修复效果评价:与伪手术组相比,缺血后MCAO模型大鼠体重、肌力、旷场行动能力明显下降,神经行为学评分显着升高,缺血病变对侧前肢错步指数升高,游泳静止时间变长,证明我们成功复制MCAO模型。TMP、NSCs移植、TMP+NSCs移植治疗后的大鼠神经功能行为学评分降低,肌力恢复,行动能力提升,错步指数下降,游泳时间增加,尤其以TMP+NSC移植组的治疗效果最佳。2.TMP联合NSCs移植对MCAO模型大鼠外源性NSCs存活、迁移和分化的影响:通过免疫荧光检测法观察到PKH26阳性的细胞,提示NSCs成功注射到纹状体并存活;而且除移植位点外,在附近也可以观察到PKH26阳性的细胞,提示存活的NSCs发生一定范围的迁移,且TMP+NSCs移植组迁移细胞数量更多、迁移距离更远。同时我们还检测了 PKH26分别与NeuN、GFAP双标的细胞,并没有发现双标阳性的细胞,提示移植到脑内的NSCs在目前检测范围内,未发现分化为神经元和星型胶质细胞。3.TMP联合NSCs移植对内源性NSCs增殖、迁移、分化的影响:缺血后,与伪手术组比较模型组 BrdU+、BrdU+/DCX+、BrdU+/NeuN+、BrdU+/GFAP+细胞数有所升高。与模型组相比,TMP、NSCs移植单独治疗以及两者联合组的BrdU+、BrdU+/DCX+、BrdU+/NeuN+、BrdU+/GFAP+细胞数均明显升高,且以联合治疗组最明显。4.TMP和NSCs移植对Nrf2/HO-1/CXCR4通路的影响:TMP组、NSCs移植组和TMP+NSCs移植组的CXCR4蛋白的表达均显着升高,同时三个治疗组Nrf2、HO-1、NQO1的蛋白表达上调、KEAP1蛋白表达降低。与模型组相比,TMP组、NSCs移植组和TMP+NSCs移植组可以上调SDF-1、CXCR4、VEGF、NGF基因。研究结论:1.TMP、NSCs移植以及TMP联合NSCs移植均可改善MCAO模型大鼠的神经行为学变化,尤以TMP联合NSCs移植作用最佳;2.提高移植到MCAO模型脑内NSCs的存活、迁移和分化,为TMP联合NSCs移植治疗MCAO模型大鼠的作用途径之一;3.促进脑区神经营养因子分泌,改善脑内微环境,并促进内源性NSCs增殖、迁移和分化,为TMP与联合NSCs移植对MCAO模型大鼠发挥神经保护的另一重要途径;4.激活Nrf2/HO-1/CXCR4通路,可能是TMP联合NSCs移植促进内源神经发生以及外源移植性NSCs存活、迁移和分化的部分作用机制。
田方泽[10]（2020）在《通络清脑方对缺血性卒中急性脑水肿的影响及星形胶质HMGB1/TLR4机制研究》文中研究说明缺血性脑卒中是全球高发病率和高死亡率的主要疾病之一。脑水肿是缺血性脑卒中最大的并发症之一,是大面积缺血性脑卒中患者急性期恶化和死亡的主要原因。星形胶质细胞是脑水肿的重要参与细胞,其与脑血管功能变化,与水转运蛋白的活性改变密切相关,且在脑水肿的稳态中起到重要的作用。高迁移率组1（High-mobility group box 1,HMGB1）/Toll样受体4（Toll-likereceptor4,TLR4）通路作为炎性的标志性通路,在缺血性脑卒中早期脑水肿的病程发展中起了十分重要的作用。HMGB1是炎症级联反应的有效诱导物,主要在胶质细胞上表达,引起神经水肿和诱导巨噬细胞合成肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor α,TNF-α）、白介素-6（inter-leukin-6,IL-6）、白介素 1β（inter-leukin-β,IL-1β）,导致炎症细胞的聚集和渗透,同时诱发炎症和一系列继发性组织损伤。因此,在缺血性脑水肿的研究中,星形胶质细胞HMGB1/TLR4通路对AQP4和血脑屏障的影响具有重要的意义。通络清脑方（Tong LuoQingNao,TLQN）是本实验室前期研究用来治疗缺血性脑卒中急性期脑水肿的中药新药,其主要由三七总皂苷（Panax Notoginseng Saponins,PNS）、栀子苷（Geniposide,GE）,黄芩苷（Baicalin,BA）三类有效成分组成,对脑缺血的炎性反应有明显的抑制作用,具有缓解脑水肿,能降低水通道蛋白（Aquaporin-4,AQP4）的表达的作用。本课题研究TLQN及其有效组分对星形胶质细胞HMGB1/TLR4炎性通路对AQP4和血脑屏障影响,从而探寻TLQN抑制缺血性卒中脑水肿的作用机制。第一部分通络清脑方对缺血再灌注大鼠脑水肿及星形胶质HMGB1/TLR4通路和血脑屏障的影响目的:应用大鼠脑缺血再灌注模型,观察TLQN及其有效组分对缺血再灌注大鼠急性期脑水肿的影响和对星形胶质细胞HMGB1/TLR4通路及血脑屏障的影响。方法:线栓法复制大鼠脑缺血再灌注模型,随机分为假手术组（Sham）,再灌注组（Cerebralischemia-reperfusion,CIR）,通络清脑方（TLQN）42mg/kg 组（其中黄芩苷:栀子苷:三七总皂苷=1:12:6）,三七总皂苷（PNS）13.3mg/kg组、栀子苷+黄芩苷（BA+GE）26.5mg/kg+2.2mg/kg组,手术当天给药,尾静脉注射给药2d,1次/d。设立再灌注24h、48h为观察期。1.通过体重、神经功能评分、脑干湿重和功能性核磁共振的方法;观察TLQN对脑缺血再灌注大鼠急性期脑水肿的影响;2.采用生化法检测CIR大鼠脑缺血侧皮层和血液中IL-6,IL-1β,TNF-α浓度含量;3.采用Western Blot和免疫荧光的方法,检测TLQN及其有效组分对缺血再灌注大鼠24h,48h皮层AQP4、HMGB1、TLR4、NF-κB、p-NF-κB表达及蛋白水平的变化。4.采用透射电镜和免疫组化的方法,检测TLQN及有效组分对缺血再灌注大鼠细胞肿胀及血脑屏障的影响。结果:1.体重和神经功能评分结果显示,再灌注大鼠出现明显的神经功能缺损症状,TLQN组大鼠神经功能缺损评分在24h,48h明显降低（P<0.05）,PNS组和BA+GE组在48h大鼠神经功能缺损评分出现明显降低（P<0.05）。2.脑含水量结果显示:与Sham组相比,缺血再灌注24 h大鼠,脑含水量明显增加（P<0.05）;TLQN组大鼠24 h后脑含水量明显降低（P<0.05）;再灌注48 h后,TLQN、BA+GE组和PNS组脑含水量明显降低（P<0.05）。核磁共振结果显示:再灌注24h后CIR大鼠大脑海马、胼胝体和前皮层三个区域ADC信号明显降低（P<0.01）,TLQN组、PNS组和BA+GE组大鼠前皮层和胼胝体ADC明显高于CIR组（P<0.05）,而海马区域有上升趋势（P>0.05）。3.生化检测显示,CIR组大鼠缺血侧大脑皮层IL-6,IL-1β,TNF-α明显上升（P<0.01）;分别给予TLQN、PNS、BA+GE,24h和48h干预后,大鼠缺血侧大脑皮层IL-6,IL-1β,TNF-α明显下降（P<0.05）4.免疫荧光结果与Western-Blots相似,与Sham组相比,CIR组大鼠缺血侧大脑皮层AQP4浓度明显升高（P<0.01）,GFAP激活（P<0.01）,并且HMGB1、TLR4、p-NF-κB也明显上升（P<0.01）;分别给予TLQN、PNS、BA+GE,24h和48h干预后,大鼠缺血侧大脑皮层AQP4浓度显着降低（P<0.05）;GFAP明显收到抑制（P<0.05）,HMGB1、TLR4、p-NF-κB 含量也明显下调（P<0.05）5.透射电镜、GFAP的周长、和免疫组化Claudin-5的检测中显示,TLQN、PNS和BA+GE对缺血再灌注大鼠内皮细胞星形胶质细胞肿胀有明显的缓解作用,并且能够改善血脑屏障的紧密连接使其屏障功能得以修复。第二部分通络清脑方及其有效成分对氧糖剥夺/再复氧（Oxygen-glucose deprivation/Reperfusion,OGD/R）星形胶质细胞神经炎症及HMGB1/TLR4通路的影响目的:应用离体培养人脑星形胶质细胞与星形胶质细胞/微血管内皮细胞共培养实验方法,观察TLQN及单体对OGD/R损伤星形胶质细胞HMGB1/TLR4通路及内皮细胞紧密连接的影响。方法:1.使用正常的星形胶质细胞检测TLQN及其各有效成分（PNS、BA、GE）的药物毒性浓度,以备后续的药效实验做基础。采用CCK-8法检测星形胶质细胞活力,观察细胞形态。2.构建OGD/R细胞模型,氧糖剥夺6h/复氧复糖12h（OGD/R6/12）,星形胶质细胞分为正常（Control）组和OGD/R组,药物组（TLQN、PNS、BA、GE）分别在2.5～50 μg/ml进行干预,探索TLQN及单体对OGD/R损伤的星形胶质细胞的药效及给药浓度。采用CCK-8法检测星形胶质细胞活力,观察细胞形态。3.采用生化法检测细胞培养有液IL-6,IL-1β,TNF-α的含量;Western Blot、免疫细胞荧光法检测细胞GFAP、AQP4、HMGB1、TLR4、p-NF-κB表达的变化。4.采用免疫荧光和透射电镜技术,在HA/BMECs共培养体系中发现,检测OGD/R后HA细胞的培养液可降低BMECs细胞的存活率,降低细胞间的紧密连接蛋白Claudin-5、ZO-1和影响细胞内部的影响。结果:1.通过药物毒性结合药效学实验可以看出,TLQN及其有效成分PNS、BA、GE在2.5～50μg/ml浓度内无明显毒性。2.与 OGD/R 后的 HA 细胞对比,TLQN（5μg/mL）和 PNS（10 μg/mL）干预后,细胞活力明显增强（P<0.05）且作用最佳,能够明显改善细胞状态。3.免疫荧光结果与Western-Blots结果相似:1)与Control组相比,OGD/R组HA细胞AQP4浓度明显升高（P<0.01）,,并且HMGB1、TLR4、p-NF-KB也明显上升（P<0.01）;给予 TLQN（5mg/kg）和 PNS（10mg/kg）干预后,HA 细胞 AQP4 浓度显着降低（P<0.05）;HMGB1、TLR4、p-NF-κB含量也明显下调（P<0.01）,且加入丙酮酸乙酯（EP）后,抑制了 OGD/R 组 HA 细胞 AQP4、HMGB1、TLR4、p-NF-κB 的表达。4.CCK8结果显示,GD/R后HA细胞外液对BMECs的存活率有显着的降低（P<0.05）;免疫荧光结果显示,BMECs细胞间的紧密连接蛋白Claudin-5、ZO-1有明显的下降。在TLQN和PNS干预之后,BMECs的存活率上升,细胞间的Claudin-5、ZO-1的数量增加,上述结果与EP干预后的结果有一致的趋势,表明TLQN具有通过星形胶质细胞抑制内皮细胞损伤的功能。结论:通过体内和体外实验研究表明,基于“神经血管单元”理论,通络清脑可以减轻缺血再灌注大鼠急性期脑水肿,尤其是皮层水肿的作用。其机制是通过星形胶质细胞HMGB1/TLR4通路抑制AQP4表达和星形胶质细胞肿胀,同时减少水肿相关炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达,;通络清脑方通过星形胶质细胞HMGB1/TLR4通路增加内皮细胞的紧密连接程度,改善血脑屏障功能。其作用的有效组分是活血组（三七总皂苷）。
二、局灶性脑缺血后鼠脑组织tPA基因表达及其与细胞凋亡（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、局灶性脑缺血后鼠脑组织tPA基因表达及其与细胞凋亡（论文提纲范文）
（1）基于“脉腑”与“脾脉相关”理论探讨中风病脑脉燥变机制及健脾益智法调节MCAO大鼠内皮功能的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 引言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1 脉与脾脉相关研究 |
| 1.1 关于“脉”的概念形成 |
| 1.1.1 脉古代解剖之初始认知 |
| 1.1.2 结构之脉 |
| 1.1.3 功能之脉 |
| 1.2 脉腑理论钩玄 |
| 1.2.1 脉腑概念的形成 |
| 1.2.2 脉气是脉腑功能的高度概括 |
| 1.2.3 经络是脉腑网络结构的体现 |
| 1.2.4 脉腑之基本生理 |
| 1.2.5 脉腑之生理特性 |
| 1.3 脾脉相关的内涵研究 |
| 1.3.1 脾脉相关,以营为基 |
| 1.3.2 脾脉相关,以濡为性 |
| 1.3.3 脾脉相关,摄血纳津 |
| 1.3.4 脾脉相关,以脾统脉 |
| 2 中风病脑脉病变机理探析 |
| 2.1 中风病病位在脑脉 |
| 2.2 脑脉生理之特点 |
| 2.2.1 至阳清空,不容邪气 |
| 2.2.2 元神所藏,神机所发 |
| 2.2.3 脑脉居上,通于火燥 |
| 2.2.4 水湿居下,升达脑脉 |
| 2.3 中风脑脉病变因机学说剖析 |
| 2.3.1 中风“虚”因机说 |
| 2.3.2 中风“风”因机说 |
| 2.3.3 中风“火”因机说 |
| 2.3.4 中风“痰”因机说 |
| 2.3.5 中风“瘀”因机说 |
| 2.4 中风“燥”之因机新说探析 |
| 2.4.1 中风“燥”之因机新说提出的依据 |
| 2.4.2 脑脉病“燥”是中风病的基本病理 |
| 2.4.3 脑脉燥变是中风脉燥证的深危病机特点 |
| 2.4.4 脾虚而脉燥是脑脉燥变的病理主导 |
| 3 健脾润脉祛燥是健脾益智法防治中风病的重要内容 |
| 3.1 健脾养营润脉 |
| 3.2 健脾生津润脉 |
| 3.3 健脾祛瘀润脉 |
| 3.4 健脾化痰润脉 |
| 4 健脾益智法治疗中风病的实验基础 |
| 4.1 健脾益智汤的组分研究 |
| 4.2 健脾益智汤的组方研究 |
| 第二部分 健脾益智法调节MCAO大鼠血管内皮功能的实验研究 |
| 实验一 健脾益智法对MCAO大鼠脑内NO、eNOS及 VEGF的影响 |
| 1 目的 |
| 2 材料 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 实验所用主要仪器和设备 |
| 2.3 实验所用主要试剂 |
| 3 方法 |
| 3.1 动物分组 |
| 3.2 药物配制和给药 |
| 3.3 MCAO模型大鼠的复制 |
| 3.4 神经功能受损评分 |
| 3.5 取材 |
| 3.6 石蜡包埋 |
| 3.7 硝酸还原酶法检测各组大鼠脑内NO含量 |
| 3.8 免疫组织化学法检测各组大鼠脑内eNOS、VEGF表达情况 |
| 3.9 酶联免疫吸附检测各组大鼠脑内VEGF表达水平 |
| 3.10 统计方法 |
| 4 结果 |
| 4.1 硝酸还原酶法检测大鼠脑内NO的含量 |
| 4.2 免疫组化法检测大鼠脑内eNOS的表达情况 |
| 4.3 各组大鼠脑内VEGF表达情况 |
| 5 讨论 |
| 5.1 NO、eNOS、VEGF检测 |
| 5.2 干预药物 |
| 5.2.1 西药干预 |
| 5.2.2 中药干预 |
| 实验二 健脾益智法对MCAO大鼠RhoA mRNA和 ROCK2 蛋白的影响 |
| 1 目的 |
| 2 材料 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 实验所用主要仪器和设备 |
| 2.3 实验所用主要试剂 |
| 3 方法 |
| 3.1 动物分组 |
| 3.2 药物配制和给药 |
| 3.3 MCAO大鼠的复制 |
| 3.4 神经功能受损评分 |
| 3.5 取材 |
| 3.6 qPCR法检测各组大鼠脑内RhoA mRNA的表达情况 |
| 3.7 Western-Blot法检测各组大鼠脑内ROCK2 蛋白的表达情况 |
| 3.8 数据统计 |
| 4 结果 |
| 4.1 qPCR检测RhoA mRNA表达情况 |
| 4.2 Western Blot检测各组大鼠脑内ROCK2 蛋白表达情况 |
| 5 讨论 |
| 实验三 健脾益智法对MCAO大鼠神经功能受损评分及Caspase-3 的影响 |
| 1 目的 |
| 2 材料 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 实验所用主要仪器和设备 |
| 2.3 实验所用主要试剂 |
| 3 方法 |
| 3.1 动物分组 |
| 3.2 药物配制和给药 |
| 3.3 MCAO大鼠的复制 |
| 3.4 神经功能缺损评分 |
| 3.5 取材 |
| 3.6 Western Blot法检测各组大鼠脑内Caspase-3表达情况 |
| 4 结果 |
| 4.1 各组大鼠神经功能受损评分 |
| 4.2 各组大鼠脑内Caspase-3 蛋白表达情况 |
| 5 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 A |
| 附录 B |
| 文献综述 内皮功能障碍在缺血性脑卒中中的作用机制 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（2）青年缺血性脑卒中后海马齿状回神经分化及紫杉叶素干预缺血性脑卒中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 第一章 青年缺血性卒中后海马齿状回神经分化机制研究 |
| 前言 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验主要试剂 |
| 1.3 实验主要仪器 |
| 1.4 试剂配制 |
| 2. 方法 |
| 2.1 沙鼠短暂性前脑缺血模型制备 |
| 2.2 实验分组及给药 |
| 2.3 脑组织处理 |
| 2.4 BrdU的免疫组织化学 |
| 2.5 神经功能评分 |
| 2.6 Morris水迷宫实验 |
| 2.7 免疫组织化学染色 |
| 2.8 BrdU/NeuN的双重免疫荧光染色 |
| 2.9 蛋白印迹实验 |
| 2.10 统计学分析 |
| 3. 结果 |
| 3.1 青、老年沙鼠缺血性卒中后神经功能康复的差异 |
| 3.2 缺血性卒中后青、老年沙鼠CA1区NeuN免疫染色的差异 |
| 3.3 缺血性卒中后青、老沙鼠DG区细胞增殖的差异 |
| 3.4 缺血性卒中后青、老沙鼠DCX免疫染色的差异 |
| 3.5 青、老年沙鼠DG区NeuN/BrdU免疫荧光染色差异 |
| 3.6 青、老年沙鼠海马区Erk信号通路的蛋白表达水平 |
| 3.7 青、老年沙鼠海马区自噬的蛋白表达水平 |
| 3.8 Erk或自噬抑制剂处理对青年沙鼠缺血性卒中后神经功能康复的影响 |
| 3.9 Erk或自噬抑制剂处理对青年沙鼠CA1区NeuN免疫染色的差异 |
| 3.10 Erk或自噬抑制剂处理对青年沙鼠DG区细胞增殖的影响 |
| 3.11 Erk或自噬抑制剂处理对青年沙鼠DG区DCX免疫表达的影响 |
| 3.12 Erk或自噬抑制剂处理对青年沙鼠DG区NeuN/BrdU免疫表达的影响 |
| 3.13 Erk抑制剂处理对青年沙鼠海马区Erk信号通路蛋白表达水平的影响 |
| 3.14 自噬抑制剂处理对青年沙鼠海马区自噬相关蛋白表达水平的影响 |
| 4 讨论 |
| 第二章 紫杉叶素抗缺血性卒中的保护作用及分子机制 |
| 前言 |
| Part.1 紫杉叶素通过调控Erk信号通路对青年沙鼠前脑缺血性卒中损伤神经保护作用 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物与试剂 |
| 2 方法 |
| 2.1 沙鼠短暂性前脑缺血模型制备 |
| 2.2 实验分组及给药 |
| 2.3 神经功能评分 |
| 2.4 脑组织处理 |
| 2.5 免疫组织化学染色 |
| 2.6 蛋白印迹实验 |
| 2.7 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 Tax对Isch后沙鼠神经功能康复的情况 |
| 3.2 Tax对Isch后沙鼠海马CA1区细胞的形态变化 |
| 3.3 Tax对Isch后沙鼠海马CA1区神经元死亡的影响 |
| 3.4 Tax对Isch后沙鼠海马CA1区DCX的影响 |
| 3.5 Tax对Isch后沙鼠海马CA1区星形胶质细胞(GFAP~+)的影响 |
| 3.6 Tax对Isch后沙鼠海马CA1区PECAM-1的影响 |
| 3.7 Tax对Isch后沙鼠海马CA1区ZO-1的影响 |
| 3.8 Tax对Isch后沙鼠海马Erk相关通路蛋白水平的影响 |
| 4 讨论 |
| Part.2 紫杉叶素通过调控Nrf2/HO-1信号通路对小鼠局灶性缺血性卒中损伤神经保护作用 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物与试剂 |
| 2 方法 |
| 2.1 小鼠大脑中动脉模型制备 |
| 2.2 实验分组及给药 |
| 2.3 神经功能缺失体征评分 |
| 2.4 脑梗死体积的测定 |
| 2.5 脑组织处理 |
| 2.6 免疫组织化学染色 |
| 2.7 蛋白印迹实验 |
| 2.8 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 Tax降低了MCAO后神经功能缺失评分和脑梗死体积 |
| 3.2 Tax明显改善了MCAO所致的神经元损伤 |
| 3.3 Tax降低了MCAO后Iba1免疫活化的小胶质细胞(Iba1~+)的增殖和活化 |
| 3.4 Tax降低了MCAO后GFAP免疫活化的(GFAP~+)星形胶质细胞的增殖和活化 |
| 3.5 Tax提高了MCAO后半暗带Nrf2、HO-1蛋白表达水平 |
| 3.6 Tax改善了MCAO后半暗带Caspase-3、Bcl-2、Bax的蛋白表达的水平 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 综述: 多酚类化合物抗脑缺血再灌注后氧化应激损伤作用机制的研究进展 |
| 前言 |
| 1. 多酚类化合物的分类 |
| 2. 氧化应激和脑缺血再灌注 |
| 2.1 缺血再灌注中氧化应激的相关反应 |
| 2.2 Nrf2与缺血再灌注中氧化应激的关系 |
| 3. 多酚类化合物在缺血再灌注中抗氧化应激损伤的药理证据 |
| 3.1 紫杉叶素 |
| 3.2 姜黄素 |
| 3.3 白藜芦醇 |
| 3.4 儿茶素 |
| 3.5 迷迭香酸 |
| 3.6 水飞蓟素 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的学术成果 |
| 致谢 |
（3）活血凉血中药入脑有效成分抗缺血性脑卒中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 第一章 探讨活血祛瘀药丹参入脑有效成分丹参酮I对缺血性脑卒中的神经保护作用及机制 |
| 前言 |
| Par1 丹参酮Ⅰ对缺血性脑卒中神经保护作用机制的网络药理学研究 |
| 1. 材料 |
| 1.1 数据库 |
| 1.2 软件 |
| 2. 方法 |
| 2.1 丹参酮Ⅰ相关靶点预测 |
| 2.2 缺血性脑卒中相关靶点收集 |
| 2.3 蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络构建和网络拓扑参数分析 |
| 2.4 丹参酮Ⅰ治疗缺血性脑卒中关键靶标的富集分析 |
| 2.5 丹参酮Ⅰ治疗缺血性脑卒中关键靶标的“基因-通路”网络分析 |
| 2.6 分子对接 |
| 3. 结果 |
| 3.1 丹参酮Ⅰ的关键候选靶点 |
| 3.2 缺血性脑卒中的关键靶点 |
| 3.3 丹参酮Ⅰ治疗缺血性脑卒中关键靶点的PPI网络 |
| 3.4 丹参酮Ⅰ治疗缺血性脑卒中关键靶点的GO和KEGG富集分析 |
| 3.5 “基因-通路”网络分析及分子对接 |
| 4. 讨论 |
| Part2 丹参酮Ⅰ对缺血性脑卒中的神经保护作用及机制研究 |
| 1. 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验主要试剂 |
| 1.3 实验主要仪器 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 小鼠短暂性大脑中动脉闭塞(tMCAO)模型制备 |
| 2.2 实验分组及药物处理 |
| 2.3 神经功能评分 |
| 2.4 TTC染色以及脑梗死体积的测定 |
| 2.5 脑组织处理 |
| 2.6 细胞培养及处理 |
| 2.7 细胞氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)模型建立 |
| 2.8 细胞活力测定 |
| 2.9 免疫组织化学染色 |
| 2.10 蛋白印迹实验 |
| 2.11 统计学分析 |
| 3. 结果 |
| 3.1 丹参酮Ⅰ对缺血性脑卒中的神经保护作用 |
| 3.2 丹参酮Ⅰ对CIS后小鼠海马区PI3K/AKT/GSK3β信号通路相关蛋白水平的影响 |
| 3.3 丹参酮Ⅰ对CIS后小鼠海马区MEK/ERK信号通路相关蛋白水平的影响 |
| 3.4 PI3K-IN-1可以部分阻断氧糖剥夺/复糖复氧后丹参酮Ⅰ对海马神经元细胞(HT-22)的保护作用 |
| 3.5 U0126可以部分阻断丹参酮Ⅰ对CIS后小鼠的神经保护作用 |
| 3.6 U0126可以部分阻断丹参酮Ⅰ对CIS后小鼠海马区MEK/ERK信号通路的激活作用 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 第二章 探讨凉血药紫草入脑有效成分紫草素对缺血性脑卒中的保护作用及机制 |
| 前言 |
| 1. 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验主要试剂 |
| 1.3 实验主要仪器 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 小鼠短暂性大脑中动脉闭塞(tMCAO)模型制备 |
| 2.2 实验分组及药物处理 |
| 2.3 神经功能评分 |
| 2.4 TTC染色以及脑梗死体积的测定 |
| 2.5 脑组织处理 |
| 2.6 免疫组织化学染色 |
| 2.7 Tunel染色 |
| 2.8 蛋白印迹实验 |
| 2.9 统计学分析 |
| 3. 结果 |
| 3.1 紫草素对急性缺血性脑卒中的神经保护作用 |
| 3.2 紫草素对CIS后小鼠海马区细胞凋亡的影响 |
| 3.3 紫草素对CIS后小鼠海马区线粒体动力学相关蛋白水平的影响 |
| 3.4 紫草素对CIS后小鼠海马区PINK1/Parkin信号通路相关蛋白的影响 |
| 3.5 紫草素对CIS后小鼠海马区BNIP3/NIXLC3信号通路相关蛋白的影响 |
| 3.6 紫草素对CIS后小鼠海马区凋亡相关蛋白的影响 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 线粒体质量控制在缺血性脑卒中作用机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录一 |
| 附录二 |
| 攻读硕士期间取得的学术成果 |
| 致谢 |
（4）针刺调控神经细胞自噬与凋亡以延长脑梗死溶栓时间窗的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1. 中医学对脑梗死的认识 |
| 1.1 病名 |
| 1.2 病因病机 |
| 1.3 治则及针灸治疗 |
| 2. 现代医学对脑梗死的认识 |
| 2.1 流行病学 |
| 2.2 危险因素及发病机制 |
| 2.3 治疗 |
| 3. “针刺适度激活自噬并抑制凋亡可延长脑梗死溶栓时间窗”科学假说的理论依据 |
| 3.1 缺血半暗带是溶栓治疗的理论基础 |
| 3.2 延长安全时间窗是保证溶栓疗效的关键 |
| 3.3 挽救IP区神经细胞死亡是延长脑梗死溶栓时间窗的核心环节 |
| 3.4 自噬凋亡共同影响IP区神经细胞死亡进程 |
| 3.5 针刺介入延长脑梗死溶栓时间窗的可行性 |
| 3.6 “针刺适度激活自噬并抑制凋亡可延长脑梗死溶栓时间窗”科学假说的提出 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 针刺延长脑梗死溶栓时间窗的效应研究 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验耗材与设备 |
| 1.4 主要溶液配制 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 动物分组 |
| 2.2 大鼠自体血栓栓塞模型制备及激光多普勒血流仪监测脑血流量 |
| 2.3 干预治疗方法 |
| 2.4 神经行为学评分 |
| 2.5 脑梗死体积测定 |
| 2.6 脑含水量测定 |
| 2.7 脑出血性转化测定 |
| 2.8 统计学处理 |
| 3. 实验结果与分析 |
| 3.1 造模过程中的脑血流量变化 |
| 3.2 神经行为学评分比较 |
| 3.3 脑梗死体积的比较 |
| 3.4 脑出血性转化比较 |
| 3.5 脑含水量比较 |
| 实验二 针刺调控神经细胞自噬与凋亡以延长溶栓时间窗的机制研究 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验耗材与设备 |
| 1.4 主要溶液配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组与模型制备 |
| 2.2 干预方法 |
| 2.3 样本采集 |
| 2.4 Western Blot |
| 2.5 RT-PCR |
| 2.6 统计学处理 |
| 3. 结果分析 |
| 3.1 各组大鼠神经细胞自噬相关指标（Beclinl、LC3II/1、p62)的表达比较 |
| 3.2 各组大鼠神经细胞凋亡相关指标（Bcl2、Bax)的表达比较 |
| 3.3 各组大鼠自噬凋亡复合物Bcl2/Beclin1和Bcl2/Bax蛋白表达比值的比较 |
| 第三部分 讨论 |
| 1. 实验设计 |
| 1.1 动物模型的制备 |
| 1.2 针刺方法的选择 |
| 1.3 溶栓药物的选择 |
| 1.4 干预时间点的选择 |
| 1.5 自噬凋亡相关指标的选择 |
| 2. 实验结果的讨论 |
| 2.1 针刺延长脑梗死溶栓时间窗的效应 |
| 2.2 针刺对自噬凋亡复合物的调控作用 |
| 第四部分 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读硕士期间取得的学术成果 |
| 致谢 |
（5）三七皂苷R1对局灶性脑缺血损伤大鼠急性期保护作用的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1 缺血性中风急性期主要的病理生理改变 |
| 1.1 血脑屏障破坏 |
| 1.2 线粒体能量代谢异常及细胞凋亡 |
| 1.3 激活内源性神经再生 |
| 2 缺血性中风急性期的中医认识 |
| 3 缺血性中风急性期的干预策略 |
| 3.1 溶栓与取栓 |
| 3.2 神经保护 |
| 3.3 中医药角色 |
| 第二部分 实验研究 |
| 1 大鼠局灶性脑缺血损伤模型的建立 |
| 2 三七皂苷R1对缺血性中风急性期大鼠血脑屏障的保护 |
| 3 三七皂苷R1对缺血性中风急性期大鼠脑内能量代谢的改善 |
| 4 三七皂苷R1促进缺血性中风大鼠海马区神经再生 |
| 5 三七皂苷R1干预下的大鼠脑缺血组织蛋白组学初探 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（6）电针联合丰富康复训练干预局灶性脑缺血大鼠HIF-1α及其下游因子表达介导血管新生的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 主要仪器 |
| 1.1.3 主要试剂 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 MCAO模型制备 |
| 1.2.2 模型成功标准 |
| 1.2.3 模型剔除标准 |
| 1.2.4 实验动物分组 |
| 1.2.5 干预治疗手段 |
| 1.2.6 实验指标与方法 |
| 1.3 统计学分析 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 各组大鼠不同时程下神经功能缺损体征评分比较 |
| 2.2 各组大鼠不同时程下缺血侧局部脑血流量比较 |
| 2.3 各组大鼠不同时程下缺血侧脑组织病理学比较 |
| 2.4 各组大鼠不同时程下缺血侧脑皮质区MVD比较 |
| 2.5 各组大鼠不同时程下缺血侧脑皮质区HIF-1α、VEGF、EPO蛋白表达比较 |
| 2.5.1 各组大鼠不同时程下缺血侧脑皮质区HIF-1α蛋白表达比较 |
| 2.5.2 各组大鼠不同时程下缺血侧脑皮质区VEGF蛋白表达比较 |
| 2.5.3 各组大鼠不同时程下缺血侧脑皮质区EPO蛋白表达比较 |
| 2.6 各组大鼠不同时程下缺血侧皮质区HIF-1αmRNA、VEGF mRNA、EPO mRNA表达比较 |
| 2.6.1 各组大鼠不同时程下缺血脑皮质区HIF-1αmRNA表达比较 |
| 2.6.2 各组大鼠不同时程下缺血脑皮质区VEGF mRNA表达比较 |
| 2.6.3 各组大鼠不同时程下缺血脑皮质区EPO mRNA表达比较 |
| 3 讨论 |
| 3.1 实验动物模型制备与评价 |
| 3.1.1 模型制备方法选择 |
| 3.1.2 实验动物选择 |
| 3.1.3 模型制备成功的评价方法 |
| 3.2 中医学对脑卒中的认识 |
| 3.2.1 中医学病因病机 |
| 3.2.2 基于中医理论的选穴 |
| 3.3 血管新生--治疗缺血性脑卒中的新靶点 |
| 3.4 干预治疗手段的选取 |
| 3.4.1 电针疗法 |
| 3.4.2 丰富康复训练 |
| 3.4.3 电针联合丰富康复训练 |
| 3.5 干预治疗对神经功能缺损体征评分的影响 |
| 3.6 干预治疗对局部脑血流量的影响 |
| 3.7 干预治疗对大鼠缺血侧脑组织病理学影响 |
| 3.8 干预治疗对缺血后HIF-1α、VEGF、EPO蛋白和基因表达影响 |
| 3.8.1 干预治疗对缺血后HIF-1α蛋白及基因表达影响 |
| 3.8.2 干预治疗对缺血后VEGF蛋白及基因表达影响 |
| 3.8.3 干预治疗对缺血后EPO蛋白及基因表达影响 |
| 3.9 干预治疗对缺血后微血管密度影响 |
| 3.10 问题与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 中医药干预缺血性脑卒中后血管新生的作用机制 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（7）PI3K/Akt通道在七氟烷后处理脑缺血糖尿病大鼠神经保护作用的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附表 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 博士期间发表文章 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| English Paper One |
| English Paper Two |
（8）清脑益元汤对局灶性脑缺血损伤大鼠NPY、CGRP表达水平的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物及饲养条件 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验动物饲养条件 |
| 1.2 实验动物药物及给药方法 |
| 1.3 实验主要试剂、仪器及器材 |
| 1.3.1 主要试剂 |
| 1.3.2 主要液体及配制方法 |
| 1.3.3 主要仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 实验动物分组及处理 |
| 2.2 实验模型建立 |
| 2.2.1 麻醉固定 |
| 2.2.2 分离血管 |
| 2.2.3 线栓的制备 |
| 2.2.4 插线与结扎 |
| 2.2.5 缝合与消毒 |
| 2.3 实验模型成功评定标准 |
| 2.4 实验动物取材 |
| 2.5 指标检测 |
| 2.5.1 制备脑组织石蜡切片 |
| 2.5.2 HE染色法检测神经细胞形态学变化 |
| 2.5.3 免疫组化法检测脑组织NPY蛋白含量 |
| 2.5.4 Western blot检测脑组织的CGRP蛋白含量 |
| 2.5.5 统计处理 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 实验动物脑缺血损伤后的表现 |
| 3.2 神经功能缺损评分结果 |
| 3.3 HE染色评估脑组织形态学改变 |
| 3.4 免疫组化法测脑组织NPY蛋白阳性细胞表达 |
| 3.5 Western blot法测脑组织的CGRP蛋白含量 |
| 4 讨论 |
| 4.1 中医学对中风的认识 |
| 4.1.1 中风病名之源流 |
| 4.1.2 中风病因病机之探究 |
| 4.2 现代医学对缺血性脑卒中的阐释概要 |
| 4.2.1 缺血性脑卒中的发病机制 |
| 4.2.2 缺血性脑卒中的治疗进展 |
| 4.3 清脑益元汤防治缺血性脑卒中的机理及策略 |
| 4.3.1 探究痰瘀交阻,热毒内生,肾虚髓亏病机理论 |
| 4.3.2 谨守病机,清补兼施 |
| 4.3.3 清脑益元汤组方析义 |
| 4.4 局灶性脑缺血大鼠脑组织中NPY、CGRP肽类的表达 |
| 4.4.1 NPY与局灶性脑缺血的关系 |
| 4.4.2 CGRP与局灶性脑缺血的关联 |
| 4.4.3 NPY与 CGRP间的相互联系 |
| 4.5 清脑益元汤对NPY、CGRP肽类的影响 |
| 4.5.1 清脑益元汤对NPY表达的影响 |
| 4.5.2 清脑益元汤对CGRP蛋白表达的影响 |
| 4.5.3 清脑益元汤对NPY和 CGRP的综合调节效应 |
| 4.6 实验方法分析 |
| 4.6.1 动物的选择 |
| 4.6.2 造模方案的选择 |
| 5 存在的问题和展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 主要缩略词表 |
| 综述 基于内质网应激-自噬途径探究脑缺血再灌注损伤及中医药防治进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历及攻读学位期间获得的科研成果 |
（9）川芎嗪联合神经干细胞移植干预局灶性脑缺血大鼠的作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词 |
| 第一部分 文献综述 川芎嗪对缺血性脑卒中神经保护作用的研究进展 |
| 1 抑制炎性反应 |
| 2 抑制细胞凋亡 |
| 2.1 Caspase-3途径 |
| 2.2 Bcl-2家族 |
| 3 维持血脑屏障完整性 |
| 4 抑制神经细胞兴奋性中毒 |
| 5 清除自由基降低氧化应激反应 |
| 6 促进神经结构恢复 |
| 6.1 增加VEGF表达 |
| 6.2 增加NGF表达 |
| 6.3 增加bFGF表达 |
| 6.4 增加BDNF表达 |
| 7 促进神经干细胞发挥作用 |
| 7.1 内源性神经干细胞 |
| 7.2 外源性神经干细胞 |
| 8 总结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 一 材料和方法 |
| 1 实验材料与试剂 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物及试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 MCAO大鼠模型制备 |
| 2.2 细胞培养 |
| 2.3 神经干细胞移植 |
| 2.4 分组及给药 |
| 3 体重及行为学检测 |
| 3.1 体重检测 |
| 3.2 行为学检测 |
| 4 实验动物取材及处理 |
| 4.1 新鲜组织取材 |
| 4.2 心脏灌流固定取材 |
| 4.3 动物组织切片及染色 |
| 4.4 Western blot法检测 |
| 4.5 实时荧光定量PCR法检测 |
| 5 图像分析 |
| 6 统计方法 |
| 二 结果与分析 |
| 1 对体重和神经功能影响 |
| 1.1 对体重的影响 |
| 1.2 对神经行为学的影响 |
| 2 对神经干细胞的影响 |
| 2.1 移植的NSCs在MCAO模型大鼠脑组织中的变化 |
| 2.2 对MCAO模型大鼠NSCs增殖的影响 |
| 2.3 对MCAO模型大鼠NSCs迁移的影响 |
| 2.4 对MCAO模型大鼠NSCs分化的影响 |
| 3 促进NSCs迁移的机制研究 |
| 3.1 Western Blot法检测Nrf2/HO-1/CXCR4通路的调控因子 |
| 3.2 实时荧光定量PCR法检测迁移调控因子及神经营养因子 |
| 三 讨论 |
| 1 TMP联合NSCs移植对MCAO模型大鼠的药效作用 |
| 2 外源性NSCs在MCAO模型大鼠中的作用 |
| 3 内源性NSCs在MCAO模型大鼠神经发生作用 |
| 4 NSCs迁移的机制探索 |
| 结语 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（10）通络清脑方对缺血性卒中急性脑水肿的影响及星形胶质HMGB1/TLR4机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 高迁移率组1(HMGB1)在缺血性中风及其相关疾病研究进展 |
| References |
| 综述二 星形胶质细胞维持大脑中水平衡的作用 |
| References |
| 综述三 神经血管单元在缺血性脑水肿中作用机制和中药对其治疗的研究进展 |
| References |
| 前言 |
| 第一部分 通络清脑方对缺血再灌注大鼠皮层脑水肿及星形胶质HMGB1/TLR4通路和血脑屏障的影响 |
| 第一节 通络清脑方对缺血再灌注大鼠急性期水肿的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论与小结 |
| 第二节 通络清脑方对缺血再灌注大鼠24h星形胶质细胞HMGB1/TLR4通路研究 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论与小结 |
| 第三节 通络清脑方对缺血再灌注大鼠48h星形胶质细胞HMGB1/TLR4通路研究 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论与小结 |
| 第四节 通络清脑方对缺血再灌注大鼠血脑屏障保护作用 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论与小结 |
| 第一部分 小结 |
| 第二部分 通络清脑方及其有效成分对OGD/R星形胶质细胞神经炎症及HMGB1/TLR4通路的影响 |
| 第一节 通络清脑方及其有效成分对OGD/R损伤的星形胶质细胞的保护作用 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论与小结 |
| 第二节 抑制HMGB1后,TLQN和PNS对OGD/R损伤HA细胞HMGB1/TLR4/NF-κB通路及水肿相关炎性相关因子的作用机制研究 |
| 材料方法 |
| 结果 |
| 讨论与小结 |
| 第三节 抑制HMGB1后,TLQN和PNS对OGD/R损伤HA和BMECs细胞共培养紧密连接的研究 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论与小结 |
| 第二部分 小结 |
| 结语 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 通络醒脑方主要成分的含量测定 |
四、局灶性脑缺血后鼠脑组织tPA基因表达及其与细胞凋亡（论文参考文献）
- [1]基于“脉腑”与“脾脉相关”理论探讨中风病脑脉燥变机制及健脾益智法调节MCAO大鼠内皮功能的研究[D]. 陈丽斌. 福建中医药大学, 2021(01)
- [2]青年缺血性脑卒中后海马齿状回神经分化及紫杉叶素干预缺血性脑卒中的作用及机制研究[D]. 王福星. 扬州大学, 2021(08)
- [3]活血凉血中药入脑有效成分抗缺血性脑卒中的作用及机制研究[D]. 刘佳佳. 扬州大学, 2021
- [4]针刺调控神经细胞自噬与凋亡以延长脑梗死溶栓时间窗的研究[D]. 张智慧. 南京中医药大学, 2021(01)
- [5]三七皂苷R1对局灶性脑缺血损伤大鼠急性期保护作用的研究[D]. 刘博文. 南京中医药大学, 2021(01)
- [6]电针联合丰富康复训练干预局灶性脑缺血大鼠HIF-1α及其下游因子表达介导血管新生的机制研究[D]. 王玉. 安徽中医药大学, 2021(01)
- [7]PI3K/Akt通道在七氟烷后处理脑缺血糖尿病大鼠神经保护作用的研究[D]. 张华朋. 山东大学, 2020(10)
- [8]清脑益元汤对局灶性脑缺血损伤大鼠NPY、CGRP表达水平的影响[D]. 向昱臻. 广西中医药大学, 2020(02)
- [9]川芎嗪联合神经干细胞移植干预局灶性脑缺血大鼠的作用机制研究[D]. 王艳秋. 北京中医药大学, 2020(04)
- [10]通络清脑方对缺血性卒中急性脑水肿的影响及星形胶质HMGB1/TLR4机制研究[D]. 田方泽. 北京中医药大学, 2020(04)