一、全反式视黄酸对人α1(Ⅰ)前胶原启动子活性的作用（论文文献综述）
王志敏[1]（2020）在《基于lncRNA-H19探究双氢青蒿素调控肝星状细胞脂滴代谢抗肝纤维化的分子机制》文中进行了进一步梳理[背景]肝纤维化是对酒精肝、脂肪肝等多种慢性肝损伤的一种补偿性修复过程。肝脏损伤时,静息的肝星状细胞（Hepatic stellate cells,HSCs）转分化为具有增殖、收缩特性的肌成纤维细胞,表达α-SMA并分泌大量的细胞外基质,大量胶原沉积,造成肝脏结缔组织异常增生。纤维化的过程长期持续就会发展成肝硬化,甚至是肝癌。现已公认HSC活化是肝纤维化的核心环节,有效抑制HSC增殖和收缩,诱导活化HSC凋亡和衰老是抑制肝纤维化发展的重要方式。维持HSC活化需要大量的能量供应,抑制线粒体氧化功能能够逆转肝纤维化。另外,来自自分泌和旁分泌的TGF-β和IL-1β等因子的持续刺激也不断诱导HSC活化。阻断维持HSC活化的因素是抑制HSC活化的有效手段。有研究显示,静息的HSC储存大量脂滴（lipid droplet,LD）,这些脂滴含有甘油三酯,视黄醇酯,胆固醇酯等物质,用于维持肝星状细胞正常生理功能。重要的是,HSC活化往往伴随着LD的消失。研究LD消失的机制或许能够寻找抑制HSC活化的新方向和新靶标。lncRNA-H19是已经被证实调控肝纤维化发生发展的重要分子,与脂肪酸,胆汁酸和葡萄糖等多种代谢方式有关。但是上述调控过程一般发生在肝细胞和胆管细胞中,其是否调控HSC的生理功能还不清楚。考虑到HSC在肝纤维化发生发展中的关键性作用,我们提出lncRNA-H19调控HSC脂滴代谢发挥促肝纤维化的作用的科学假说。另外,基于对lncRNA-H19的研究,我们寻找抑制lncRNA-H19的中药有效成分,并进一步探究其抗肝纤维化的具体机制。[方法]1.体外研究选取HSC-LX2细胞株作为本论文体外研究对象。Real-time PCR,western blot和免疫荧光实验检测目的基因,蛋白的表达情况;油红O染色和尼罗红染色检测细胞中LD含量;双荧光素酶报告基因实验检测lncRNA-H19启动子活性;荧光原位杂交检测细胞中lncRNA-H19水平;RNA免疫沉淀和共免疫沉淀用于检测多个蛋白与lncRNA之间的结合情况,另有多个分子实验被用来阐明其潜在机制。2.体内研究将48只ICR雄性小鼠随机分为6组（每组8只）:正常对照组、CCl4模型组、CCl4+vector 组、CCl4+ad.shH19 组、CC14+DHA+ad.pNC 组、CCl4+DHA+ad.pH19组。肝组织的HE、Masson、Sirius Red染色表现肝组织结构与胶原沉积现象;α-SMA的IHC实验表现HSC活化情况;全自动生化仪检测血清中谷草转氨酶移酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、过硫酸铵（ALP）、乳酸脱氢酶（LDH）、透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）、Ⅳ型胶原酶（Ⅳ-C）和Ⅲ型前胶原（PC-Ⅲ）的表达;Real-time PCR和western blot分析原代HSC中目的基因,蛋白表达水平;免疫荧光双染检测肝组织中目的蛋白水平。[结果]我们的研究证实lncRNA-H19在HSC活化过程中表达增加,低氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor,HIF-1α）促进了 lncRNA-H19 的转录表达。体内抑制lncRNA-H19表达可明显改善CC14诱导的小鼠肝纤维化的组织病理学特征;体外抑制lncRNA-H19表达能够抑制HSC活化,并伴随着HSC中LD含量的增加。更重要的是,lncRNA-H19降低甘油三酯水平,促进甘油三酯水解成脂肪酸,经线粒体氧化后供能;同时,lncRNA-H19也降低视黄醇水平,促进视黄醇水解生成视黄酸,调控多种纤维化因子的表达。机制上,lncRNA-H19调控甘油三酯代谢依赖于AMPKα/ACC信号通路,LncRNA-H19驱动AMPKα与LKB1相互作用,导致形成LKB1/AMPKα复合物,以促进LKB1磷酸化AMPKα,磷酸化的AMPKα通过激活下游分子ACC促进线粒体氧化蛋白CPT1A和PPARα的表达。另一方面,lncRNA-H19降低视黄醇代谢关键酶ADH3,使用ADH3抑制剂4-MP后能够逆转lncRNA-H19对视黄酸信号和纤维化蛋白的促进作用。接下来,我们筛选出了中药活性成分,发现双氢青蒿素（dihydroartemisinin,DHA）以剂量依赖的方式抑制了 lncRNA-H19的表达水平。基于对lncRNA-H19的研究,我们发现DHA通过降低lncRNA-H19恢复HSC脂滴含量,抑制HSC活化,改善肝纤维化。[结论]本论文的研究明确了 HSC脂滴代谢的调控机理与分子靶标lncRNA-H19,有助于揭示lncRNA-H19在HSC活化过程中所发挥的重要作用。在此基础上明确了 DHA抑制HSC脂滴代谢的分子机理。这些研究为揭示DHA的抗肝纤维化作用并使其成为有潜力的抗肝纤维化药物提供更为深入的理论与实验依据。
王永照[2]（2019）在《CRISPR/Cas9敲除Ptgs2对肝星状细胞凋亡的影响》文中研究表明目的:研究敲除HSC-T6细胞Ptgs2基因后对其凋亡的影响,为临床上肝硬化防治探索新策略。方法:将大鼠HSC-T6细胞设置KD组(HSC-T6-Ptgs2-/-细胞)、阴性对照NC组（HSC-T6-NC细胞）和空白对照CON组（HSC-T6细胞）。LV-Ptgs2-sgRNA慢病毒载体转染KD组,LV慢病毒载体转染NC组,CON组常规培养,不做干预。转染72小时后,电子荧光显微镜观察慢病毒转染效果并拍片,计算转染率。转染后72小时、96小时,采用Western blot分别检测三组HSC-T6细胞Ptgs2基因蛋白表达情况。转染5天后Annexin V-APC单染法染色,采用流式细胞技术分别检测三组细胞凋亡率。结果:（1）各组HSC-T6细胞慢病毒转染情况:KD组和NC组细胞均可见绿色荧光,CON组未见绿色荧光,经计算KD组和NC组转染效率在80%以上,慢病毒载体转染成功。（2）各组HSC-T6细胞Ptgs2蛋白的表达情况:KD组细胞LV-Ptgs2-sgRNA慢病毒感染72小时,Ptgs2蛋白表达明显低于NC组、CON组,差异具有统计学意义（P<0.05）,NC组与CON组表达无明显差异;转染96小时后,KD组Ptgs2蛋白表达进一步下调,NC组和CON组Ptgs2蛋白明显升高,KD组明显低于NC组和CON组,差异有统计学意义（P<0.01）。（3）转染5天后,Annexin V-APC单染各组细胞,KD组凋亡率明显高于NC组和CON组,差异有统计学意义（P<0.01）,NC组高于CON组,两两相比均有显着性差异（P<0.01）。结论:1.靶向敲除Ptgs2基因后可促进HSC-T6细胞的凋亡。
曹俊[3]（2017）在《视黄酸调控人骨髓间充质干细胞成脂与成骨分化的机制研究》文中进行了进一步梳理成人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）能定向分化为成骨细胞和脂肪细胞,这两种细胞分化比例失衡可能是骨质疏松等疾病发生发展的重要因素。视黄酸（Retinoic acid,RA）是维生素A体内转化而来的一类信号分子,在胚胎发育与细胞分化等方面有重要生理功能。视黄酸可激活视黄酸受体（retinoic acid receptor,RAR）和视黄酸 X 受体（retinoic acid X receptor,RXR）,参与细胞成脂与成骨分化的调控。因此,深入探讨视黄酸受体调控hBMSCs成脂与成骨分化的分子机制,将有助于骨质疏松等疾病发病机制的阐明。本课题在高通量转录组测序及生物信息学分析的基础上,结合具体功能实验开展研究,以明确两类视黄酸受体（RAR和RXR）信号在hBMSCs成脂与成骨分化过程中不同的效应及其分子调控机制。第一部分:人骨髓间充质干细胞成脂分化的转录组学分析目的:通过对hBMSCs成脂分化过程的转录组测序及生物信息学分析,明确视黄酸信号在成脂分化过程的可能角色。方法:体外分离培养人骨髓间充质干细胞并鉴定,然后诱导成脂分化并进行多时点转录组测序,对测序结果进行加权基因共表达网络分析（weighted gene co-expression network analysis,WGCNA）等生物信息学处理。结果:基于成脂分化过程转录组测序数据的WGCNA结果显示,RAR信号相关基因RARB、RARG、CRABP2和RARRES1位于与hBMSCs样本最相关的Turquoise模块内,该模块参与成脂分化的启动,RAR在该模块内是一类负调控信号。RXR信号相关基因RXRA位于与成脂诱导7天样本最相关的Blue模块内,该模块与成脂分化启动后的进一步发展相关,RXRA在该模块内是正调控信号。在Turquoise模块内与RAR显着相关的信号通路有Focal adhesion,Regulation of actin cytoskeleton,ECM-receptor interaction,Cytokine-cytokine receptor interaction,TNF,PI3K-Akt,Jak-STAT,VEGF,Hippo,Rap1,MAPK和Ras等,RAR可能通过上述通路的多级调控抑制成脂分化。在Blue模块内与RXR最相关的信号通路包括HIF-1,PI3K-AKT及雌激素等经典通路,以及多种脂类及氨基酸代谢通路,提示RXR在胞内可能主要通过代谢调节从而促进细胞表型的转换。结论:RAR可能是成脂分化启动的负调控信号,而RXR可能是成脂分化的正调控信号,促进成脂分化启动后的进一步发展。第二部分:视黄酸调控人骨髓间充质干细胞成脂与成骨分化的功能研究目的:通过具体功能研究,明确RAR和RXR调控hBMSCs成脂与成骨分化过程的详细分子机制。方法:分别采用视黄酸受体（RAR和RXR）激动剂或拮抗剂作用于hBMSCs,利用油红O染色,茜素红染色等方法分析细胞表型变化,利用荧光定量PCR和免疫印迹技术检测成脂及成骨标志基因、TGFβ/SMAD和Wnt信号通路相关基因与蛋白的表达水平,利用荧光素酶报告基因法检测转录因子的启动子活性,利用慢病毒介导的shRNA下调目的基因的表达,检测相关基因及表型变化。结果:RAR在早期促进成脂分化但中后期明显抑制分化,其抑制分化的机制涉及TGFβ/SMAD和Wnt信号通路,RAR上调TGFβ/SMAD信号通路相关基因的表达,同时促进SMAD2和SMAD3的磷酸化。RAR上调经典Wnt/β-catenin通路的表达,但下调非经典通路WNT5A、5B表达。RAR抑制主要成脂转录因子C/EBPβ和PPARy的启动子活性。介导RAR功能的主要亚型是RARβ。RXR促进hBMSCs成脂分化,但是抑制SW872细胞成脂分化,对成脂分化的作用呈细胞特异性。RAR显着上调BMP2、OSX、RUNX2、OCN和OPN的表达,但是下调ALPL、Col1A1和ON的表达,并抑制细胞钙结节的形成。RXR对BMP2、OSX、RUNX2和OCN的表达无明显作用,轻度上调OPN的表达,同时轻度抑制ALPL、Col1A1和ON的表达,但对细胞钙化过程无明显影响。RXR还可促进成骨诱导过程中的hBMSCs向脂肪细胞分化。结论:RAR和RXR对hBMSCs成脂与成骨分化表现出明显不同的效应和作用机制。RAR初期促进成脂分化,但后期通过上调TGF(3/SMAD和Wnt信号通路抑制成脂分化,RXR对成脂分化的效应呈细胞特异性。RAR诱导成骨分化但抑制细胞钙化,RXR可促进成骨诱导过程中的细胞成脂分化。第三部分:视黄酸作用于人骨髓间充质干细胞成脂与成骨分化过程的转录组学研究目的:从转录组尺度认识RAR和RXR对hBMSCs成脂与成骨分化调控的作用机制。方法:运用RNA-seq高通量测序技术获得RAR激动剂和RXR激动剂作用于hBMSCs成骨与成脂分化过程的差异mRNAs及lncRNAs表达谱,运用生物信息学方法对数据进行分析,明确RAR和RXR调控的信号通路及其互作网络。进一步利用miRNA-seq技术筛选RAR和RXR调控的miRNAs及其靶基因谱,构建成骨及成脂分化过程中RAR和RXR调控的miRNAs-mRNAs互作网络。结果:基于RAR和RXR激动剂作用于hBMSCs成脂与成骨分化过程的RNA-seq 结果显示,RAR 激动剂上调 Focal adhesion、Hippo、Rap1、PI3K-AKT、Wnt和TGFβ等信号通路,下调PPAR信号通路。RXR激动剂则上调PPAR信号通路,并与众多脂类与氨基酸代谢通路密切相关。RAR激动剂与RXR激动剂分别作用于不同的lncRNAs、miRNAs及其靶基因群。结论:RAR是一类细胞分化调控信号,调控hBMSCs成骨与成脂分化,涉及多种信号通路以及lncRNAs、miRNAs等的联合作用;RXR是一类细胞代谢调控信号,主要参与胞内脂代谢和氨基酸代谢等的调控。
胡海燕[4]（2017）在《全反式维甲酸在宫腔粘连模型中抗子宫内膜纤维化作用及机制研究》文中研究表明研究背景子宫作为女性的内生殖器,是孕育胎儿的重要器官。女性进入育龄期后,子宫内膜的功能层在雌孕激素作用下发生增生、剥脱出血及再生修复,这种生理性的周期性修复过程不会出现宫腔粘连,有学者将这种修复过程称为无瘢痕修复[1]。当基底层子宫内膜受到创伤、感染,出现纤维化改变时即可发生宫腔粘连（IUA）[2-4]。IUA的治疗难点是预防分离术后再粘连的形成[5]。转化生长因子β1（TGF-β1）是最强烈的致纤维化因子[6]。在IUA患者的子宫内膜中检测到TGF-β1的高表达[7]。此外,基质金属蛋白酶9[8,9]、胰岛素样生长因子-Ⅰ[10]等细胞因子均可能参与了宫腔粘连的形成。全反式维甲酸（ATRA）是维生素A的衍生物,具有广泛的生物学活性[11-13],近年许多学者还报导发现具有抗纤维化作用[14]。目前有关ATRA在宫腔粘连领域中的研究未见报道。目的本课题基于ATRA抗纤维化作用,通过体外实验探讨其对人子宫内膜基质细胞转化为肌成纤维细胞的影响,通过体内实验观察ATRA在IUA动物模型上的预防和治疗作用,初步揭示ATRA在IUA领域的抗纤维化价值,为临床应用ATRA提高IUA治疗效果、改善其预后提供实验依据。方法第一章:ATRA作用于ESCs纤维化模型;RT-PCR检测COL1A1、α-SMA mRNA的水平;WB检测COL1A1、α-SMA蛋白表达情况。第二章:建立宫腔粘连模型,腹腔注射低、中、高浓度ATRA;HE染色进行子宫内膜腺体的计数;Masson染色观察子宫内膜间质胶原的沉积;IHC检测子宫内膜TGF-β1的表达;HE染色光镜下观察心、肝、肾组织结构;RT-PCR检测 TGF-β1、smad4、COL1A1 及 COL1A2mRNA 的表达;WB 检测 TGF-β1、smad4、COLI蛋白的表达。第三章:于建模后7d、14d开始腹腔注射ATRA;HE染色、Masson染色、IHC检测、RT-PCR检测、WB检测内容及方法均同第二章。结果第一章:在TGF-β1的持续刺激下,原代人ESCs呈现出肌成纤维细胞的改变。ATRA 能显着下调 COL1A1、α-SMAmRNA 的表达,下调 COL1A1、α-SMA蛋白的表达。第二章:ATRA预防性实验能显着增加子宫内膜腺体的数量,减少胶原的沉积,下调TGF-β1蛋白的表达。各组心、肝、肾组织结构正常。ATRA能显着下调 TGF-β1、smad4、COL1A1 及 COL1A2mRNA 的表达,下调 TGF-β1、smad4、COLI蛋白的表达。第三章:ATRA早期治疗能增加腺体计数,降低胶原沉积,显着降低TGF-β1、smad4、COL1A1 及 COL1A2mRNA 的表达;下调 TGF-β1、smad4、COL I蛋白的表达。ATRA晚期治疗未能改善子宫内膜纤维化。结论ATRA在体外能抑制子宫内膜基质细胞转化为肌成纤维细胞,降低细胞胶原COL1A1的生成,从而发挥其抗子宫内膜纤维化的作用。ATRA通过下调TGF-β1/smad信号通路,可预防宫腔粘连形成。如在早期应用有治疗IUA作用,晚期应用治疗IUA效果不明显。ATRA对心、肝、肾无病理毒性损害。
王大鹏[5]（2015）在《全反式视黄酸对3T3-L1前脂肪细胞增殖与分化的影响》文中指出本研究旨在探讨全反式视黄酸（all trans retinoic acid,ATRA）对3T3-L1前脂肪细胞增殖与分化的影响。培养3T3-L1前脂肪细胞，分别设置对照组（0mol/L）以及10-9、10-8、10-7、10-6和10-5mol/L浓度的ATRA处理组，分别在第0、2、4、6、7和8d通过MTS比色法检测ATRA对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响；在诱导分化第12d，油红O染色观察3T3-L1前脂肪细胞分化的形态变化，油红O染色提取法分析不同浓度ATRA对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响，Real-timePCR技术检测前脂肪细胞分化相关基因mRNA水平的表达。结果如下：（1）在3T3-L1前脂肪细胞生长期间，与对照组（0mol/L）相比，10-9mol/L浓度的ATRA处理组不影响3T3-L1前脂肪细胞的增殖（P>0.05）。10-8、10-7、10-6和10-5mol/L浓度的ATRA处理组随着时间的增加，显着抑制了细胞的增殖（P<0.01）。其中，10-6和10-5mol/L浓度的ATRA处理组抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖的效果最为明显。（2）与对照组（0mol/L）相比，10-7、10-6和10-5mol/L浓度的ATRA抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化（P<0.01），而10-9和10-8mol/L浓度的ATRA对3T3-L1前脂肪细胞分化没有显着影响（P>0.05）。与10-7mol/L浓度的ATRA处理组相比，10-5mol/L浓度的ATRA对3T3-L1前脂肪细胞分化的抑制效果更为显着（P<0.05）。（3）在诱导分化第12d，10-9、10-8、10-7、10-6和10-5mol/L浓度的ATRA处理组中PPARγ、C/EBPα、LXRα、FAS、SCD-1和Glut-4基因mRNA表达减少，与对照组（0mol/L）比较差异极显着（P<0.01）。（4）在诱导分化第12d，10-7、10-6和10-5mol/L浓度的ATRA处理组中SREBP-1c基因mRNA表达上升，与对照组（0mol/L）比较差异极显着（P<0.01）。10-8mol/L浓度的ATRA处理组中ACCα基因mRNA表达上升，与对照组（0mol/L）比较差异显着（P<0.05）。10-5mol/L浓度的ATRA处理组中β-catenin基因mRNA表达上升，与对照组（0mol/L）比较差异极显着（P<0.01）。
葛明盖[6]（2015）在《810nm半导体激光照射对小鼠皮肤胶原影响的机制研究》文中进行了进一步梳理目的:本项研究通过体内实验,旨在探索810nm半导体激光照射对小鼠背部皮肤结构重塑、胶原蛋白的合成和分解的影响,并揭示S100a8-IKBa-核转录因子kappa B（NF-κB）信号通路和TGF-β/Smad信号通路在激光诱导的皮肤胶原蛋白更新中的作用机制,从分子学水平为810nm半导体激光用于治疗皮肤老化提供理论依据。材料与方法:利用12只ICR小鼠作为实验对象,随机分两笼喂养,所有小鼠实验前背部剃毛后分六个区,左侧为分别为各照射组的空白对照组,对应的右侧（从头部到尾部）分别为20J/cm2激光照射组、40J/cm2激光照射组和60 J/cm 2激光照射组。小鼠分别在1、3、5、7天接受810nm半导体激光照射后,于30天后随机取一笼小鼠观察其皮肤外观和生活状态,进行真皮厚度的测量,真皮厚度的测量是由独立的组织学家采用Image-Pro Plus 6.0软件,每个样本随机选取六个位点,测量平均值除于显微镜的放大倍数作为该样本的真皮厚度,单位是μm。并观察组织学改变和利用免疫组化技术对I型胶原进行检测。对胶原改变较明显的40J/cm2激光照射组进行扫描电子显微镜观察其电镜下形态学的变化。对另一笼小鼠于照射后0、1、3、7、30天取皮肤样本进行病理和分子生物学检测。采用HE染色观察各个时间皮肤组织学和结构的变化;采用RT-PCR和western检测proclla2和procola1、MMP-2、IL-6、IL-8、TNF-a、TGF-β、IL-1β、TIMP-1、IKBa和S100a8、S100a9的表达。结果:照射后30天观察小鼠照射区皮肤,可见照射区皮肤较对照区更具有光泽,触感较为细腻而弹性,小鼠活跃如常。在20 J/cm2照射区和40 J/cm2照射区皮肤未见损伤,但在60 J/cm2照射区可见部分皮肤损伤。12h组织学显示照射区表皮出现炎症反应,可见水肿,部分核大深染,可见60 J/cm2照射区部分弹性纤维变性。24h组织学提示照射区炎症反应明显减轻,细胞数目减少,弹性纤维变性较明显,可见部分胶原增生。30天后照射区胶原增生较为明显,尤以40 J/cm2照射区胶原增生更为显着;对照射后30天40 J/cm2照射区进行免疫组化检测发现I型胶原明显增多;进一步的扫描电子显微镜提示40 J/cm2照射区胶原排列整齐,胶原走向有序,胶原束完整;真皮厚度测量结果显示各激光照射组和其相应的空白对照组相比都具有统计学意义（P<0.05 n=36）,并且40 J/cm2照射组和其它照射组比较发现也具有统计学显着差异（F=10.407,P<0.01）;PCR12h检测IL-1β在60J/cm2激光照射区有表达,而s100a8则在各能量照射区域表达都有增加;24h检测结果Ⅲ型前胶原在40J/cm2激光照射区和60J/cm2激光照射区域表达均有增加;炎症因子TNF-α,IL-8,IL-6照射后在照射组与对照组相比,均可见表达增加,以IL-8,IL-6在较高能量区增加更为明显;第7天见IL-1β在60J/cm2激光照射区域表达减少,而在20J/cm2激光照射区,40J/cm2激光照射区域表达微有上升;Ⅲ型前胶原可见在照射区和空白对照区均有增加,30天后更为明显。12h Western blot结果也显示I型前胶原蛋白表达增加;MMP-2在40J/cm2激光照射区和60J/cm2激光照射区域表达均有增加而TIMP-1表达变化不明显;IKBa可见在各照射组表达增加;24h Western blot结果也显示Ⅰ型前胶原抗体a1和a2在40J/cm2激光照射区有较明显表达,而在其它照射组未见明显表达。结论:810nm半导体激光选择合适的能量并不会引起表皮的损伤,在我们的实验中40J/cm2激光照射组对胶原增生作用最为明显而且没有发现损伤,因此810nm半导体激光用于治疗皮肤老化是可行的;从长期结果来看,810nm半导体激光照射有效增加了小鼠背部皮肤厚度,胶原纤维排列致密,染色较深,皮肤结构得到了明显改善。从分子机制上,810nm半导体激光照射能够启动皮肤真皮的炎症反应,激活IL-6、IL-8、TNF-a、TIL-1β、S100a8、S100a9等炎症因子,进而激活NF-κB、TGF-β/Smad信号通路和RAGE,并通过MMP2降解老化的细胞外基质蛋白,它们共同作用从而促进了皮肤胶原蛋白的合成和更新。因此,810nm半导体激光能够直接作用于真皮层,刺激真皮的自我更新发挥抗老化作用,在光嫩肤方面具有良好的应用前景。
阳学风[7]（2012）在《RNAi沉默COX-2对HSC细胞动力学及脂质代谢的影响》文中指出第一章COX-2基因shRNA干扰载体的构建及抗肝纤维化作用目的构建COX-2shRNA真核表达载体，并观察其抗肝纤维化作用。方法1.分别从TRC shRNA、origene shRNA数据库中选取1条大鼠COX2基因及2条人COX2基因序列，分别构建3个COX-2ShRNA真核表达载体，进行酶切鉴定和测序；2.脂质体介导重组质粒转染HSC-T6细胞株,荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR检测COX-2mRNA表达, Western-Blot检测COX-2蛋白质表达；3.SD大鼠尾静脉注射腺病毒介导的重组质粒体内转染；12周末,处死大鼠；RT-PCR检测肝组织COX-2mRNA表达,免疫组织化学检测肝组织COX-2蛋白质表达, HE、MASSON染色分析纤维病变程度,图像分析仪测量肝组织纤维病变面积。结果1.酶切、测序、比对显示，COX2-shRNA-1,2,3序列成功插入目的载体，且序列完全正确；2.荧光显微镜观察显示COX-2shRNA1、COX-2shRNA2、COX-2shRNA3转染效率均在70%以上；3.RT-PCR和Western-Blot检测证实,转染后COX-2shRNA1,2,3均可抑制HSC-T6细胞株COX-2基因的表达,但抑制程度不一,其中COX-2shRNA-1组抑制作用最明显；4. COX-2shRNA-1SD大鼠体内转染, RT-PCR和免疫组织化学检测证实,COX-2shRNA1可抑制COX-2基因表达及纤维化组织增生。结论1.成功构建COX-2基因shRNA干扰载体；2. COX-2shRNA1，2，3具有抑制HSC-T6细胞COX-2表达作用，其中COX-2shRNA-1抑制作用最为明显；3. COX-2shRNA1具有抑制SD大鼠肝组织COX-2表达的作用；4. COX-2shRNA1具有抑制SD大鼠肝纤维化作用。第二章RNAi沉默COX-2对HSC基因表达谱的影响目的研究COX-2shRNA1沉默肝星状细胞COX-2后，HSC基因表达谱的变化。方法1.实验分为COX-2shRNA1组、HK组（空载体组）；2.Trizol法提取HSC中的总RNA。纯化mRNA,两组mRNA分别逆转录合成荧光标记的cDNA混合物探针；3.荧光标记的cDNA混合物探针，与27K Rat Genome Array杂交，经严格洗片后，用GenePix40OOB扫描仪扫描芯片荧光信号图像，计算机软件数据处理，将所得的数据进行比较，得到二者间基因表达的差异信息。结果1.按Ratio值≥1.5和≤0.667标准,沉默COX-248小时、72小时后，HSC分别有45个和93个基因出现差异性表达；2.按Ratio值≥2.0和≤0.5标准,沉默COX-248小时、72小时后，HSC分别有12个和23个基因出现差异性表达；3.沉默COX-2后, HSC-T6差异表达基因主要与生物学过程（48小时、72小时分别为54.32%,44.29%）、分子功能（48小时、72小时分别为32.10%，37.14%）有关。结论1. COX-2shRNA1沉默COX-2后HSC基因表达谱发生变化；2. COX-2shRNA1沉默COX-2后差异表达基因主要与生物学过程、分子功能有关。目的研究COX-2shRNA1沉默肝星状细胞COX-2后，肝星状细胞脂肪代谢的变化,验证基因芯片筛选的与脂代谢密切相关的差异表达基因。第三章RNAi沉默COX-2对HSC细胞动力学及相关基因表达的影响目的研究COX-2shRNA1沉默肝星状细胞COX-2后，肝星状细胞增殖、凋亡及细胞周期的变化,验证基因芯片筛选的与细胞动力学密切相关的差异表达基因。方法1.MTT法检测细胞体外增殖活力；2.流式细胞术检测HSC-T6凋亡及细胞周期；3.RT-PCR法和Western blot法验证细胞动力学密切相关的差异表达基因。结果1.与空白对照组（NC）和空载体（HK）组相比，转染pYr-1.1-hU6-EGFP-COX2-shRNA1质粒，48h细胞凋亡率明显增加（P <0.01）；2.72h后HSC-T6细胞的增殖出现明显的抑制作用（P<0.05）；3. COX-2shRNA1组G1%相较NC组和HK组的G1%增高；；4.RT-PCR验证显示Cdc27、Sh3kbp1表达增加, Plcd4表达减弱,其余统学处理没有显着意义。结论1.COX-2shRNA1能够抑制HSC-T6细胞体外增殖；2.COX-2shRNA1能够促进HSC-T6凋亡；3.COX2ShRNA1可能在G0/G1期阻滞细胞周期；4. RT-PCR验证显示Cdc27、Sh3kbp1表达增加, Plcd4表达减弱。方法1.高效液相色谱法（HPLC）检测24小时、48小时、72小时各组细胞内甘油三酯、胆固醇、维生素A含量；2.RT-PCR检查验证脂代谢差异表达基因。结果1.COX-2ShRNA1组细胞内甘油三酯的含量随着时间的延长逐渐增加（F=34.524,P=0.000）,各时间段的空载体组与空白对照组比较，细胞内甘油三酯含量存在显着差异（均P<0.05）；2.COX-2ShRNA1组细胞内胆固醇的含量随着时间的延长逐渐降低（F=360.808,P=0.000）,与各时间段的空载体组与空白对照组比较，细胞内胆固醇含量存在显着差异（均P<0.05）；3.COX-2ShRNA1组细胞内维生素A的含量随着时间的延长逐渐增加（F=19346.057,P=0.000）,各时间段的空载体组与空白对照组比较，细胞内维生素A含量存在显着差异（均P<0.05）；4. RT-PCR验证显示Acsl6，Apol9a表达增加。结论1.RNAi沉默COX-2，HSC-T6细胞内甘油三酯、胆固醇、维生素A含量发生变化，其中甘油三酯、维生素A增加，胆固醇降低；2.RNAi沉默COX-2，Acsl6，Apol9a表达增加。
闫素梅,郭晓宇[8]（2010）在《维生素A营养对钙磷代谢的调节作用及其机制》文中研究指明维生素A是动物的必需脂溶性维生素之一。本文主要综述了维生素A营养对动物钙磷代谢的影响,并从钙磷代谢相关激素、活性因子的变化及其基因表达等不同方面阐述了维生素A对钙磷代谢的调节机制,为维生素A营养的深入研究和科学利用提供参考。
吕真[9]（2007）在《全反式维甲酸对猪脂肪细胞增殖分化与凋亡的影响》文中研究指明脂肪沉积包括脂肪细胞体积的增大和数目的增多。脂肪细胞体积的改变主要通过脂肪生成或脂肪溶解作用,脂肪细胞数目的改变包括前脂肪细胞增殖或前体脂肪细胞、脂肪细胞的凋亡或去分化。前体脂肪细胞分化为脂肪细胞的过程中,一系列基因时序表达促使了细胞最终分化成脂肪细胞。脂肪细胞分化及其调控的失常会引起肥胖、糖尿病、心脑血管等一系列的疾病。研究前体脂肪细胞增殖分化和凋亡的机理,通过调控脂肪细胞的体积和数量,可望为有效调控体脂沉积的有效途径。本研究以1-3 d健康长白仔猪为实验动物,以体外培养的前体脂肪细胞为研究对象,采用MTT法、RT-PCR、光学显微镜、油红O染色、油红O染色提取法、吖啶橙荧光染色和流式细胞术等方法,研究了全反式维甲酸（all-trans retinoic acid, ATRA）对猪脂肪细胞增殖、分化和凋亡的影响。得出如下研究结果:1、在不同浓度ATRA作用下,对猪脂肪细胞增殖能力的影响。结果表明,10 nmol/L、100 nmol/L ATRA促进前体脂肪细胞的增殖（p<0.05）,1μmol/L、10μmol/L、25μmol/L ATRA则抑制前体脂肪细胞的增殖（p<0.05）。ATRA对脂肪细胞增殖的作用呈浓度和时间依赖性。2、光学显微镜、油红O染色法观察细胞分化过程中的形态变化,油红O染色提取法定量分析细胞内脂肪生成及细胞分化情况,结果表明,10 nmol/L和100 nmol/L ATRA均能促进脂肪细胞分化（p<0.05）,而1μmol/L、10μmol/L、25μmol/L ATRA则抑制脂肪细胞的分化（p<0.05）。ATRA对猪脂肪细胞分化的作用呈浓度和时间依赖性。3、采用RT-PCR技术分析10 nmol/L、10μmol/L两种浓度ATRA对脂肪细胞分化早期分化标志基因LPL,和特异转录因子PPARγ2、C/EBPα和RARαmRNA表达的影响。结果显示,低浓度（10 nmol/L）ATRA对细胞的分化起明显的促进作用（p<0.05）,下调其受体RARαmRNA的表达但上调LPL、PPARγ2、C/EBPαmRNA的表达;高浓度（10μmol/L）ATRA对细胞的分化起明显的抑制作用（p<0.05）,上调RARαmRNA的表达但下调LPL、PPARγ2、C/EBPαmRNA的表达。提示ATRA可能通过调控RARα、LPL、PPARγ2、C/EBPαmRNA的表达发挥其促进或抑制脂肪细胞分化的生物学功能。4、利用吖啶橙荧光染色法观察不同浓度ATRA对前体脂肪细胞凋亡率的影响,结果表明,10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L ATRA可以不同程度的诱导前体脂肪细胞的凋亡;采用流式细胞术和半定量RT-PCR技术分析10μmol/L ATRA不同处理时间对前体脂肪细胞凋亡的诱导作用,结果提示,10μmol/L ATRA可随时间依赖性诱导前体脂肪细胞的凋亡,同时可以下调抗凋亡基因Bcl-2的表达、而上调促凋亡基因Bax的表达。提示ATRA可能通过调控Bcl-2、Bax mRNA的表达发挥其诱导脂肪细胞凋亡的作用。综上所述,不同浓度ATRA对猪前体脂肪细胞增殖分化和凋亡的影响是不同的,以上研究从细胞和分子水平为ATRA调控体脂沉积提供了理论依据。
裴凌鹏[10]（2008）在《类胡萝卜素对成骨细胞代谢的调控研究》文中提出目的骨折愈合及骨代谢消长是国际骨科学领域中最为关注的一大类健康问题。中医学认为,骨生长发育强劲衰弱与肾精盛衰关系密切。肾后天之精来源于脾精的滋养,故脾精不足,肾精亏虚,骨骼失养。而肾主骨生髓,髓生精血互化,血液运行濡养赖于肾精元气的蒸腾气化推动。若肾精不足,可致气化失源,无力温育激发推动脏气,气机升降出入失常,血失流畅,脉道涩滞乃至血瘀,反之血瘀有加重肾虚,因此骨折愈合、骨的消长主要与肾虚、脾虚、血瘀有关,以补肾、健脾、活血为原则;而活性氧与中医证型关系的研究发现,肾虚、脾虚、血瘀均与活性氧代谢有关,因此中药干预骨折愈合、骨代谢疾病（如骨质疏松症、关节性疾病等）的作用机理可能与中药某些具有较强清除活性氧功能的成分有关。类胡萝卜素是一大类广泛分布、具极强抗氧化功能的化合物,属食药兼顾类化合物,其对自由基（尤其是O2-、OH-、1O2）的淬灭能力远远强于维生素E。虽然类胡萝卜素研究始于19世纪50年代,而在其与骨折愈合、骨代谢方面的研究一直无人问津。上世纪90年代虽有关维生素A干预骨代谢的零星临床报道,但直到2005年国际类胡萝卜素科学年会上发表了一篇有关类胡萝卜素与骨健康基础研究报告后,世界机构才开始关注这一领域中基础性理论研究。就国内此类研究而言,尤其是类胡萝卜素中非维生素A源类化合物对骨折愈合、骨代谢调控的研究尚无报道。本课题研究目的通过从整体（D-半乳糖致衰老Wistar大鼠模型）-细胞（M3T3-E1成骨细胞模型）-分子（成骨细胞DNA）三个水平层次、结合体内（in vivo）-体外（in vitro）试验研究不同分子结构类胡萝卜素（β,β-胡萝卜素、虾青素、番茄红素、斑蝥黄质、玉米黄素、叶黄素）顺/反式异构体对不同类型自由基（O2-、OH-、1O2）淬灭的效果,同时从基因、蛋白质水平探索性研究了非维生素A源类胡萝卜素（虾青素、番茄红素、斑蝥黄质）对成骨细胞增殖与分化的调控机理,为进一步搞清此类化合物对骨代谢消长、骨折愈合干预作用可能的机理提供实验依据,并为开发应用防治此类骨病的中药复方开辟新的途径。研究内容与方法（1）制备、纯化、鉴定6种不同类胡萝卜素反式单体（2）体外诱导类胡萝卜素反式单体异构化为不同顺式单体（3）不同类胡萝卜素反式单体灌喂D-半乳糖致衰大鼠,对动物整体抗氧化能力;各脏器分布情况（含量、异构体比例等）、抗氧化指标;血清代谢动力学;骨代谢相关实验指标（股骨长度、重量、骨密度、骨钙、骨磷、骨镁、骨锰、羟脯氨酸含量、血钙、血磷含量、ALP活性、骨的结构力学和生物力学特点等）进行测定（4）不同类胡萝卜素反式单体处理H2O2损伤的M3T3-E1成骨细胞,对细胞存活率、SOD酶活性、ROS、LOP总量、DNA损伤以及细胞膜生物物理特性参数等进行测定（5）利用化学发光法、生物微弱发光法进行不同类胡萝卜素顺/反式单体体外淬灭不同自由基（O2-、OH-、1O2）效果的测定（6）不同非维生素A源类胡萝卜素反式单体（虾青素、斑蝥黄素、番茄红素）处理M3T3-E1成骨细胞,对细胞增殖、分化、DNA含量、蛋白质含量、ALP活性以及关键代谢调控基因（ALP、CollagenⅠ、RUNX2、TGFβ1、VEGF、BMP2、IGF-I、OPG、RANKL、RXR）进行测定结果（1）整体水平:将制备得到的β,β-胡萝卜素、虾青素、番茄红素、斑蝥黄质、玉米黄素、叶黄素反式单体分别灌喂D-半乳糖致衰老大鼠后,可以有效地降低血清TC、TG、LDL-c、TC/HDL-c、LDL-c/HDL-c及各脏器的MDA,升高血清、各脏器的SOD、GSH-Px酶活性,提高机体总抗氧化能力。同时也可增加D-半乳糖致衰老大鼠的股骨长度、重量和骨密度,提高重要的骨矿物质（钙、磷、镁、锰）、羟脯氨酸含量及其ALP活性,影响血钙、磷的含量,改善骨的结构力学和生物力学特点,减少衰老过程自由基对骨代谢的不良影响。（2）细胞水平:β,β-胡萝卜素、虾青素、番茄红素、斑蝥黄质、玉米黄素、叶黄素反式单体可有效地抑制H2O2对成骨细胞膜的损伤,降低细胞ROS、LPO含量,增加SOD酶活性,减少DNA损伤,提高细胞的存活率。实验发现,虾青素、斑蝥黄质和番茄红素在基因表达水平上对成骨细胞ALP、CollagenⅠ、RUNX2、TGFβ1、VEGF、BMP2、IGF-I、OPG、RANKL均有调控作用,在蛋白质水平对ALP、OPG以及总蛋白含量积累也有上调影响,且与相应的mRNA水平基本一致。此外,在调控RXR受体表达方面,3种类胡萝卜素与维生素A存在差异,这意味着非维生素A源类胡萝卜素化合物可能会在成骨细胞膜上与某一特异性受体识别结合,进入细胞代谢途径,激活或抑制某些关键性基因,对成骨细胞增殖与分化过程产生影响。同时由于3种类胡萝卜素吸收与维生素D吸收对于RXR受体不存在竞争,因此其摄入可能不会导致后者吸收障碍。（3）分子水平:制备得到的β,β-胡萝卜素、虾青素、番茄红素、斑蝥黄质、玉米黄素、叶黄素反式单体以及体外碘诱导下得到的不同顺式异构体对不同自由基（O2-、OH-、1O2）均有良好的淬灭效果,但就淬灭自由基类型而言:1O2＞OH-＞O2-;就类胡萝卜素反式单体淬灭能力而言:番茄红素＞虾青素＞斑蝥黄质＞叶黄素＞玉米黄素＞β,β-胡萝卜素;就类胡萝卜素顺/反式单体淬灭能力而言:类胡萝卜素反式单体＞13-顺式异构体＞11-顺式异构体＞9-顺式异构体。此外,在体外不同类胡萝卜素对成骨细胞DNA的复制具有一定的促进作用,同时可有效地减低自由基对DNA的损伤影响。结论（1）成功制备得到6种不同类胡萝卜素的顺/反式单体（2）成功建立一套整体、细胞、分子研究不同类胡萝卜素顺/反单体抗氧化、淬灭自由基的研究系统（3）首次成功地从基因、蛋白质水平上,就非维生素A源类胡萝卜素参与成骨细胞代谢调控进行了探索性研究
二、全反式视黄酸对人α1(Ⅰ)前胶原启动子活性的作用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、全反式视黄酸对人α1(Ⅰ)前胶原启动子活性的作用（论文提纲范文）
（1）基于lncRNA-H19探究双氢青蒿素调控肝星状细胞脂滴代谢抗肝纤维化的分子机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 肝纤维化疾病是困扰当今医学界的重大难题 |
| 1.2 恢复HSC脂滴含量逆转HSC活化 |
| 1.3 lncRNA-H19调控肝纤维化发生与发展 |
| 1.4 治疗肝纤维化的中药单体:双氢青蒿素 |
| 1.5 本论文的研究思路与内容 |
| 参考文献 |
| 第二章 敲低lncRNA-H19能够抑制HSC活化并改善肝纤维化 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 lncRNA-H19通过调控AMPKα信号通路调控脂肪酸代谢 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四章 lncRNA-H19通过ADH3信号通路调控视黄醇代谢 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第五章 双氢青蒿素通过降低lncRNA-H19改善肝纤维化 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.3 结果 |
| 5.4 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文总结与展望 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读硕士期间取得的成果 |
| 致谢 |
（2）CRISPR/Cas9敲除Ptgs2对肝星状细胞凋亡的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验细胞 |
| 2.1.2 主要实验试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.1.4 常用试剂配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 慢病毒载体转染HSC-T6细胞 |
| 2.2.2 Western blot技术检测Ptgs2基因表达 |
| 2.2.3 流式细胞术检测HSC-T6细胞的凋亡 |
| 2.2.4 转染图片和数据分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 慢病毒转染效果 |
| 3.2 Ptgs-2基因敲除效果检测 |
| 3.3 Ptgs2基因敲除后HSC-T6细胞凋亡检测 |
| 4.讨论 |
| 5.结论 |
| 参考文献 |
| 附录1 综述 |
| 参考文献 |
| 附录2 主要缩略词表 |
| 攻读硕士期间主要成果 |
| 致谢 |
（3）视黄酸调控人骨髓间充质干细胞成脂与成骨分化的机制研究（论文提纲范文）
| 论文创新点 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 1. 引言 |
| 1.1 视黄酸体内代谢、作用机制及功能 |
| 1.2 本课题研究的主要内容 |
| 1.3 本课题研究的主要方法 |
| 1.4 本课题研究目的和意义 |
| 2. 人骨髓间充质干细胞成脂分化的转录组学分析 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 3. 视黄酸调控人骨髓间充质干细胞成脂与成骨分化的功能研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 4. 视黄酸作用于人骨髓间充质干细胞成脂与成骨分化过程的转录组学研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 参考文献 |
| 读博期间发表的论文 |
| 致谢 |
（4）全反式维甲酸在宫腔粘连模型中抗子宫内膜纤维化作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 全反式维甲酸抗子宫内膜纤维化的体外实验研究 |
| 1. 目的和意义 |
| 2. 材料与方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 第二章 全反式维甲酸对宫腔粘连模型形成的预防作用及机制研究 |
| 1. 目的和意义 |
| 2. 材料与方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 第三章 全反式维甲酸对宫腔粘连模型的治疗作用及机制研究 |
| 1. 目的和意义 |
| 2. 材料与方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 全文小结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
| 缩略语词汇表 |
| 致谢 |
（5）全反式视黄酸对3T3-L1前脂肪细胞增殖与分化的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩写词表 |
| 引言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第1章 前脂肪细胞的分化 |
| 1.1 脂肪细胞的起源 |
| 1.2 前脂肪细胞诱导分化的过程 |
| 1.3 前脂肪细胞分化过程中的形态变化 |
| 1.4 前脂肪细胞分化过程中的转录调控因子 |
| 1.5 前脂肪细胞分化过程中涉及脂肪合成和代谢的酶 |
| 1.6 新发现的涉及前脂肪细胞分化的脂肪因子 |
| 1.7 脂肪细胞分化过程中的其他调控因素 |
| 第2章 全反式视黄酸在脂肪细胞中作用的研究进展 |
| 2.1 ATRA 化学结构、生理功能、体内代谢及其受体 |
| 2.2 视黄酸的作用机理 |
| 2.3 ATRA 对脂肪细胞作用的研究概况 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第1章 ATRA 对 3T3-L1 前脂肪细胞增殖和分化的影响 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 试验数据处理 |
| 1.4 结果 |
| 1.5 讨论 |
| 1.6 小结 |
| 第2章 ATRA 对 3T3-L1 前脂肪细胞分化相关基因表达的影响 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 试验数据处理 |
| 2.4 结果 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表论文及研究成果 |
| 导师简介 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
（6）810nm半导体激光照射对小鼠皮肤胶原影响的机制研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 观察经810nm激光照射后皮肤的外观表现和组织结构的改变 |
| 引言 |
| 研究对象和方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 810nm激光不同能量照射对Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达的影响 |
| 引言 |
| 实验方法 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 检测810nm激光不同能量照射胶原蛋白蛋白质水平的变化 |
| 引言 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 讨论与展望 |
| 参考文献 |
| 综述一：皮肤老化的相关回顾 |
| 参考文献 |
| 综述二：光老化的分子机制 |
| 参考文献 |
| 在校期间论文发表情况和参加科研工作情况说明 |
| 致谢 |
（7）RNAi沉默COX-2对HSC细胞动力学及脂质代谢的影响（论文提纲范文）
| 主要英文缩略语索引 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 绪言 |
| 参考文献 |
| 第一章 COX-2 基因 shRNA 干扰载体的构建及抗肝纤维化作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二章 RNAi 沉默 COX-2 对 HSC 基因表达谱的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三章 RNAi沉默COX-2对HSC细胞动力学及相关基因表达影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第四章 RNAi沉默COX-2对HSC脂肪代谢及相关基因表达的影响 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述一 |
| 参考文献 |
| 综述二 |
| 参考文献 |
| 读博期间发表的主要论文及科研项目 |
| 致谢 |
（9）全反式维甲酸对猪脂肪细胞增殖分化与凋亡的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一部分 文献综述 |
| 第一章 脂肪细胞的分化及其调控研究 |
| 1.1 脂肪细胞的起源和分化过程 |
| 1.2 脂肪细胞分化过程中的形态变化 |
| 1.3 脂肪细胞分化的分子标志 |
| 1.3.1 早期标志 |
| 1.3.2 晚期标志 |
| 1.4 促进脂肪细胞分化的转录因子和相关蛋白 |
| 1.4.1 PPAR 家族 |
| 1.4.2 C/EBP 家族 |
| 1.4.3 螺旋-环-螺旋转录因子家族 |
| 1.4.4 其他相关蛋白 |
| 1.5 脂肪细胞分化的抑制因素 |
| 1.5.1 肿瘤坏死因子-α |
| 1.5.2 前脂肪细胞因子-1 |
| 1.5.3 C/EBP 未分化蛋白（CUP） |
| 1.5.4 其它可抑制脂肪细胞分化的物质 |
| 第二章 脂肪细胞凋亡的研究进展 |
| 2.1 细胞凋亡概述 |
| 2.1.1 细胞凋亡的形态特征 |
| 2.1.2 细胞变化的生化特征 |
| 2.2 脂肪细胞凋亡研究进展 |
| 2.2.1 与脂肪细胞凋亡相关的基因 |
| 2.2.2 与脂肪细胞凋亡相关的因子 |
| 2.3 与脂肪细胞凋亡有关的其他影响因素 |
| 2.3.1 cAMP 反应元件结合蛋白（CREB） |
| 2.3.2 半乳凝集素（galectins） |
| 2.4 脂肪细胞凋亡与肥胖 |
| 2.5 检测细胞凋亡的几种常用方法 |
| 2.5.1 形态学检测 |
| 2.5.2 DNA 降解的分析 |
| 2.5.3 流式细胞术分析（flow cytometry，FCM） |
| 第三章 全反式维甲酸在脂肪细胞中作用的研究进展 |
| 3.1 全反式维甲酸的化学结构、体内代谢及其受体的结构 |
| 3.1.1 全反式维甲酸的化学结构 |
| 3.1.2 全反式维甲酸的体内代谢 |
| 3.1.3 维甲酸受体的结构 |
| 3.2 ATRA 的作用机理 |
| 3.3 ATRA 对脂肪细胞作用的研究概况 |
| 3.3.1 ATRA 对前体脂肪细胞分化的影响 |
| 3.3.2 ATRA 对ES 细胞向脂肪细胞分化的影响 |
| 3.3.3 ATRA 对前体脂肪细胞凋亡的影响 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 第四章 全反式维甲酸对猪脂肪细胞增殖的影响 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 实验材料 |
| 4.1.2 实验方法 |
| 4.1.3 统计学分析 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 猪脂肪细胞MTT 比色结果 |
| 4.2.2 猪脂肪细胞生长曲线 |
| 4.3 讨论 |
| 第五章 全反式维甲酸对猪脂肪细胞分化的影响 |
| 5.1 实验材料与方法 |
| 5.1.1 实验材料 |
| 5.1.2 实验方法 |
| 5.1.3 统计学分析 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 前体脂肪细胞分化的形态学观察 |
| 5.2.2 油红O 染色提取法检测结果 |
| 5.2.3 基因表达 |
| 5.3 讨论 |
| 第六章 全反式维甲酸对猪前体脂肪细胞凋亡的影响 |
| 6.1 材料与方法 |
| 6.1.1 实验材料 |
| 6.1.2 实验方法 |
| 6.1.3 统计学分析 |
| 6.2 实验结果与分析 |
| 6.2.1 吖啶橙染色结果 |
| 6.2.2 流式检测结果 |
| 6.2.3 基因表达 |
| 6.3 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（10）类胡萝卜素对成骨细胞代谢的调控研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略语 |
| 前言 |
| 研究背景 |
| 特色与创新 |
| 实验思路与技术路线 |
| 第一部分 类胡萝卜素的提取、分离、纯化研究 |
| 1.材料与仪器 |
| 2.实验方法 |
| 3.结果与讨论 |
| 4.结论 |
| 第二部分 类胡萝卜素抗氧化实验 |
| 2.1 动物整体水平抗氧化实验 |
| 1.材料与仪器 |
| 2.实验方法 |
| 3.结果与讨论 |
| 4.结论 |
| 2.2 细胞水平抗氧化实验 |
| 1.材料与仪器 |
| 2.方法 |
| 3.结果与讨论 |
| 4.结论 |
| 2.3 分子水平抗氧化实验 |
| 1.材料与仪器 |
| 2.方法 |
| 3.结果与讨论 |
| 4.结论 |
| 第三部分 不同类胡萝卜素对成骨细胞生长与分化的影响 |
| 1.材料与仪器 |
| 2.方法 |
| 3.结果与讨论 |
| 4.结论 |
| 结论 |
| 展望 |
| 文献综述 |
| 1 类胡萝卜素的研究进展 |
| 2 活性氧与骨代谢的关系 |
| 3 骨折愈合过程中细胞因子基因表达研究进展 |
| 4 Vitamin A、Vitamin D与成骨细胞的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 学习期间(2005-2007)发表论文 |
四、全反式视黄酸对人α1(Ⅰ)前胶原启动子活性的作用（论文参考文献）
- [1]基于lncRNA-H19探究双氢青蒿素调控肝星状细胞脂滴代谢抗肝纤维化的分子机制[D]. 王志敏. 南京中医药大学, 2020(08)
- [2]CRISPR/Cas9敲除Ptgs2对肝星状细胞凋亡的影响[D]. 王永照. 湖南师范大学, 2019(01)
- [3]视黄酸调控人骨髓间充质干细胞成脂与成骨分化的机制研究[D]. 曹俊. 武汉大学, 2017(06)
- [4]全反式维甲酸在宫腔粘连模型中抗子宫内膜纤维化作用及机制研究[D]. 胡海燕. 南方医科大学, 2017(11)
- [5]全反式视黄酸对3T3-L1前脂肪细胞增殖与分化的影响[D]. 王大鹏. 吉林大学, 2015(08)
- [6]810nm半导体激光照射对小鼠皮肤胶原影响的机制研究[D]. 葛明盖. 第二军医大学, 2015(07)
- [7]RNAi沉默COX-2对HSC细胞动力学及脂质代谢的影响[D]. 阳学风. 南华大学, 2012(11)
- [8]维生素A营养对钙磷代谢的调节作用及其机制[A]. 闫素梅,郭晓宇. 饲料营养研究进展（2010）, 2010
- [9]全反式维甲酸对猪脂肪细胞增殖分化与凋亡的影响[D]. 吕真. 西北农林科技大学, 2007(06)
- [10]类胡萝卜素对成骨细胞代谢的调控研究[D]. 裴凌鹏. 中国中医科学院, 2008(01)